自身启动子调控miR-7真核表达载体的构建及其意义

目的 构建带有miR-7自身启动子的miR-7重组真核表达载体,研究其对人肺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响.方法 预测miR-7启动子序列,设计含有该序列和miR-7前体序列目的片段的引物,PCR扩增后亚克隆入pGL3.0-Basic载体以构建miR-7自身启动子调控的真核表达载体pGL3.0-Basic-miR-7-promoter(命名为p-miR-7-pro);将所构建载体转染人肺癌95D细胞,Real-time PCR探针法检测95D细胞中miR-7的表达水平;MTT和克隆形成实验分别检测95D细胞的增殖和克隆形成能力;划痕法观察95D细胞体外迁移能力的变化;FACS检测95D细胞的凋亡情况.结果 酶切和测序结果证明成功构建p-miR-7-pro真核表达载体,转染95D细胞后可有效表达miR-7;与对照组相比,p-miR-7-pro转染组95D细胞的体外增殖能力受到明显的抑制(0.60 ±0.03 vs 0.19 ±0.05,P＜0.05);同时其迁移能力也显著降低(473 ±7 vs 99 ±2,P＜0.05);而细胞凋亡则显著增加(9.233 ±0.586％vs 12.967 ±0.643％,P＜0.05).结论 成功构建由自身启动子调控的miR-7真核表达载体,为后续研究miR-7在肺癌基因治疗中的作用提供重要实验基础.     

过表达microRNA-7对人肺癌95D细胞凋亡的影响

目的 探讨过表达microRNA-7对人肺癌95D细胞体内外凋亡的作用。方法 将miR-7真核表达载体（命名为p-miR-7）体外瞬时转染人肺癌95D细胞,利用TUNEL法观察95D细胞凋亡的变化;免疫荧光技术检测各组细胞磷酸化Caspase3和Caspase9蛋白的表达;建立人肺癌裸鼠模型,肿瘤局部注射p-miR-7后利用TUNEL法检测肿瘤局部细胞凋亡变化,同时,免疫组织化学法检测凋亡相关的磷酸化Caspase3和Caspase9蛋白的表达变化。结果 体外转染p-miR-7后可导致人肺癌细胞的凋亡（P<0.05）。同时,细胞中磷酸化Caspase3和Caspase9蛋白水平显著增加（P<0.05）;肿瘤局部注射p-miR-7后,肿瘤局部miR-7表达水平及细胞凋亡也明显增强（P<0.05）,磷酸化Caspase3和Caspase9蛋白水平也显著增加。结论 过表达miR-7可以导致肿瘤细胞凋亡,这与凋亡相关蛋白Caspase3和Caspase9磷酸化水平增加有关。     

过表达microRNA-7通过下调CGG结合蛋白1的表达抑制人肺癌细胞生长

目的探讨过表达microRNA-7(miR-7)对人肺癌细胞体内外生长的作用和可能机制。方法利用真核表达载体pcDNA3.1(-)-pri-miR-7(p-miR-7),体外瞬时转染95D人肺癌细胞,MTT法和克隆形成实验检测95D细胞的增殖变化;免疫荧光技术检测95D细胞Ki-67和CGG结合蛋白(CGGBP1)的表达;建立人肺癌裸鼠肿瘤模型,肿瘤局部注射p-miR-7真核表达载体,测量肿瘤大小并观察小鼠生存时间;实时PCR检测肿瘤组织中miR-7表达水平;免疫组织化学技术检测组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达。结果过表达miR-7可明显抑制肺癌细胞的体外增殖(P0.05),Ki-67和CGGBP1的表达显著减少(P0.05);体内实验结果显示,局部注射p-miR-7组中miR-7表达水平明显增加,同时荷瘤裸鼠的肿瘤生长缓慢,生存时间明显延长(P0.05)。肿瘤组织中Ki-67和CGGBP1蛋白的表达量均显著减少(P0.05)。结论过表达miR-7可显著抑制人肺癌细胞的体内外生长,可能与其下调肿瘤生长相关蛋白CGGBP1的表达有关。     

大肠癌化疗前应用注射用黄芪多糖预防白细胞减少的研究

目的:探究大肠癌化疗前注射用黄芪多糖预防白细胞减少研究。方法:随机抽取我院2016年1月—2018年12月收入大肠癌化疗治疗患者80例,依据随机数表法分为两组,各40例。对照组采取标准FOLFOX6方案化疗,观察组在对照组基础上联合注射用黄芪多糖,比较两组治疗效果。结果:化疗前,两组外周白细胞计数无显著变化(P>0.05),化疗后第一疗程、第二疗程、第三疗程及第四疗程白细胞计数高于对照组,两组差异显著(P<0.05),观察组骨髓抑制、肝功能损害、肾功能损害分别为25.00%(10/40)、15.00%(6/40)、10.00%(4/40),与对照组30.00%(12/40)、17.50%(7/40)、10.00%(4/40)比较无显著差异(P>0.05),观察组胃肠道反应25.00%(10/40),低于对照组40.00%(16/40),两组差异显著(P<0.05)。结论:黄芪多糖应用可显著降低大肠癌患者所致白细胞减少发生率,且应用期间副作用少,值得应用。     

