云南省HIV-1 CRF01_AE毒株基因型耐药研究

目的 了解云南省HIV-1 CRF01_AE毒株的流行分布及基因型耐药情况。 方法 收集2018—2021年云南省抗病毒治疗失败的HIV/AIDS患者的人口学资料,采集患者血浆,逆转录聚合酶链反应扩增HIV-1 pol基因蛋白酶和逆转录酶区并进行序列测定,对基因型为CRF01_AE的序列进行耐药情况分析。结果 通过基因型耐药检测共获得967例亚型为CRF01_AE序列,其中男性682例（占70.5%）,耐药509例,耐药率为52.6%,异性性传播813例（占84.1%）,同性性传播95例（占9.8%）。同性性传播的耐药率最高,为65.3%;治疗时长<12个月的耐药率最低,为35.9%,36~<48个月耐药率最高,为58.1%。核苷类反转录酶抑制剂（NRTIs）耐药率为33.9%,非核苷类反转录酶抑制剂（NNRTIs）的耐药率为48.5%,蛋白酶抑制剂（PIs）的耐药率较低为1.3%。NRTIs类药物中阿巴卡韦（ABC）、恩曲他滨（FTC）和拉米夫定（3TC）耐药率较高,分别为为32.9%、32.4%和32.4%;NNRTIs类药物中奈韦拉平（NVP）和依非韦仑（EFV）耐药率较高,分别为47.6%和47.5%,均以高度耐药为主。一线治疗方案耐药率56.2%高于二线治疗方案耐药率29.5%,差异有统计学意义（P<0.001）。NRTIs耐药突变位点中,以M184V/I突变位点为主,突变率为30.0%;NNRTIs耐药突变位点中,以K103N/Q/S突变位点为主,突变率为28.1%;PIs耐药位点突变率相对较低,主要的耐药突变位点是L33F,突变率为3.7%。结论 云南省抗病毒治疗失败亚型CRF01_AE的患者耐药率有所降低,但部分地区及人群的耐药率仍较高,应加强对重点地区和人群的管理,加强耐药监测,对治疗失败的患者及时掌握耐药情况,合理调整治疗方案。     

蚤、蜱中巴尔通体的分离培养及检测鉴定

目的了解蚤、蜱在我国作为巴尔通体传播媒介的可能性，获得其自然状态下存在于吸血节肢动物中的证据。方法采集家猫、狗、牛及鼠类动物体表寄生蚤、蜱，采用含5％去纤维兔血脑心浸液（brain heart infusion，BHI）培养基置于35℃含5％ CO2培养箱中从蚤、蜱中分离巴尔通体，疑似菌落应用聚合酶链反应技术（Polymerase Chain Reaction，PCR）扩增巴尔通体特异基因片段，阳性产物测序并用同源性比较及系统发育分析等方法分析确定巴尔通体的亲缘关系。结果分别从猫栉首蚤、微小牛蜱中各分离出1株巴尔通体，用5对巴尔通体属特异性引物进行PCR反应，扩增产物均产生阳性目标带，证实为巴尔通体属微生物。序列同源性比较发现蚤、蜱分离株之间同源性较小，tRNA^Ile-tRNA^Ala地基因间隔区序列为58．2％、ftsZ基因序列为72．8％；这两株菌分别与云南鼠类宿主血液中分离的巴尔通体菌株RT222SM、RT221SM同源性最大，与其它已知巴尔通体同源性均较小。蚤培养物与RT222SM的tRNA^Ile-tRNA^Ala基因间隔区的同源性是77．9％、与ftsZ是96．2％；蜱培养物与RT221SM的tRNA^Ile-tRNA^Ala基因间隔区的同源性是99．4％，与云南鼠血中分离的Rf1561yn的gltA基因338bp核酸序列同源性为99．1％，基于gltA种系发育分析提示与Rfl561yn亲缘关系最近。结论从猫栉首蚤、微小牛蜱中分离培养出巴尔通体，为蚤、蜱作为巴尔通体传播媒介提供了线索，同时为在我国进一步开展媒介生物中巴尔通体感染情况调查提供了实验方法的参考依据。同源性搜索、比较及系统发育分析支持这2株巴尔通体与中国云南分离的巴尔通体基因型相似，而与国外的巴尔通体分离株亲缘关系较远。     

肠出血性大肠埃希菌O104:H4病原学及其防治研究进展

2011年5-7月在德国北部暴发一起肠出血性大肠埃希菌(enterohemorrhage,Escherichia coli,EHEC)O104:H4感染的疫情,该疫情从德国北部起始,很快就席卷整个德国并蔓延至欧洲、北美国家.EHEC O104:H4是新世纪以来出现的又一新发传染病,其致病性强,传播速度快,引起全世界的关注.迄今中国尚无此病的报道,但在全球化的今天,了解并充分防范已成共识.据此,该文就EHEC的病原学、快速检测法、所引起的主要疾病发病机制及临床症状、预防措施等方面的研究进展进行综述.     

