流式细胞磁珠微阵列法检测血清中细胞因子水平在稳定期和急性加重期哮喘中的意义

 目的   探讨流式细胞磁珠微阵列法(cytometric beads array,CBA)检测血清中细胞因子水平在稳定期和急性加重期哮喘中的意义。
方法   纳入慢性持续期哮喘40例,急性发作期哮喘22例,健康人 18例。抽取外周血2 mL,采用CAB法检测外周血清中细胞因子水平,并分析各细胞因子特征及与临床数据的相关性。全自动血细胞及生化仪检测血常规,C反应蛋白和降钙素原。结果   定制含7种细胞因子微球(分别为IL-5,IL-6,IL-10,IL-13,IL-17,TNF-α,IFN-γ)的CBA试剂盒。与健康人相比,7种细胞因子在慢性持续期哮喘无明显改变。急性发作期哮喘细胞因子升高分为5种亚群,分别为IL-6升高型(22.8%)、IL-6/TNF-α双高型(13.6%)、IL-5升高型(31.8%)、IL-17升高型(占13.6%)及细胞因子正常型(占18.2%)。其中,IL-6、TNF-α明显升高,较健康人分别升高了6.28~12倍和17.3倍。IL-6升高型、IL-6/TNF-α升高型与白细胞及C反应蛋白呈正相关(R2=0.63,R2=0.67;P<0.05)。结论   CBA法可快速检测哮喘血清标本的多种细胞因子水平,细胞因子在慢性持续期无明显升高,但IL-6、TNF-α、WBC和CRP的综合指标有助于判断由细菌感染诱发的急性加重,并快速指导抗生素的使用。       

吡格列酮能部分抑制2型糖尿病大鼠肝脏微粒体细胞色素P450活性

目的:探讨吡格列酮对糖尿病大鼠肝脏微粒体细胞色素P450 (CYP450)活性水平的影响。方法:40只大鼠随机均分为正常对照组、糖尿病组、低剂量(3 mg/kg)吡格列酮组、高剂量(6 mg/kg)吡格列酮组(n=10)。除正常对照组外,其余各组给予高脂饲料喂养4周,采用链脲佐菌素(50 mg/kg)腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。造模成功后,低、高剂量吡格列酮组大鼠给予相应剂量吡格列酮灌胃治疗2周,提取大鼠肝脏微粒体并检测CYP450活性水平,同时进行大鼠体质量和血糖指标的检测。结果:与正常对照组相比,糖尿病组大鼠血糖升高(P0.01),CYP450活性水平升高(P0.05),体质量下降(P0.01)。与糖尿病组相比,吡格列酮灌胃2周期间,大鼠血糖浓度随吡格列酮浓度升高显著降低(P0.01),低、高剂量吡格列酮组大鼠肝微粒体CYP450水平均明显降低(P0.01),体质量明显升高(P0.05)。相关分析显示,CYP450活性水平与大鼠血糖正相关(r=0.598,P0.01),而与大鼠体质量无明显相关性。结论:吡格列酮对糖尿病大鼠肝脏微粒体CYP450酶活性有显著抑制作用,能改善其高血糖状态,增加大鼠体质量。     

组蛋白脱乙酰酶2-核转录因子-κB/激活蛋白-1介导的重度哮喘对糖皮质激素不敏感的分子机制

 目的 探讨重度哮喘患者对糖皮质激素不敏感的分子机制,尤其从糖皮质激素/糖皮质激素受体（glucocorticoid/glucocorticoid receptor,GC/GR）及组蛋白脱乙酰酶2（histone deacetylase 2,HDAC2）及其下游的炎性转录因子途径进行研究。方法 临床招募健康对照者12例,轻中度哮喘患者12例,重度哮喘患者10例,收集其外周血,进行地塞米松（dexamethasone,Dex）抑制IL-8释放试验,检测重度哮喘患者外周血单个核细胞（peripheral blood molecule cells,PBMCs）是否存在激素敏感性下降。通过Western blot和细胞免疫荧光染色法检测PBMCs的GRα蛋白质水平及跨膜转运情况。HDAC2活性试剂盒检测PBMCs核蛋白的HDAC2活性,Western blot检测磷酸化NF-κB、激活蛋白1（activating protein-1,AP-1）的亚基磷酸化c-Jun及磷酸化c-Fos的水平。结果 重度哮喘患者PBMCs在TNFα诱导IL-8释放实验中表现出对Dex敏感性下降;GR总蛋白质水平虽然代偿性升高,但GRα水平下降且向核内转移减弱;HDAC2活性降低,炎性转录因子NF-κB、AP-1亚基被激活。结论 重度哮喘患者的PBMCs中存在激素不敏感,可能是通过HDAC2-NF-κB/Ap-1介导的炎症通路引起了GRα表达量下降和转运能力降低。     

第三代流式细胞分选仪及96孔板分选单个细胞的方法及参数优化

目的:用第三代流式细胞分选仪比较不同直径喷嘴分选的单细胞的得率及细胞活性,进一步完善单细胞微孔板分选的参数设置及条件优化。方法:用FACSAriaⅢ流式细胞分选仪及96孔板对Raji细胞、A549、DT 40、RAW 264.7细胞系进行单细胞分选,分别采用70μm、100μm和130μm喷嘴分选,比较分选后单细胞得率及克隆形成率。结果:在单细胞分选模式下,用3种不同直径喷嘴及96孔板分选后的单细胞得率为86.55%~93.44%,即96孔板有单细胞的孔数为84~92孔;分选后的单个细胞培养7d后,经70μm、100μm和130μm喷嘴分选的单细胞克隆孔数分别为31~52孔、49~70孔、58~78孔。结论:进行单细胞微孔板分选时,在精确调节及优化实验参数的前提下,为了保证单细胞的活性,应优先选择100μm或130μm喷嘴。     

姜黄素抑制人胃腺癌细胞增殖及对细胞周期影响的研究

 目的　研究姜黄素对人胃腺癌细胞BGC 82 3体外生长及细胞周期的影响。方法　应用倒置显微镜、透射电镜观察细胞形态及超微结构 ,MTT法检测姜黄素对细胞的增殖抑制率 ,流式细胞仪 (FCM )进行细胞周期时相分析。结果　姜黄素可使细胞明显变圆 ,体积缩小 ,脱壁细胞增多 ,以及核浓缩、核碎裂等凋亡特征性改变 ;姜黄素明显抑制人胃腺癌BGC 82 3细胞的增殖 ,2 4h、4 8h的IC50 分别为 2 6 .2、2 4 .7μmol/L ;流式细胞仪检测显示姜黄素主要使细胞周期阻滞于S、G2 /M期。结论　姜黄素明显抑制人胃腺癌BGC 82 3细胞的增殖并能诱导凋亡 ,其机制可能与细胞的S、G2 /M期阻滞有关。