鼠疫耶尔森氏菌Pla蛋白的分离纯化与质谱分析

目的建立一种从鼠疫耶尔森氏菌疫苗株EV76中分离纯化纤维蛋白酶原激活因子（Pla）的方法。方法采用超声破碎与硫酸铵盐析结合的方法初步提取Pla,经CHT陶瓷羟基磷灰石层析分离纯化,所获取的Pla进行质谱分析及Western blot实验。结果菌悬液超声破碎后上清以0~10%饱和硫酸铵沉淀,获得含有相对分子质量（Mr）约为31 000、35 000、37 000的3条Pla蛋白带,约占蛋白总量33%;CHT柱层析后,3条带约占蛋白总量80%。经质谱分析,在Mr约为31 000、35 000的条带中含有Pla,Pla单克隆抗体能特异性地识别该蛋白。结论采用超声破碎结合硫酸铵盐析的方法可从鼠疫菌中提取Pla,CHT柱层析可达到基本纯化,获得的样品经质谱分析和Western blot实验证实为Pla蛋白。     

云南省鹤庆县2017年分离鼠疫菌分子溯源

目的 了解2017年云南省鹤庆县新分离的鼠疫菌的基因分型,为该地的鼠疫防控提供科学依据。方法 采用差异片段（DFR）、规律成簇的间隔短回文重复序列（CRISPRs）和多位点可变数目串联重复序列分析（MLVA）3种方法对10株鹤庆县新分离鼠疫菌进行分型,并将10株鼠疫菌及邻近疫源地鼠疫菌株93株纳入聚类分析。结果 鹤庆鼠疫菌株与丽江鼠疫疫源地菌株具有相同的DFR型（Genomovar 05型）及CRISPRs型（Ca7簇,22型）,在MLVA聚类分析中,鹤庆鼠疫菌株与丽江野鼠鼠疫菌株位于同一个簇,两者之间仅有2个位点（N2117,M23）的差异。结论 2017年云南省鹤庆鼠疫菌株与丽江野鼠鼠疫疫源地菌株具有很高的同源性,鹤庆县疫情可能是丽江鼠疫进一步向南扩散的结果。     

云南省家、野两型鼠疫菌营养需求的比较试验

目的比较云南省家、野两型鼠疫菌的营养需求.方法采用固体平皿法,对云南省32株家、野两型鼠疫菌进行谷氨酸、苯丙氨酸营养需求研究.结果 21株家鼠鼠疫菌株中有19株对谷氨酸半依赖,2株对谷氨酸不依赖,21株均为苯丙氨酸依赖;11株野鼠鼠疫菌株中有3株对谷氨酸半依赖,8株对谷氨酸不依赖,11株均为苯丙氨酸依赖.结论云南省家、野两型鼠疫菌在营养需求上有交叉性.     

NICU高胆红素血症新生儿听力筛查

目的通过对NICU高胆红素血症新生儿进行听力筛查,发现NICU中高胆红素血症新生儿听力障碍发病情况。方法对我院2005年10月至2006年12月期间NICU收住的高胆红素血症新生儿用DPOAE模式进行初筛,对初筛未通过者用DPOAE+ABR进行复筛,复筛未通过者进行听力学评估及确诊。结果共筛查高胆红素血症178人,确诊(6月龄)5例,听力障碍发病率为2.96%。结论高胆红素血症是NICU新生儿听力障碍发病的一个高危因素。     

鼠疫菌纤溶酶原激活因子的分离纯化

目的 建立从人工培养的鼠疫菌中分离和纯化纤溶酶原激活因子(Plasminogen activator,Pla)的方法.方法 分别用超声破碎、尿素提取与硫酸铵盐析相结合的方法(简称超声法、尿素法)提取Pla,并分别用离子交换、凝胶过滤两步层析相结合的高效液相色谱和制备电泳纯化Pla,对提取、纯化的Pla进行纤溶酶原激活剂活性检测.结果 鼠疫菌超声破碎上清50%～60%饱和硫酸铵沉淀和尿素浸渍菌粉上清0～10%饱和硫酸铵沉淀,均获得了3条蛋白带[相对分子质量(Mr)约31×103、35×103、37×103].纤溶酶原激活剂活性检测两种方法获得蛋白的溶圈直径分别为6.5、7.2 mm.用高效液相色谱纯化的Pla主要由Mr约31×103、35×1033、37×103的3条蛋白带组成,纤溶酶原激活剂活性检测溶圈直径为5.0 mm.制备电泳纯化的Pla主要由Mr约31×103、35×103、37×103的3条蛋白带组成.条带所在位置还有其他一些低浓度蛋白存在,纤溶酶原激活剂活性检测无溶圈出现.结论 超声法和尿素法可以提取到Pla,后者经高效液相色谱和制备电泳可以达到基本纯化.     

