鸡白痢沙门菌SpiC蛋白的原核表达及其应用

目的进行鸡白痢沙门菌Spi C蛋白原核表达并建立以Spi C蛋白为检测抗原的间接ELISA。方法以鸡白痢沙门菌S06004基因组DNA为模板,PCR扩增384 bp的spi C基因。将spi C基因克隆至原核表达载体p ET30a中,构建重组原核表达质粒p ET30a-spi C,再转化到表达宿主菌E.coli BL21(DE3)中,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析鉴定,纯化His-Spi C蛋白,建立Spi C蛋白为检测抗原的间接ELISA并检测临床血清样品。结果通过对诱导后重组菌裂解产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,重组菌可以表达相对分子质量(Mr)约19 200的可溶性重组蛋白His-Spi C。重组蛋白GST-Spi C免疫无特定病原体鸡,所获得的高免血清能识别重组蛋白His-Spi C,表明体外表达的重组蛋白His-Spi C有良好的免疫反应原性。所建立的以重组蛋白His-Spi C介导的间接ELISA有较好的特异性,能够区分spi C基因缺失型疫苗候选株免疫与野生菌自然感染。结论重组蛋白His-Spi C呈可溶性表达,具有良好的免疫原性,以重组蛋白His-Spi C建立的间接ELISA,可以作为区分感染和免疫动物(DIVA)鸡白痢疫苗免疫的鉴定方法。     

广州市1995年登革热暴发流行特征分析

１９９５年４～１１月，广州市发生了Ⅰ型登革热暴发流行，共发病５５０５例，发病率８４．２４／１０万，无死亡。首例确诊时间是４月１０日。病例主要集中于８、９两个月，占总发病数的９１％。疫情波及七个区一个县级市，有１３个暴发点。主要疫区为番禺沙湾镇，共发病４９７２例。在急性期病人血清中分离到１２株登革Ⅰ型病毒，血清学试验有１１７例抗体阳性。此次暴发流行，发病人数之多，为广州市历次流行之最，暴发点之多，也是历年罕见。首次在广州市出现乡村型登革热暴发，其来势凶猛，流行强度大，给登革热防治工作者提出了一个新的课题。实践表明，广州市对登革热流行采取的预防监测系统的控制措施，在市区已达到监测散发病例的水平，并已收到明显的效果，但在郊县的实施尚须进一步加强。     

快速康复外科理念在腹腔镜胆囊切除术中的研究

目的探讨快速康复外科理念在腹腔镜胆囊切除术中的应用价值。方法将120例接受腹腔镜胆囊切除术的胆囊疾病患者随机分为2组,对照组患者给予传统的围手术期手术方案,观察组患者在快速康复外科理念指导下进行治疗,比较2组患者临床疗效。结果与对照组比较,观察组患者术前S-AI、T-AI和SAS评分显著降低(P<0.05),而术后VAS评分显著下降(P<0.05),PBSQI评分显著增加(P<0.05)。观察组术后下床活动时间、术后最早进食时间、胃肠功能恢复时间、住院费用、住院时间显著优于对照组(P<0.05)。观察组患者对临床医疗满意率为100%,治疗效果满意率为98.3%,遵医嘱率为100%,显著高于对照组的76.7%%,83.3%%,70.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论快速康复外科理念在腹腔镜胆囊切除术可以有效改善患者的心理状态,加快术后恢复快,降低住院费用和住院时间,提高患者的术后生活质量和治疗的依从性,有较高的临床推广应用价值。     

1980-2010年广州市狂犬病监测分析

目的分析广州市1980-2010年30年间狂犬病的流行病学特征。方法收集狂犬病疫情资料及狂犬病病例个案调查表,用回顾性调查方法分析资料;采集疫区犬脑组织,用免疫荧光法和RT？PCR法检测狂犬病病毒抗原。结果 1980-2010年广州市共报告655例人间狂犬病,其中597例为1980-1989年报告的病例,占总病例数的91.15%,45例为2005-2010年报告的病例,占总病例数的6.87%,形成了2次流行高峰;45例患者中男性多于女性,10～55岁年龄组发病人数较多,学生、民工和农民居多。在疫区共捕捉86只犬,取脑组织,经免疫荧光和PCR检测,全部为阴性。结论广州市过去30年人间狂犬病有2次流行高峰;1990年以前犬免疫率低,人暴露后疫苗接种率低使人狂犬病发病率达到最高峰;2005年后,养犬数增多,人们预防狂犬病的意识放松,忽视伤口处理及暴露后免疫,导致狂犬病发病率回升;86只犬中未检测到狂犬病病毒,说明广州地区狂犬病病毒在家养犬中的流行强度较低。     

嵌合鞭毛蛋白fliC/esat佐剂效应的研究

目的:研究嵌合形式表达的鞭毛蛋白对结核分枝杆菌(MTB)抗原ESAT-6的免疫佐剂效应。方法:用PCR方法扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白基因fliCi及MTB抗原ESAT-6编码序列,通过重叠PCR将ESAT-6编码序列插入fliCi的高变区域,构建嵌合鞭毛基因片段fliC/esa。t将fliC/esat片段分别插入原核表达载体pET,构建pET-fliC/esat质粒。将ESAT-6编码序列插入原核表达载体pBCX的多克隆位点,构建原核表达质粒pBCX-esat。以质粒pET-fliC/esat及pBCX-esat分别转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基1-1硫代-β呋喃半乳糖苷诱导融合的嵌合蛋白fliC/esat及ESAT-6蛋白的表达。以抗ESAT-6 mAb HYB 076-08为一抗,通过W estern b lot鉴定嵌合蛋白fliC/esat及ESAT-6蛋白。以两种蛋白分别在体外刺激骨髓树突状细胞(BMDCs),通过FACS分析共刺激分子CD40、CD80、CD86和CD54的表达,同时用ELISA检测前炎性因子IL-12p70表达的水平。此外,以两种蛋白分别免疫C57BL/6小鼠,运用ELIS...     

