流式细胞磁珠微阵列法检测血清中细胞因子水平在稳定期和急性加重期哮喘中的意义

 目的   探讨流式细胞磁珠微阵列法(cytometric beads array,CBA)检测血清中细胞因子水平在稳定期和急性加重期哮喘中的意义。
方法   纳入慢性持续期哮喘40例,急性发作期哮喘22例,健康人 18例。抽取外周血2 mL,采用CAB法检测外周血清中细胞因子水平,并分析各细胞因子特征及与临床数据的相关性。全自动血细胞及生化仪检测血常规,C反应蛋白和降钙素原。结果   定制含7种细胞因子微球(分别为IL-5,IL-6,IL-10,IL-13,IL-17,TNF-α,IFN-γ)的CBA试剂盒。与健康人相比,7种细胞因子在慢性持续期哮喘无明显改变。急性发作期哮喘细胞因子升高分为5种亚群,分别为IL-6升高型(22.8%)、IL-6/TNF-α双高型(13.6%)、IL-5升高型(31.8%)、IL-17升高型(占13.6%)及细胞因子正常型(占18.2%)。其中,IL-6、TNF-α明显升高,较健康人分别升高了6.28~12倍和17.3倍。IL-6升高型、IL-6/TNF-α升高型与白细胞及C反应蛋白呈正相关(R2=0.63,R2=0.67;P<0.05)。结论   CBA法可快速检测哮喘血清标本的多种细胞因子水平,细胞因子在慢性持续期无明显升高,但IL-6、TNF-α、WBC和CRP的综合指标有助于判断由细菌感染诱发的急性加重,并快速指导抗生素的使用。       

TGF-β1调控肺泡上皮细胞PI3K亚基构成变化的研究

目的探讨肺泡上皮细胞（AECs）中PI3K亚基的表达情况和TGF-茁1是否可以调控PI3K亚基的构成变化。方法采用实时定量PCR法检测AECs中PI3K亚基mRNA的表达情况,予5ng/mlTGF-茁1刺激A549细胞0、3、6、12、24和48h不同时间点,实时定量PCR法检测PI3K亚基mRNA的表达变化,Westernblot法检测PIK3CD蛋白表达水平。结果AECs中Ⅰ型PI3K催化亚基以表达PIK3CA、PIK3CB和PIK3CD为主,Ⅰ型PI3K调节亚基以表达PIK3R1、PIK3R2和PIK3R3为主,Ⅱ型PI3K亚基和Ⅲ型PI3K亚基以表达PIK3R4、PIK3C3、PIK3C2A和PIK3C2B为主。TGF-茁1刺激可以调控Ⅰ型PI3K催化亚基中的PIK3CDmRNA和蛋白的表达呈时间依赖性升高。结论AECs中Ⅰ型PI3K亚基、Ⅱ型PI3K亚基和Ⅲ型PI3K亚基均有不同程度表达,TGF-茁1经调控PIK3CD的表达导致Ⅰ型PI3K催化亚基的构成变化。     

基质蛋白CCN1与肺部疾病的研究进展

正富半胱氨酸蛋白61(cysteine-rich angiogenic inducer 61,Cyr61/CCN1)是即刻早期基因(early growth response gene,Egr)编码的富含半胱氨酸的分泌型基质蛋白,属于CCN家族成员之一。CCN家族包括CCN1、结缔组织生长因子、肾母细胞瘤过度表达基因、Wnt诱导分泌蛋白(Wnt-induced secreted protein,     

CCN1在脂多糖诱导急性肺损伤中的表达调控和在炎症反应中的作用

目的:体内观察富半胱氨酸蛋白61(CYR61/CCN1)在正常肺组织中的表达定位和在脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤中的表达变化,体外研究LPS调控CCN1表达的分子机制和CCN1在LPS诱导炎症介质表达中的作用。方法:分别通过免疫组化(IHC)染色及免疫荧光法观察CCN1在小鼠肺组织和气道上皮细胞16HBE中的表达定位;气道滴注LPS建立小鼠急性肺损伤模型,IHC观察CCN1在肺组织中的表达变化;体外研究中,分别予气道上皮16HBE细胞以ERK1/2、JNK、P38和PI3K信号通路特异性抑制剂预处理2 h后加入LPS刺激,通过RT-qPCR和Western blot检测CCN1的mRNA和蛋白表达变化;分别通过CCN1-siRNA和重组CCN1蛋白刺激16HBE细胞,qPCR检测炎症介质白细胞介素6(IL-6)、IL-8、转化生长因子β(TGF-β)和血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA水平。结果:CCN1在正常肺组织中以气道上皮表达为主,在LPS诱导的急性肺损伤小鼠气道上皮细胞中CCN1表达升高;LPS可刺激16HBE细胞中CCN1的表达水平升高,其中ERK1/2、JNK、P38和PI3K信号通路特异性抑制剂可以不同程度逆转LPS诱导的CCN1表达升高。重组CCN1蛋白可以诱导16HBE细胞中IL-6、IL-8、TGF-β和VEGF的mRNA合成,干扰CCN1可以部分逆转LPS刺激后IL-6、IL-8、TGF-β和VEGF的mRNA合成。结论:气道上皮来源的CCN1在急性肺损伤中表达升高,其表达调控涉及ERK1/2、JNK、P38和PI3K信号通路;CCN1在介导LPS诱导的炎症介质表达过程中发挥了重要作用。本研究为未来急性肺损伤诊治的潜在靶点提供了一定的理论基础。     

