流式细胞磁珠微阵列法检测血清中细胞因子水平在稳定期和急性加重期哮喘中的意义

 目的   探讨流式细胞磁珠微阵列法(cytometric beads array,CBA)检测血清中细胞因子水平在稳定期和急性加重期哮喘中的意义。
方法   纳入慢性持续期哮喘40例,急性发作期哮喘22例,健康人 18例。抽取外周血2 mL,采用CAB法检测外周血清中细胞因子水平,并分析各细胞因子特征及与临床数据的相关性。全自动血细胞及生化仪检测血常规,C反应蛋白和降钙素原。结果   定制含7种细胞因子微球(分别为IL-5,IL-6,IL-10,IL-13,IL-17,TNF-α,IFN-γ)的CBA试剂盒。与健康人相比,7种细胞因子在慢性持续期哮喘无明显改变。急性发作期哮喘细胞因子升高分为5种亚群,分别为IL-6升高型(22.8%)、IL-6/TNF-α双高型(13.6%)、IL-5升高型(31.8%)、IL-17升高型(占13.6%)及细胞因子正常型(占18.2%)。其中,IL-6、TNF-α明显升高,较健康人分别升高了6.28~12倍和17.3倍。IL-6升高型、IL-6/TNF-α升高型与白细胞及C反应蛋白呈正相关(R2=0.63,R2=0.67;P<0.05)。结论   CBA法可快速检测哮喘血清标本的多种细胞因子水平,细胞因子在慢性持续期无明显升高,但IL-6、TNF-α、WBC和CRP的综合指标有助于判断由细菌感染诱发的急性加重,并快速指导抗生素的使用。       

慢性阻塞性肺疾病激素不敏感与糖皮质激素受体核内转移的相关性

 目的  研究慢性阻塞性肺疾病 (chronic obstructive pulmonary disease,COPD)对糖皮质激素不敏感是否与糖皮质激素受体 (glucocorticoids receptor,GRα)的核内转移有关。方法  将来自12例健康人、15例轻中度哮喘患者和15例COPD患者的人外周血单个核细胞 (peripheral blood molecule cells,PBMC)进行体外培养。ELISA方法检测其IL-8蛋白质水平,并计算地塞米松 (Dex)半抑制浓度。PBMC在Dex中培养0.5~6 h,通过Western blot检测GRα蛋白质水平,GRα的核内转移则通过免疫荧光和共聚焦显微镜来观测和分析评估。结果  COPD患者PBMC较轻中度哮喘患者和健康志愿者对Dex相对不敏感。Dex半抑制率 (IC50Dex)与糖皮质激素受体GRα核内转移呈负相关 (r=-0.54,P=0.000 8)。Dex可诱导增加各组PBMC中的总GRα,但GRα胞内分布各组间存在差异。Dex可明显增加健康人及哮喘患者核内的GRα,但并未增加COPD患者核内GRα。健康人及哮喘患者的PBMC中,Dex预处理能显著抑制TNF-α诱导的IL-8分泌,而在COPD患者的PBMC中这种抑制作用不明显。结论  COPD对糖皮质激素的不敏感与GRα核内转移有关。GRα核内转移受抑制可能是造成糖皮质激素在COPD患者中发挥抑制炎性作用欠佳的原因之一。     

比较两种白细胞介素27 预防给药对哮喘小鼠气道炎症和STAT1 磷酸化损伤的改善

目的:探索预防性IL-27 滴鼻给药治疗哮喘小鼠气道炎症的最佳干预方式,并直接从组织蛋白水平进行相关研究。方法:将96 只雌性C57/6J 小鼠随机分成对照组、哮喘组、IL-27 滴鼻预防组玉和IL-27 滴鼻预防组域。在卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏与滴鼻激发诱导的小鼠哮喘模型基础上,加用IL-27 干预,一种为“致敏前IL-27 小剂量、多次预防模型冶,一种为“致敏后激发前IL-27 小剂量、多次预防模型冶。取半数小鼠激发后处死,做气道炎症水平评估;取半数小鼠,激发前一天处死进行肺组织信号转导与转录激活子1(STAT1)和STAT1 磷酸化水平的Western blot 检测。结果:致敏前IL-27 小剂量、多次预防给药,可以明显降低哮喘小鼠BAL 中IL-5 和IL-13 的水平(P<0.05),抑制支气管及血管周围的炎症细胞浸润,炎症评分明显低于哮喘组(P<0.05),而激发前致敏后给药则无明显的统计学意义(P>0.05)。哮喘小鼠体内STAT1 的磷酸化在激发前就已明显受损,致敏前的IL-27 给药能扭转这种损伤,而激发前致敏后给药则不能。结论:致敏前IL-27 小剂量、多次预防给药通过逆转哮喘小鼠体内STAT1 磷酸化的受损能明显改善哮喘小鼠的气道炎症,而致敏后激发前的小鼠则由于在致敏阶段STAT1 磷酸化就已受损而对IL鄄27 的作用产生耐受,这种耐受可能是由于致敏后小鼠气道的CD4+ T 细胞就已大部分转化为Th2 细胞。