晚期乳腺癌应用卡培他滨维持治疗的临床观察

〔摘 要〕 目的：浅析在乳腺癌晚期患者的维持治疗中应用卡培他滨的临床可行性。方法：纳入 2017 年 1 月至 2019 年 1 月 间肇庆市第二人民医院收治的 70 例乳腺癌晚期患者作为研究对象,并依照电脑端随机编号分组方式将所有患者分为观察、 对照两组,各 35 例。其中观察组化疗后接受卡培他滨治疗,对照组化疗后不接受卡培他滨维持治疗,以姑息治疗联合定期 随访观察为主,评估患者综合疗效。结果：观察组治疗总有效率达 65.71 %,显著高于对照组的 40.00 %,差异具有统计学 意义（P ＜ 0.05）;观察组的不良反应发生率为 20.00 %,显著低于对照组的 40.00 %,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）; 观察组患者乳腺癌生命质量评分表（FACT–B）总分显著高于对照组,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论：乳腺癌晚 期患者在执行化疗阶段应用卡培他滨维持治疗,可提升患者临床疗效及生活质量,且治疗安全性好。     

微小 RNA -7 过表达对人肺癌细胞体内外转移的影响简

目的 探讨过表达miR-7对人肺癌细胞体内外转移的影响.方法 将真核表达载体pcDNA3.1（-）-pri-miR-7（命名为p-miR-7）体外瞬时转染人肺癌95D细胞后,划痕法检测细胞的体外迁移情况;侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变;建立人肺癌裸鼠体内转移模型,HE染色观察过表达miR-7对肺部肿瘤转移的影响;免疫荧光技术检测肿瘤转移相关蛋白Sema4C蛋白的表达.结果 过表达miR-7可显著抑制人肺癌细胞的体外迁移和侵袭能力（P＜0.05）;与对照组相比,过表达miR-7组未观察到明显的肺部肿瘤细胞转移灶（P＜0.05）;免疫荧光结果显示,过表达miR-7组中,肿瘤细胞内Sema4C蛋白表达量显著降低（P＜0.05）.结论 过表达miR-7可以显著抑制人肺癌细胞体外及体内的转移能力,提示miR-7有望成为肺癌后续基因治疗的新靶点.     

延长辅助内分泌治疗对乳腺癌患者生活质量的长期影响

〔摘 要〕 目的：分析乳腺癌患者采用延长辅助内分泌治疗的作用。方法：选取肇庆市第二人民医院 90 例乳腺癌患者为 研究对象,均于 2016 年 1 月开始辅助内分泌治疗,采取随机数字排列表法将其分成对照组以及观察组,各 45 例。其中, 对照组患者在 2016 年 1 月至 2017 年 1 月之间进行辅助内分泌治疗,观察组患者在对照组基础上延长 2 年内分泌治疗时间, 即从 2016 年 1 月开始至 2019 年 1 月结束。观察组患者进行 3 年来曲唑辅助治疗,对照组患者前 1 年使用来曲唑进行治疗, 后 2 年使用安慰剂进行治疗。观察两组患者治疗效果以及治疗前后生活质量得分。结果：观察组患者的总满意度是 97.78 %, 高于对照组的 82.22 %,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）;两组患者治疗前在社会能力、生理职能、心理健康、生理能力、 生活积极性、情感职能、机体疼痛以及总分方面比较,差异无统计学意义（P ＞ 0.05）,观察组患者治疗后社会能力、生 理职能、心理健康、生理能力、生活积极性、情感职能、机体疼痛以及总分均高于对照组,差异具有统计学意义（P ＜ 0.05）。结论：乳腺癌患者实施延长辅助内分泌治疗,可提升满意度以及患者生活质量。     

miRNA-126真核表达载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用

目的： 构建miRNA-126的重组真核表达载体,研究其对小鼠乳腺癌4T1细胞增殖和迁移的影响。 方法: 设计合成miRNA-126的正义和反义寡核苷酸,构建真核表达载体pcDNA6.2-miR-126,体外瞬时转染至4T1细胞,荧光显微镜下观测转染效率。Real-time PCR检测4T1细胞中miRNA-126的表达,MTT法和克隆形成实验检测4T1细胞的增殖和克隆形成能力,划痕法观察4T1细胞的体外迁移。 结果： 成功构建pcDNA6.2-miR-126真核表达载体,其可在4T1细胞中有效表达miR-126。与转染空质粒组（pcDNA6.2-Ctrl）相比,瞬时转染72 h后,pcDNA6.2-miR-126转染组4T1细胞的体外增殖能力受到明显抑制\[(030±0.03) vs (0.51±0.04),P<0.05\];瞬时转染48 h后,pcDNA6.2-miR-126组4T1细胞迁移能力也受到明显抑制\[(817±2.30) vs (28.33±2.16)个,P<0.05\]。 结论： miRNA-126过表达可抑制乳腺癌4T1细胞的增殖及迁移。