NOX-4调控PI3K信号通路参与TGF-β1诱导肺癌细胞表达I型胶原蛋白

 目的：研究NADPH氧化酶4（NOX-4）调控PI3K信号通路在转化生长因子β1（TGF-β1）诱导肺癌细胞表达I型胶原蛋白（collagen I）的作用及分子机制。方法：体外培养人肺癌A549细胞,予TGF-β1刺激后,观察NOX家族和collagen 家族的mRNA和蛋白表达的变化,以及PI3K class I催化亚基的表达和PI3K信号通路活化的变化;NOX-4抑制剂二亚苯基碘鎓（DPI）预先处理肺癌细胞,观察TGF-β1刺激后 collagen I的mRNA和蛋白表达的变化以及PI3K class I催化亚基表达和PI3K信号通路活化。结果：TGF-β1可以诱导肺癌细胞中NOX-4和collagen I的mRNA和蛋白表达升高,并诱导PI3K class I催化亚基中PIK3CD表达升高和PI3K信号通路的活化。NOX-4抑制剂DPI可以抑制TGF-β1诱导的collagen I表达升高;抑制NOX-4并不影响TGF-β1诱导的PI3K催化亚基PIK3CD表达,但可以降低TGF-β1诱导PI3K信号通路的活化程度。结论：NOX-4经调控PI3K信号通路的活化参与了TGF-β1诱导肺癌细胞表达collagen I的分子机制。TGF-β1/NOX-4/PI3K信号通路轴在肺癌细胞collagen I的表达中发挥了调控作用。     

慢性阻塞性肺疾病激素不敏感与糖皮质激素受体核内转移的相关性

 目的  研究慢性阻塞性肺疾病 (chronic obstructive pulmonary disease,COPD)对糖皮质激素不敏感是否与糖皮质激素受体 (glucocorticoids receptor,GRα)的核内转移有关。方法  将来自12例健康人、15例轻中度哮喘患者和15例COPD患者的人外周血单个核细胞 (peripheral blood molecule cells,PBMC)进行体外培养。ELISA方法检测其IL-8蛋白质水平,并计算地塞米松 (Dex)半抑制浓度。PBMC在Dex中培养0.5~6 h,通过Western blot检测GRα蛋白质水平,GRα的核内转移则通过免疫荧光和共聚焦显微镜来观测和分析评估。结果  COPD患者PBMC较轻中度哮喘患者和健康志愿者对Dex相对不敏感。Dex半抑制率 (IC50Dex)与糖皮质激素受体GRα核内转移呈负相关 (r=-0.54,P=0.000 8)。Dex可诱导增加各组PBMC中的总GRα,但GRα胞内分布各组间存在差异。Dex可明显增加健康人及哮喘患者核内的GRα,但并未增加COPD患者核内GRα。健康人及哮喘患者的PBMC中,Dex预处理能显著抑制TNF-α诱导的IL-8分泌,而在COPD患者的PBMC中这种抑制作用不明显。结论  COPD对糖皮质激素的不敏感与GRα核内转移有关。GRα核内转移受抑制可能是造成糖皮质激素在COPD患者中发挥抑制炎性作用欠佳的原因之一。     

大气颗粒物急性暴露对C57BL/6小鼠肺脏病理改变和气道上皮细胞IL-6和IL-8表达的影响

目的:探讨大气颗粒物(PM)急性暴露下C57BL/6小鼠肺脏的病理改变和气道上皮细胞炎症介质白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素8(IL-8)分泌的分子机制。方法:选取雄性C57BL/6小鼠随机分为空白对照组和PM实验组,每组10只:PM实验组连续2 d经气管滴注PM悬浮液,建立PM短期暴露的小鼠模型;空白对照组连续2 d经气管滴注PBS。获取肺组织进行HE染色和PAS染色以评估组织病理变化;获取支气管肺泡灌洗液(BALF),检测IL-6和IL-8的表达。建立PM刺激人气道上皮细胞的体外细胞模型:200 mg/L的PM刺激BEAS-2B细胞,于3、6、12和24 h时点检测IL-6和IL-8的mRNA表达;25、50、100、200和400 mg/L的PM刺激BEAS-2B细胞24 h,检测IL-6和IL-8蛋白的分泌;200 mg/L的PM刺激BESA-2B细胞5、10和15 min,检测PI3K信号通路相关蛋白的变化;预先给予5μmol/L PI3K抑制剂LY294002干预0.5 h,再用200 mg/L的PM刺激BESA-2B细胞15 min,检测PI3K信号通路相关蛋白的变化。结果:在体内动物模型中,与空白对照组相比,PM组小鼠气道周围可见炎症细胞浸润,气道上皮细胞变厚,BALF中IL-6和IL-8显著升高(P<0.01)。在体外细胞模型中,与空白对照组相比,PM刺激可引起BEAS-2B细胞中IL-6和IL-8的mRNA表达和蛋白分泌(P<0.01),同时能显著提高PI3K信号通路的磷酸化水平(P<0.01),PI3K抑制剂LY294002能部分逆转PM诱导的PI3K信号通路的磷酸化(P<0.05),同时显著逆转PM诱导的IL-6和IL-8蛋白分泌(P<0.01)。结论:本研究的动物实验揭示了PM急性暴露下C57BL/6小鼠肺脏以气道炎症为主的病理改变,体外细胞实验揭示PI3K信号通路介导了PM诱导的气道上皮细胞IL-6和IL-8分泌。     