应用PCR方法检测鼠疫现场标本的研究

目的用PCR方法检测疑似鼠疫现场标本,以建立准确、简便和快速的诊断技术。方法对采自疫源地的自毙鼠标本用两种方法提取DNA,进行caf1、pla基因检测和染色体标识基因检测。结果 2份样本均能检测到caf1、pla基因(与Yersinia pestis caf1、pla基因序列比对同源性达到99%以上)和4个染色体标识基因ypo 2087、ypo 2090、ypo2094、ypo 2102,试剂盒提取方式敏感性高于煮沸法。结论优化模板提取方式、提高扩增效率、质粒和染色体多基因检测,可以提高鼠疫PCR诊断技术的检出率。     

鼠疫耶尔森菌纤维蛋白溶解酶原激活因子的研究进展

鼠疫耶尔森菌纤维蛋白溶解酶原激活因子（Pla）是鼠疫菌特有的pPCP1质粒编码的细胞表面蛋白酶，介导了耶尔森菌外膜蛋白（YOPs）在体外的降解，具有温度依赖的纤溶酶原激活剂活性和凝固酶活性，可致纤溶酶原激活和α2抗纤溶酶失活，是鼠疫菌从皮下感染扩散到循环系统的重要毒力因子，是黏附素也是侵袭素，在鼠疫耶尔森菌致病过程中发挥重要作用。对Pla的研究将有助于进一步阐明鼠疫菌的致病机制，寻找更好的鼠疫诊断方法和防治措施。现对Pla的基因、活性、毒力研究近况进行综述。     

水盘法捕获地面游离蚤的效果评估

目的分析和评估水盘法捕获地面游离蚤的效果。方法选择云南省10个县(市、区)40个自然村的800户家庭作为研究对象。每个家庭放置10个加水的水盘于卧室、客厅、厨房等房间的地面,连续放置3个夜晚,每天早晨收集跳蚤。计算跳蚤捕获率并与先前使用粘蚤纸法捕获地面游离蚤的结果进行比较。结果在800个家庭放置8 000个水盘,有效收回7 974个水盘,3个夜晚实际放置23 922个水盘,捕获地面游离蚤2 420只,捕获率为10.12%。先前使用粘蚤纸法,地面游离蚤的捕获率为2.45%~4.93%。水盘法捕获地面游离蚤是粘蚤纸法的2.05~4.13倍。结论水盘法捕获地面游离蚤的效率优于粘蚤纸法,而且经济方便、易于操作,适于基层推广使用。     

剑川野鼠鼠疫疫源地鼠疫噬菌体的分离及其流行病学意义

目的 调查剑川野鼠鼠疫疫源地宿主动物中是否携带鼠疫噬菌体,并探讨其流行病学意义。方法 2017年1-6月采集剑川野鼠鼠疫疫源地4个曾流行过鼠疫乡镇6个自然村的鼠类标本,以鼠疫疫苗株EV76为饲养菌,采用双层平板法分离鼠疫噬菌体,并对分离结果进行流行病学分析,同时挑取部分噬菌体进行电镜扫描。结果 共获得641份标本（齐氏姬鼠334只,大绒鼠236只,其余71只）,分离到9株鼠疫噬菌体,总分离率1.40%;有4个疫点（白山母村、石龙村、新松村、大庆村）分离到了鼠疫噬菌体,另外2个点（长乐村、西门社区）未分到鼠疫噬菌体;9株鼠疫噬菌体中,8株分离自齐氏姬鼠,1株自大绒鼠;初次分离这些鼠疫噬菌体时,其噬斑在双层平板上表现为大（直径~2.0 mm）、中（~1.0 mm）及小（<0.5 mm）3种噬斑;4株有代表性噬菌体皆为肌尾病毒科噬菌体。结论 剑川野鼠鼠疫疫源地中普遍存在鼠疫噬菌体,齐氏姬鼠是主要的携带宿主,所分鼠疫噬菌体为肌尾病毒科噬菌体且具有多态性,值得进一步研究。     

脉冲场凝胶电泳技术简介及其在细菌分子分型中的应用

目前可用于细菌分子分型的方法较多,脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术以其重复性好、分辨力强的优势被作为细菌分子分型的“金标准”广泛应用;利用PFGE技术对细菌进行分型并分析细菌间分型结果的差异,可以有效地对疾病进行监测,追溯疾病的感染来源,明确感染途径,追溯其遗传特征,为细菌性疾病的预防与控制提供分子生物学证据.