HBV特异性核酶与HDV重组体的体外转录及切割活性研究

目的利用基因重组技术,用核酶基因置换HDV部分基因,分别用HBV特异性核酶(rRZ)和核酶-HDV重组体(rHDVRZA、rHDVRZB和rHDVRZC)研究体外转录与剪切HBV的活性。方法 将含有83lbp的HBV C基因片段的质粒pTA-HBV用BamHI消化成线性后,体外转录获取5’端32P标记靶HBV C RNA。将获得的3个核酶-HBV重组体rHDVRZA、rHDVRZB和rHDVRZC克隆于pGEM-T载体T7启动子下游进行非标记的大量转录。分别将rRZ、rHDVRZA、rHDVRZB和rHDVRZC与卫32P-HBV C RNA按一定比例和条件保温切割。结果 体外实验证明rRZ、rHDVRZA、rHDVRZB和rHDVRZC在37℃具有酶切活性。提示所设计的核酶-HDV重组体rHDVRZA和rHDVRZB中核酶结构正确。结论在HDV基因组不同位置插入核酶,能够维持酶正确结构的核酶-HDV具有体外特异性切割HBV的活性。     

一例普通轮状病毒腹泻患儿血中轮状病毒的检出及测序

目的探讨普通轮状病毒(RV)腹泻患儿病毒血症出现情况。方法套式-逆转录PCR检测血中RV,阳性PCR产物测序。结果 60例RV腹泻患儿中,检出1例病毒血症阳性者,检出率为1.67％,测序证实为RV序列,未见明显变异。结论普通RV腹泻患儿也可发生病毒血症。     

乙型肝炎病毒特异性核酶与丁型肝炎病毒重组体的体外转录及切？…

日的 研究乙型肝炎病毒特异性核酶体外转录及切割ＨＢＶ的活性。方法 将８１ｂｐ的ＨＢＶ Ｃ基因片段克隆于Ｔ载体Ｔ７启动子下游，＾３２Ｐ标记转录后作国靶ＲＮＡ（＾３２Ｐ－ｒＨＢＶ）。ｒＲ２，ｒＨＤＶＲＺＡ（插入有核酶结构的丁型肝炎病毒基因组重组体）和ｒＨＤＶＲＺＰ（部分ＨＤＶ基因组重组体）进行非标记的大量转录，转录产物经凝胶纯化后，与＾３２Ｐ－ｒＨＢＶ按一定比例和条件保温切割，电泳后放射自显影。     

献血者与血液透析患者TT病毒感染调查

目的 了解TTV在广东地区献血者与血液透析人群中的感染情况。方法 应用半巢式PCR对南方医院输血中心1998年注册的献血者与血液透析中心维持性血液透析病人进行TTV感染调查。结果 在103例献血者中有20例检出TTV，检出率为19％；86例血液透析病人中有48例检出TTV，检出率为55．8％。结论 我国献血者中存在较高的TTV感染率，血液透析病人中TTV感染率远远高于献血者，透析器污染和使用血制品可能是原因。     

SARS定点收治医院工作人员SARS冠状病毒感染的危险性调查

目的了解医院工作人员感染SARS病毒的危险性。方法对与SARS患者收治相关的工作人员进行问卷调查；用酶联免疫法检测SARS冠状病毒IgG抗体。结果发放调查问卷450份，收回问卷并采集血标本441人份。接受调查者全部按照防护规定进行个人防护。5例为SARS抗体IgG阳性，均为直接接触SARS病人和(或)与SARS病人标本或衣物直接接触者，比例为5／260；非直接接触SARS病人和(或)与SARS病人标本或衣物非直接接触者，比例为0／181，二者无统计学差异。5例SARS病毒IgG抗体阳性者分别来自SARS病房、CCU病区(该病区曾发生过临床疑似SARS病人)、儿科病房和门诊、标本转送中心及洗衣班，均不符合SARS的临床可能或疑似定义。结论医院目前的防护系统是完善的。     

