体外培养成骨细胞对自体骨髓间充质干细胞定向成骨分化的影响

目的观察体外培养成骨细胞对自体骨髓间充质干细胞（BMSC）增殖和定向成骨分化的影响．探讨此诱导方法作为骨组织工程种子细胞来源方法的可行性。方法应用密度梯度离心联合贴壁筛选法从兔股骨骨髓中分离、纯化BMSC．取第3代BMSC常规培养设为空白对照组,利用含有钙化诱导剂的DMEM培养基诱导培养第3代BMSC．设为钙化对照组。取第3代成骨细胞,1：1的比例和第3代BMSC共同培养．设为实验组。碱性磷酸酶（ALP）染色及钙结节染色鉴定诱导结果．ALP定量测定观察共同培养中成骨细胞对BMSC诱导影响。总蛋白定量测定观测诱导成骨细胞的分化活性．结果成骨细胞与BMSC共同培养24h后．在倒置光学显微镜下可见两种细胞形态混杂生长．共同培养5d后．细胞形态趋于一致,多呈长梭形。诱导培养5d后．实验组与钙化对照组ALP染色均为阳性。诱导培养21d．两组钙结节茜素红染色均呈阳性．而BMSC空白对照组并未见钙结节形成。ALP定量测定,实验组于3、5、7、9d均低于钙化对照组,且差异均具有统计学意义。实验组与空白对照组ALP定量测定,在4个时间段差异也均具有统计学意义。总蛋白定量测定显示实验组于第3天．A值高于钙化对照组,差异具有显著统计学意义（P〈0．01）,而第5天、第7天、第9天时却低于钙化对照组．差异具有显著统计学意义（P〈0．01）。实验组于各时间段均高于空白对照组．差异亦具有统计学意义。结论成骨细胞与BMSC共同培养应用于BMSC的成骨诱导．从诱导效率和诱导后成骨细胞的分化活性方面．都能证实该共同培养方法的有效性。但与钙化诱导方法相比．共同培养的诱导效果差于钙化诱导方法。     

生物反应器系统在软骨组织工程中的应用

关节软骨的退行性变是当今社会主要的健康问题之一。据文献报道关节软骨的再生能力有限,到现在为止还没有一种十持久而且有效的治疗方法来替代关节软骨。组织工程是一个非常有潜力的领域,虽然要建立一套常规治疗软骨缺损的组织工程理论还有很多障碍,但是为治疗软骨损伤为目的的组织工程已经能够快速可靠的培养出适合的软骨组织。生物反应器和一些相关的设备为组织工程提供了一个快速且有效的方法。事实上,在体内生理刺激影响着软骨的功能,所以我们要设计一些特别的生物反应器来对在体外培养的关节软骨施加模拟应力的传导,像流体剪切力,流体静压力,周期压力,和一些混合力。本篇综述总结了一些软骨细胞反应器系统在细胞刺激和培养中的应用。     

治疗骨质疏松新靶点：辅助T细胞-17

骨质疏松是一种常见疾病,骨质疏松的病因学和发病机制至今还没有被阐明清楚,目前还没有彻底治疗骨质疏松的方法,但是研究疾病的发病机制可以为骨质疏松患者提供全新的治疗方法。最近的研究表明了辅助T细胞（ Th）在骨量丢失（一种系统性的炎症反应）发病机制中可能存在作用。然而,在一些已经发表的文章中,Th1／Th2细胞在调节破骨细胞的功能上存在着争议,这一争议被新近发现的Th17细胞所解决。 Th17是一种新亚型的T细胞,可以选择性的分泌不同的促炎因子,刺激破骨细胞分裂,已经被证实在炎症动物模型中可以加速骨量的丢失。因此Th17细胞会是未来治疗骨质疏松的目标靶点。     

