流式细胞磁珠微阵列法检测血清中细胞因子水平在稳定期和急性加重期哮喘中的意义

 目的   探讨流式细胞磁珠微阵列法(cytometric beads array,CBA)检测血清中细胞因子水平在稳定期和急性加重期哮喘中的意义。
方法   纳入慢性持续期哮喘40例,急性发作期哮喘22例,健康人 18例。抽取外周血2 mL,采用CAB法检测外周血清中细胞因子水平,并分析各细胞因子特征及与临床数据的相关性。全自动血细胞及生化仪检测血常规,C反应蛋白和降钙素原。结果   定制含7种细胞因子微球(分别为IL-5,IL-6,IL-10,IL-13,IL-17,TNF-α,IFN-γ)的CBA试剂盒。与健康人相比,7种细胞因子在慢性持续期哮喘无明显改变。急性发作期哮喘细胞因子升高分为5种亚群,分别为IL-6升高型(22.8%)、IL-6/TNF-α双高型(13.6%)、IL-5升高型(31.8%)、IL-17升高型(占13.6%)及细胞因子正常型(占18.2%)。其中,IL-6、TNF-α明显升高,较健康人分别升高了6.28~12倍和17.3倍。IL-6升高型、IL-6/TNF-α升高型与白细胞及C反应蛋白呈正相关(R2=0.63,R2=0.67;P<0.05)。结论   CBA法可快速检测哮喘血清标本的多种细胞因子水平,细胞因子在慢性持续期无明显升高,但IL-6、TNF-α、WBC和CRP的综合指标有助于判断由细菌感染诱发的急性加重,并快速指导抗生素的使用。       

Mtb感染Ⅱ型肺泡上皮细胞来源外泌体通过miR-145对巨噬细胞极化的影响

目的　探讨结核分枝杆菌（Mtb）感染Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）来源外泌体（Exos）对巨噬细胞极化的影响。方法　实验1：体外培养AECⅡ和Mtb毒株H37Rv,用Mtb感染AECⅡ并分离Exos,分为AECⅡ组和Mtb-AECⅡ组;透射电子显微镜（TEM）和纳米粒子追踪分析（NTA）观察Exos形态,检测Exos的数量和大小;流式细胞术鉴定Exos表面特征标志物CD63、CD81和HSP70表达;BCA法检测Exos的蛋白质含量;miRNA微阵列检测2组间差异miRNA表达谱并进行验证;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-6和IL-10水平。实验2：将AECⅡ分为对照组、mimic-NC组、miR-145 mimic组、inhibitor-NC组、miR-145 inhibitor组,用过表达或沉默miR-145的慢病毒转染AECⅡ后用Mtb感染并分离Exos,实时荧光定量PCR（qPCR）检测转染后Mtb-AECⅡ Exos中miR-145水平;流式细胞术检测巨噬细胞M1型标志物（CD86）、M2型标志物（CD163）表达;qPCR检测巨噬细胞中miR-145、TNF-α、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶1（Arg-1）和IL-10的mRNA水平。结果　实验1：Mtb感染的AECⅡ分泌Exos为球形囊泡,直径约为100 nm;Exos中CD63、CD81、HSP70均呈阳性;与AECⅡ组相比,Mtb-AECⅡ组中Exos的数量和蛋白质含量、miR-145、IL-10水平增加（P＜0.05）,TNF-α和IL-6水平降低（P＜0.05）。实验2：与对照组相比,miR-145 mimic组Mtb-AECⅡ Exos中miR-145水平、CD163阳性巨噬细胞百分比及巨噬细胞中miR-145、Arg-1和IL-10 mRNA水平升高（P＜0.05）,CD86阳性巨噬细胞百分比、巨噬细胞中TNF-α mRNA、iNOS mRNA水平降低（P＜0.05）,miR-145 inhibitor组上述指标的变化与miR-145 mimic组相反。结论　Mtb感染AECⅡ来源Exos可能通过miR-145刺激巨噬细胞向M2型极化并抑制M1型极化,对抗炎症。     

无烟医院戒烟门诊患者远期戒断率分析

将2009年2月至2010年9月首诊于复旦大学附属中山医院吸烟及其相关疾病门诊的吸炯患者（133例）作为研究对象.对首次评估及24个月后的随访数据进行收集,观察戒烟门诊患者的戒烟情况,并应用logistic回模型进行远期戒烟成功预测指标分析.就诊的男性患者占99.2％,平均47岁,平均每日吸烟26支,平均吸烟史25年;57例（42.9％）为重度尼古丁依赖,76例（57.1％）24个月后成功随访,24个月持续戒断率26.3％（20例）;直系亲属是否吸炯可作为远期戒断成功的预测指标.     

外泌体与肺疾病的研究现状

外泌体是一种含多种生物活性蛋白、脂质、核酸成分的囊泡,已被陆续报道存在于各种体液.研究显示:外泌体能够参与机体免疫应答,参与各种疾病过程,包括各种肿瘤、中枢神经系统感染、心肌缺血再灌注损伤、肝损伤、急性肾损伤,以及哮喘和各种病原体感染.本文主要介绍有关外泌体与肺部疾病的研究现状和进展.     