乙肝病毒基因型及病毒变异对慢性肝病进展的影响

目的 进一步研究HBV基因型及病毒变异与慢性肝病进展的关系.方法 用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)以及部分PCR产物测序的方法对401例慢性HBV感染者.包括112例HCC患者(HCC组),129例无症状携带者(ASC组),70例肝硬化患者(LC组)和90例慢性肝炎患者(CH组)进行HBV基因分型以及BCP和PC变异检测.结果 401例慢性HBV感染者中181例发生B基因型感染,220例发生C型感染.HCC组中C型分布高于其他3个疾病组;C基因型感染者BCP变异多于B基因型;B基因型感染者PC变异多于C基因型;同时BCP变异发生率随着病程进展而递增:在ASC组、CH组、LC组和HCC组里的BCP变异阳性率分别为22.4%、35.0%、50.0%、74.1%.C1与C2亚型相比,C1有较高BCP变异阳性率,而C2有较高PC变异发生率.结论 BCP变异与肝病进程存在依从关系,因此BCP变异的检测对慢性HBV感染的疾病进展和临床结局的评估有重要意义.     

端粒重复序列扩增法结合微孔板杂交法定量检测端粒酶活性

目的 探讨定量检测端粒酶活性的非放射性检测方法。方法 将端粒重复旬扩增测定法（TRAP）与微孔板杂交相结合建立了非放射性检测方法。对3例正常肝组织和4例肝癌患者治疗前后的肝癌组织、瘤旁组织、肝癌凋亡组织进行检测。结果 肝癌组织具有比较高的端粒酶活性,而正常肝组织和瘤旁组织无此酶活性,肝癌凋亡组织端粒酶活性显著降低。结论 该定量分析方法简单、灵敏、特异性强,可以比较准确地反映组织的端粒酶活性状态。     

献血者中TTV检测及新基因型鉴定

目的 :了解TTV在广东地区献血者人群中感染情况。方法 :应用半巢式PCR和克隆测序对南方医院输血中心 1998年初注册的献血者进行TTV感染调查和病毒基因序列分析。结果 :在 10 3名献血者中有 2 0名检测出TTV ,检出率为 19%。用自动测序仪测序得到的TTV序列片段 (1915～ 2 185核苷酸片段 )与通过互连网下载的基因TTV日本株比较 ,同源性在 6 6 8%～ 99.3%。结论 :我国献血者中存在较高的TTV感染率 ,所分离到的两毒株可能为国内一种新的TTV基因亚型 G2c型。     

荧光定量PCR检测侵袭性曲霉菌感染方法的建立

目的 建立并评价从血标本中检测曲霉菌的实时PCR方法.方法 摸索真菌DNA提取方法,用自行设计的高效率引物探针对种植在健康人血中的曲霉菌进行检测,对方法的敏感性、特异性进行评价.结果 检测出种植到血中的曲霉菌,敏感性达10拷贝ITS Ⅰ基因,相当于(1～5)CFU/ml,与人类基因组、其他真菌及细菌无交叉阳性反应,特异性好.结论 实时PCR检测血中真菌病原菌有较高的敏感性、特异性;可有效防止携带污染,避免假阳性结果,有一定的临床应用前景.     

轮状病毒腹泻患儿病毒血症的初步研究

目的了解普通轮状病毒（ＲＶ）腹泻患儿病毒血症出现情况。方法应用套式一逆转录ＰＣＲ方法检测６０例ＲＶ腹 泻患儿外周血血浆和其中１４例血清酶学异常患儿外用血单个核细胞中的ＲＶ。结果６０例ＲＶ腹泻患儿中,共检出ＲＶ 病毒血症阳性者４例（６．６７％）,其中血浆中检出１例,外周血单个核细胞中检出３例,分属４个患儿。结论在普通ＲＶ 腹泻患儿也存在ＲＶ病毒血症。