过表达microRNA-7通过下调CGG结合蛋白1的表达抑制人肺癌细胞生长

目的探讨过表达microRNA-7(miR-7)对人肺癌细胞体内外生长的作用和可能机制。方法利用真核表达载体pcDNA3.1(-)-pri-miR-7(p-miR-7),体外瞬时转染95D人肺癌细胞,MTT法和克隆形成实验检测95D细胞的增殖变化;免疫荧光技术检测95D细胞Ki-67和CGG结合蛋白(CGGBP1)的表达;建立人肺癌裸鼠肿瘤模型,肿瘤局部注射p-miR-7真核表达载体,测量肿瘤大小并观察小鼠生存时间;实时PCR检测肿瘤组织中miR-7表达水平;免疫组织化学技术检测组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达。结果过表达miR-7可明显抑制肺癌细胞的体外增殖(P0.05),Ki-67和CGGBP1的表达显著减少(P0.05);体内实验结果显示,局部注射p-miR-7组中miR-7表达水平明显增加,同时荷瘤裸鼠的肿瘤生长缓慢,生存时间明显延长(P0.05)。肿瘤组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达量均显著减少(P0.05)。结论过表达miR-7可显著抑制人肺癌细胞的体内外生长,可能与其下调肿瘤生长相关蛋白CGGBP1的表达有关。     

微小RNA在乳腺癌中的研究进展

微小核糖核酸（miRNA ）是一种长度为21‐23nt （nucleo‐tide）的非编码RNA ,其通过与靶分子mRNA的3′末端非翻译区（3′untranslated region）结合,从而抑制靶分子 mRNA 的翻译及蛋白质的合成,发挥负性调控作用［1］。新近研究表明, miRNA不仅在细胞功能和机体组织器官生长发育中发挥重要调控作用,而且与多种临床肿瘤的发病过程密切相关。近年来大量研究显示,miRNA参与了乳腺癌的发生、生长、转移和侵袭过程,并且有望成为乳腺癌临床诊治的潜在新靶标。     

MicroRNA-7基因敲减小鼠模型的鉴定

目的鉴定miR-7基因敲减小鼠模型,为进一步研究miR-7的生物学功能奠定基础。方法常规剪取7只miR-7基因敲减（miR-7 knock down,miR-7KD）小鼠的脚趾和尾巴,分别用来提取基因组DNA和总RNA;剪取1只WT（wild-type,WT）小鼠的尾巴,提取其总RNA;将提取的两组小鼠的总RNA逆转录成c DNA;分别以基因组DNA和c DNA为模板,用特异性引物PCR技术扩增目的基因增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）片段;提取WT和miR-7KD小鼠7个不同组织器官的总RNA,利用Real-time PCR探针法检测各组织器官中miR-7成熟体的表达水平;HE染色观察miR-7KD小鼠心脏、肺脏以及结肠的形态学结构改变。结果 PCR结果显示,模型小鼠的脚趾基因组DNA和尾巴c DNA中均能扩增出载体目的基因EGFP片段;Real-time PCR结果显示,miR-7KD小鼠心脏、肝脏和脾脏等组织器官miR-7成熟体的表达水平较WT小鼠均显著下调（P〈0.05）;HE染色结果显示,miR-7KD小鼠心脏、肺脏以及结肠形态学结构发生了明显的病理性改变。结论成功鉴定了miR-7基因敲减小鼠模型,为后续深入探讨该分子的生物学功能提供重要实验基础。     

微小 RNA -7 过表达对人肺癌细胞体内外转移的影响简

目的 探讨过表达miR-7对人肺癌细胞体内外转移的影响.方法 将真核表达载体pcDNA3.1（-）-pri-miR-7（命名为p-miR-7）体外瞬时转染人肺癌95D细胞后,划痕法检测细胞的体外迁移情况;侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变;建立人肺癌裸鼠体内转移模型,HE染色观察过表达miR-7对肺部肿瘤转移的影响;免疫荧光技术检测肿瘤转移相关蛋白Sema4C蛋白的表达.结果 过表达miR-7可显著抑制人肺癌细胞的体外迁移和侵袭能力（P＜0.05）;与对照组相比,过表达miR-7组未观察到明显的肺部肿瘤细胞转移灶（P＜0.05）;免疫荧光结果显示,过表达miR-7组中,肿瘤细胞内Sema4C蛋白表达量显著降低（P＜0.05）.结论 过表达miR-7可以显著抑制人肺癌细胞体外及体内的转移能力,提示miR-7有望成为肺癌后续基因治疗的新靶点.     

microRNA-126 基因敲减小鼠的鉴定及其血糖水平变化

目的：检测microRNA-126(miR-126)基因敲减(knock down,KD)小鼠各组织器官中miR-126的表达,并观察 小鼠血糖的变化,初步探讨其意义。方法：分别提取野生型(wild type,WT)和miR-126 KD模型小鼠中12种组织器官的 总RNA,荧光定量PCR探针法检测miR-126在12种组织器官的表达水平;检测小鼠血糖的变化,并观察小鼠体质量的 变化;HE染色观察肝脏和胰腺的病理改变。结果：与正常小鼠相比,miR-126 KD模型小鼠的脾、胰腺、肝、肌肉和 肺等器官组织中miR-126的表达显著下调(P<0.05);出生第7周和第16周模型小鼠血糖水平均明显增高(P<0.05),HE染 色显示模型小鼠胰腺和肝组织呈明显病理异常;出生第13周后,模型小鼠体质量逐渐增加(P<0.05)。结论：miR-126 KD小鼠血糖水平明显增加,可能与胰腺和肝的病理改变有关,提示miR-126在血糖代谢中具有重要作用,可能与2型 糖尿病的发生发展密切相关。