活动性肺结核患者血清CXCL10及CXCR3表达与CD27+CD4+ T细胞比例的相关性分析

［摘要］　目的　分析活动性肺结核患者血清CXC趋化因子配体10（CXCL10）及其受体CXC趋化因子受体3（CXCR3）与外周血单个核细胞（PBMC）中CD27⁺CD4⁺ T细胞比例的相关性。方法　选择2019年4月至2021年4月河南省胸科医院收治的活动性肺结核患者100例（肺结核组）,另选择同期健康体检者96名作为对照组。应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测受试者血清CXCL10、CXCR3、干扰素-γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达水平。应用流式细胞仪检测PBMC中CD27⁺CD4⁺ T细胞水平。采用Pearson相关性分析探讨血清CXCL10、CXCR3水平与PBMC中CD27⁺CD4⁺ T细胞水平以及血清IFN-γ、TNF-α水平的相关性。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清CXCL10、CXCR3对活动性肺结核的诊断效能。结果　肺结核组患者血清CXCL10、CXCR3、IFN-γ、TNF-α水平均高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。肺结核组PBMC的CD27⁺CD4⁺ T细胞比例低于对照组,差异有统计学意义［（22.65±2.53）% vs （41.57±5.32）%;t=31.997,P=0.000］。Pearson相关性分结果显示,活动性肺结核患者血清CXCL10与CXCR3、IFN-γ、TNF-α水平呈正相关（P<0.05）,与PBMC中CD27⁺CD4⁺ T细胞比例呈负相关（P<0.05）。血清CXCR3水平与血清IFN-γ、TNF-α水平呈正相关（P<0.05）,与PBMC中CD27⁺CD4⁺ T细胞比例呈负相关（P<0.05）。ROC曲线分析结果显示,血清CXCL10、CXCR3均具有诊断活动性肺结核的应用价值（AUC=0.825,AUC=0.820;P<0.05）,联合两个指标可进一步提高诊断活动性肺结核的效能（AUC=0.938,P=0.000）,灵敏度和特异度分别为94.00%和91.70%。结论　活动性肺结核患者血清CXCL10及CXCR3水平上调,可能与CD27⁺CD4⁺ T细胞比例低有关,联合两者检测可辅助诊断活动性肺结核。     

利奈唑胺治疗重症结核性脑膜炎的疗效观察

目的探讨利奈唑胺用于治疗重症结核性脑膜炎患者的疗效及安全性。方法通过回顾性病例对照研究,观察MRC分级为Ⅱ类和Ⅲ类的17例重症结核性格脑膜炎患者,对照组为五联常规抗结核治疗患者,治疗组为在常规抗结核治疗基础上加用利奈唑胺组患者,比较两组患者治疗后的脑脊液指标变化情况及药物不良反应。结果经抗结核治疗治疗4周,治疗组患者脑脊液压力,同步血糖比值,白细胞计数,蛋白定量均较对照组的改善明显,两组比较有统计学意义(P0.05);25.0%患者发生可逆的利奈唑胺相关不良反应。结论重症结核性脑膜炎患者在常规抗结核治疗的基础上加用利奈唑胺进行治疗,能够显著改善患者的临床症状,提高疗效,且不良反应较小,可用于临床治疗。     

基于Janus激酶/信号转导和转录激活因子信号通路的乙胺丁醇片对肺结核大鼠模型的作用机制

目的 探讨乙胺丁醇片(EMB)对肺结核(PTB)大鼠的治疗作用及其作用机制是否与Janus激酶(JAK)/信号转导和转录激活因子(STAT)信号通路有关。方法 将60只SD大鼠按照随机数字表法分为对照组、PTB组、PTB+EMB组(30 mg/kg)、PTB+EMB+Colivelin(JAK/STAT通路激活剂)组(30 mg/kg+1 mg/kg),每组15只。除对照组外,其他组大鼠均通过注射0.2 ml 5 mg/ml的结核杆菌悬液构建PTB模型。建模成功后,进行连续4周(1次/d)的给药处理,检测大鼠在给药第1、14、28天时的体重变化;计数结核分枝杆菌菌落数;HE染色检测大鼠肺组织病理变化;ELISA法检测各组大鼠血清中白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α、IL-1β、γ干扰素水平;流式细胞术检测各组大鼠外周血中T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平;16S rRNA测序检测各组大鼠肠道菌群属水平的相对丰度;Western blot检测JAK/STAT通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,PTB组大鼠体重减轻(第14、28天时)、结核分枝杆菌菌落数增加,肺组织呈现出严重的病理学变化,血清中IL-6、肿瘤坏死因子-α、IL-1β水平、CD8+、肠道菌群中拟杆菌属、消化球菌属、梭状芽孢杆菌属、放线菌属、乳酸杆菌科、疣微菌科、韦荣球菌科相对丰度及肺组织中磷酸化JAK2、磷酸化STAT3蛋白均显著升高,CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、γ干扰素水平均显著降低(P均<0.001);与PTB组比较,PTB+EMB组大鼠体重增加(第14、28天时),结核分枝杆菌菌落数减少,肺组织病理损伤减轻,血清中IL-6、肿瘤坏死因子-α、IL-1β水平、CD8+、肠道菌群中拟杆菌属、消化球菌属、梭状芽孢杆菌属、放线菌属、乳酸杆菌科、疣微菌科、韦荣球菌科相对丰度及肺组织中磷酸化JAK2、磷酸化STAT3蛋白均显著降低,CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、γ干扰素水平均显著升高(P均<0.001);Colivelin减弱了EMB对肺结核大鼠模型感染的改善作用(P均<0.001)。结论 EMB可通过抑制JAK/STAT信号通路改善肺结核大鼠模型的感染。