PM诱导支气管上皮细胞炎症反应及内质网应激机制研究

目的探讨细颗粒物（PM）诱导气道炎症中支气管上皮细胞内质网应激（ERS）现象和氧化应激的调控机制。方法雄性C57BL/6小鼠用4mg/kgPM连续气道滴注2d,构建动物模型。获取空白组和PM组小鼠肺组织进行病理分级评分;采用Westernblot法检测肺组织葡萄糖调节蛋白前体78（GRP78）和CCAAT增强子结合蛋白（CHOP）的相对表达量,采用免疫组化法检测GRP78和CHOP的累计光密度值,采用硫代巴比妥酸（TBA）法测定肺组织中丙二醛（MDA）质量摩尔浓度。获取肺泡灌洗液,ELISA法检测IL-6、IL-8和前列腺素E2（PGE2）的分泌水平。用100、200、400mg/LPM和2.5mmol/LN-乙酰半胱氨酸（NAC）、200mg/LPM与支气管上皮细胞BEAS-2B共培养,构建细胞模型。检测各组细胞活性氧（ROS）变化。Westernblot法检测NAC干预下的BEAS-2B中GRP78和CHOP表达变化,ELISA法检测炎症介质分泌水平。结果气道滴注PM诱导C57BL/6小鼠支气管病理形态学改变,肺组织GRP78、CHOP表达升高（P＜0.05）,肺组织MDA质量摩尔浓度升高（P＜0.05）,伴随肺泡灌洗液中IL-6、IL-8和PGE2分泌增多（P＜0.05）。细胞模型中,PM作用下各组细胞ROS表达水平均升高（均P＜0.05）。NAC干预后细胞ROS表达水平降低（P＜0.05）,CHOP/GRP78相对表达量降低（P＜0.05）,IL-6、IL-8和PGE2分泌水平降低（P＜0.05）。结论PM诱导的支气管上皮细胞炎症中存在内质网应激现象,其调控机制为氧化应激。     

NOX-4调控PI3K信号通路参与TGF-β1诱导肺癌细胞表达Ⅰ型胶原蛋白

目的:研究NADPH氧化酶4(NOX-4)调控PI3K信号通路在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肺癌细胞表达Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)的作用及分子机制。方法:体外培养人肺癌A549细胞,予TGF-β1刺激后,观察NOX家族和collagen家族的mRNA和蛋白表达的变化,以及PI3K class I催化亚基的表达和PI3K信号通路活化的变化;NOX-4抑制剂二亚苯基碘鎓(DPI)预先处理肺癌细胞,观察TGF-β1刺激后collagen Ⅰ的mRNA和蛋白表达的变化以及PI3K class I催化亚基表达和PI3K信号通路活化。结果:TGF-β1可以诱导肺癌细胞中NOX-4和collagen Ⅰ的mRNA和蛋白表达升高,并诱导PI3K class I催化亚基中PIK3CD表达升高和PI3K信号通路的活化。NOX-4抑制剂DPI可以抑制TGF-β1诱导的collagen Ⅰ表达升高;抑制NOX-4并不影响TGF-β1诱导的PI3K催化亚基PIK3CD表达,但可以降低TGF-β1诱导PI3K信号通路的活化程度。结论:NOX-4经调控PI3K信号通路的活化参与了TGF-β1诱导肺癌细胞表达collagen Ⅰ的分子机制。TGF-β1/NOX-4/PI3K信号通路轴在肺癌细胞collagen Ⅰ的表达中发挥了调控作用。     

成纤维细胞生长因子10在肺损伤性修复中的研究进展

成纤维细胞生长因子(FGF)10来源于间充质细胞,介导间充质-上皮之间的信号转导,调控支气管-肺泡上皮细胞的增殖分化,在胚胎支气管-肺的形态发生过程中发挥重要调控作用.伴随组织修复和再生医学的兴起,FGF10在肺损伤中的修复能力开始受到关注,FGF10-FGF受体2b信号通路决定了FGF10靶向调控支气管-肺泡上皮的细...