鼠疫菌caf1基因特异性片段的克隆表达及其抗原与抗体反应

目的 克隆表达鼠疫菌caf1基因上的特异性片段并检测.方法 分别选取F1上C端(caf1-C)及N端(caf1-N)两段B细胞表位进行克隆表达;PCR扩增目的基因,并与表达质粒pET32a(+)进行连接,重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)并诱导表达;表达产物经Ni-NTA亲和层析柱纯化,并以Western-blot法检测其抗原与抗体反应.结果 分别诱导表达出大小为26000的Caf1-C和25000的Caf1-N两个片段,2个重组蛋白均以可溶形式存在,并与鼠疫免疫血清有良好的反应.结论 克隆表达出具有抗原与抗体反应的鼠疫菌F1抗原上的两段B细胞表位,为鉴定是否是F1位点交叉奠定了基础.     

双重式聚合酶链反应检测印鼠客蚤鼠疫菌的观察

为建立蚤类感染鼠疫的快速诊断方法，应用双重式聚合酶链反应（PL－FI－PCR）技术，对感染鼠疫菌的40只印鼠客蚤进行检验，同时单体拉胃培养作比较。结果显示细菌培养阳性22只，双重式聚合酶链反应阳性40只，阳性率后明显高于前，且特异性扩增带比较清晰、典型、稳定。提示双重式聚合酶链反应适用于蚤类等微小标本染带鼠疫菌的检测。     

胶体金标法快速检测鼠疫F1抗体的现场应用

目的了解胶体金标快速检测试剂盒检测鼠疫FI抗体的现场应用。方法按鼠疫快速诊断盒(胶体金标法)的使用说明进行,并与间接血凝微量法(IHA)进行比较。结果检测了来自云南家鼠鼠疫流行区和非流行区血清共335份,检出腺鼠疫病人血清阳性32份,与IHA法结果一致。结论胶体金标鼠疫FI抗体快诊盒诊断鼠疫简便、快速、特异、敏感,便于现场鼠疫监测应用。     

GIS RS GPS在山区钉螺调查中的初步应用

目的 探讨应用地理信息系统（GIS）、遥感系统（RS）和全球定位系统（GPS）技术对山区平坝型血吸虫病流行区钉螺分布进行调查的效果。方法利用GPS收集云南省洱源县新联行政村的钉螺分布沟渠数据，经差分后用RS、GIS软件和该区域遥感影像进行重叠，绘制高质量钉螺分布图，将钉螺调查数据链入电子螺情图，建立GIS数据库。结果绘制了新联行政村及其自然村的历史有螺沟渠分布图，初步建立了该村螺情GIS数据库。结论本方法在大山区平坝亚型流行区钉螺调查中有良好的应用价值。     

1978～2004年云南地方性暴发性心肌炎流行病学调查分析

目的寻找云南地方性暴发性心肌炎流行病学规律。方法回顾性调查和横断面调查相结合对1978~2004年疫情资料进行分析。结果(1)流行地区包括8个地、州、市,22个县区;(2)27年间共发生疫情86起,死亡267人;(3)病区特点:均为贫困山区或半山区,有67.6%的病区与克山病病区相重叠;(4)本病呈年度高发和季节高发,6~9月为主要流行季节;(5)发病人群以当地农民为主,青壮年为高发人群,女性略多于男性;(6)有明显的家庭聚集性。结论1991年后本病流行有明显的上升趋势;发病人群以青壮年为主,是家庭的主要劳动力;本病来势凶猛,发病突然,死亡突然,给救治带来了许多困难和问题,是病死率高的主要原因;监测防治不应只限于22个疫区县,应扩大防治范围。     

云南玉龙及古城区鼠疫自然疫源地判定及初步研究

目的确定云南玉龙县及古城区鼠疫自然疫源地的存在,提出防控策略。方法采用常规调查方法,通过血清学、细菌学、基因诊断等技术进行判定。结果共分离到5株鼠疫杆菌,均酵解甘油、麦芽糖、阿胶糖,不酵解鼠李糖、密二糖,脱氮试验阳性。均带有Pgm 、PstI 、FI 、Vwa 等毒力决定因子;疫区犬血清阳性率为23.5%;猫血清阳性率为26.7%。结论细菌学证实玉龙县为鼠疫自然疫源地,目前鼠疫流行处于活跃期;血清学证实古城区为新的鼠疫疫源区(县);阳性血清动物分布面积210km2,并有进一步扩散趋势;齐氏姬鼠及大绒鼠是本地区优势鼠种,玉龙绒鼠有局部分布。特新蚤指明亚种,方叶栉眼蚤为优势蚤种;分离的鼠疫菌与滇西纵谷型及滇闽居民区型菌株生化特性不同,与西藏北部青藏高原型鼠疫菌的生化特性接近。