我国地方品种鸡IL-17cDNA的克隆、表达及鉴定

目的:克隆我国地方品种鸡IL-17 cDNA,构建该基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白并鉴定其免疫特性。方法:利用特异性引物,通过RT-PCR方法扩增得到隐性白羽鸡IL-17(ChIL-17)的基因片段,PCR产物克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX-6P-1-ChIL17。将重组质粒pGEX-6P-1-ChIL17转化E.coliBL21,IPTG诱导表达目的蛋白,应用SDS-PAGE和Western blot分析鉴定表达产物。结果:成功扩增出ChIL-17基因片段,大小约510 bp,序列与GenBank登录的序列(NM 204460)相比,核苷酸同源性为99.8%,第477位碱基由G变为A,氨基酸同源性为100%。酶切鉴定结果表明,ChIL-17基因正确克隆入原核表达载体pGEX-6P-1中。重组质粒pGEX-6P-1-ChIL17在大肠杆菌中获得表达,SDS-PAGE结果显示出Mr约46 000大小的目的蛋白表达条带;Western blot结果表明,表达产物与小鼠IL-17抗体具有良好的反应性。结论:成功克隆并表达出我国地方品种鸡ChIL-17基因,为抗ChIL-17单...     

2001～2010年广州市鼠疫宿主动物及其媒介种类的监测及评价

目的分析广州市鼠疫宿主动物及其媒介的种群构成及数量分布情况,为制定鼠疫防控策略提供依据。方法采用夜笼法。在广州市12区、县级市设置监测点,对捕获鼠类及捡获蚤类进行鉴定,计算鼠密度;计算鼠带(染)蚤率和蚤指数;用鼠疫IHA法检测鼠疫F1抗体。结果 10年间共捕获鼠形动物8 891只,分属2目2科4属9种。其中啮齿目动物8 285只,食虫目动物606只,总鼠密度(捕获率)为11.25%;在1 185只鼠形动物中发现染蚤鼠243只,捡获蚤811只。发现蚤类4种,主要蚤种为印鼠客蚤;平均鼠染蚤率为20.51%,总蚤指数为0.68;未查出鼠疫F1抗体。结论未发现鼠间鼠疫流行迹象。褐家鼠仍是广州市主要鼠种。主要蚤种是印鼠客蚤。     

甲型H1N1流感病毒HA基因的原核表达及免疫反应性分析

目的构建甲型H1N1流感病毒HA基因的原核表达质粒,获得融合表达蛋白,并对表达蛋白的免疫反应性进行分析。方法人工合成A/California/05/2009 H1N1流感病毒的HA基因,以合成基因为模板,通过PCR方法扩增出去除信号肽的HA部分基因片段,然后将去除信号肽的HA基因克隆至pET30a(+)原核表达载体中,构建出原核表达质粒,再将重组质粒转化E.coliBL21(DE3)表达菌株;重组菌经IPTG诱导后,收集菌体进行SDS-PAGE电泳分析,Western blot分析表达产物的免疫反应性。结果获得了HA基因的原核表达重组菌,细菌经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析可见约67.4 ku大小的目的蛋白表达条带,Western blot结果显示,表达产物与人甲型H1N1流感患者阳性血清具有反应性。结论成功表达出甲型H1N1流感病毒的HA蛋白,该蛋白具有良好的免疫反应性,为甲型H1N1流感的快速诊断方法的建立提供了生物材料。     

广州市1995年同期两起登革热暴发流行的分析回顾

广州市 1985、1991年分别发生ＤＥＮⅠ暴发〔1〕。1995年 9月 15日至 10月 16日 ,东山及白云区又分别发生居民住宅区域内登革热的暴发。1　材料与方法1.1　资料来源　用统一调查表进行流行病学个案调查 ,核实诊断 ,整理统计 ,收集疫点所有住户人员健康状况、人口流动及气象资料。1.2　血标本来源　住院病人及近 1个月来曾有发热、皮疹的疑似病人的急性期和恢复期血清 ,冷藏待检。1.3　检测方法　病原检测 ,采用白纹伊蚊Ｃ6 / 36细胞分离病毒 ;血清学检查 ,用登革斑点法 ,试剂由新加坡ＤｉａｇｎｏｓｔｉｃＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ(ｐｔｅ…     

小鼠骨髓源性树突状细胞的体外诱导

分离树突状细胞（DC）的原理是依据DC的低密度和半黏附特性，DC缺乏Fc受体，可对获得的DC进一步纯化。这种方法获取的DC数量有限。细胞因子诱生法是目前体外扩增DC常用的方法。其中，扩增效果最好的细胞因子是粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）和白细胞介素4（IL-4）。