硅橡胶膜细胞载体的应力分析及生物相容性

目的 报道一种自制的硅橡胶膜细胞载体,通过三维有限元方法计算其表面应变分布情况,并作细胞生物相容性分析,对材料进行全面评价,为细胞的应力刺激实验提供理论依据。方法 将硅橡胶材料制作成0.1 cm厚的透明薄膜,结合硅橡胶材料的泊松比以及弹性模量,应用三维有限元分析软件对数据进行处理,模拟硅橡胶受到牵张应变后产生的形变;通过MTT方法比较细胞在硅橡胶和标准培养板上的生长情况,并采取体外皮下包埋实验验证硅橡胶材料是否具有生物学毒性。结果 在对材料加载0.5%~20%的过程中,有效应变范围集中在硅橡胶膜的中心区域,约占总面积的90%;同时,硅橡胶材料虽然在生物相容性方面与标准培养板存在一定差异,但其本身无生物学毒性。结论 这种自制的硅橡胶细胞载体表面应力分布良好,生物相容性尚可满足细胞培养,但表面需进一步改善,可满足细胞的牵张应变实验。     

钙敏感受体在人骨关节炎软骨中的表达研究

【摘要】目的 研究钙敏感受体(CaSR)在人骨性关节炎(OA)软骨中的表达强度,探讨其与OA 发病机制的关 系。方法收集5 例因膝关节OA 接受全膝关节置换术患者的股骨远端及胫骨近端标本,HE 染色后根据Collins 病 理学分级标准进行关节软骨退变分级,Collins 0 级切片8 张为软骨正常组,Collins Ⅱ级切片8 张为软骨退变组,免疫 组织化学染色后比较2 组软骨组织内CaSR 的表达强度。结果CaSR 在OA 软骨中阳性表达,CaSR 在软骨正常组 的表达强度低于退变软骨组（评分：1.63±0.95 vs 3.52±0.78,t=8.99,P＜0.05）。结论CaSR 活化与关节软骨退变 有关。     

全髋关节置换术使用羟基磷灰石涂层股骨柄假体的Meta分析

背景：越来越多的青壮年患者在接受全髋关节置换术（total hip arthroplasty,THA）中使用羟基磷灰石（hydroxyapatite,HA）涂层股骨柄假体,评价HA涂层多孔股骨柄假体的相关临床对照研究的报道并不完全一致,且样本量较少,存在一定局限性。目的：通过Meta分析评价THA使用HA涂层股骨柄假体的有效性及安全性。方法：计算机检索数据库Medline（1966年至2012年2月）、PubMed（1966年至2012年2月）、Embase（1966年至2012年2月）、Cochrane图书馆（2011年第4期）、中国生物医学光盘数据库（1978年至2012年2月）、中国生物医学文献数据库（1978年至2012年2月）和维普中文科技期刊数据库（1978年至2012年2月）,收集THA使用HA涂层股骨柄假体和多孔股骨柄假体的临床随机对照试验,提取数据进行分析,采用统计软件RevMan5.1进行Meta分析。结果：共纳入10个随机对照研究,其中试验组480例,对照组478例。Meta分析结果显示,与对照组相比,接受HA涂层股骨柄假体的患者THA术后Harris评分无统计学差异（均数差=1.49,95%置信区间[-2.32,5.31],P=0.44）,周围透光线的发生率无统计学差异（优势比=1.06,95%置信区间[0.76,1.48],P=0.74）,点焊现象发生率无统计学差异（优势比=1.09,95%置信区间[0.74,1.62],P=0.66）。结论：HA喷涂于股骨柄假体多孔表面,对于初次THA无临床益处。限于纳入文献的数量和质量,Meta分析结果尚有待于更多高质量大样本随机对照试验以予证实。     

周期性牵张力对成骨细胞细胞骨架影响的实验研究

目的 对大鼠成骨细胞施加单轴向周期性牵张应力,观察单轴向周期性牵张应力对大鼠成骨细胞细胞骨架的影响.方法 无菌环境下,组织分离法培养SD大鼠颅骨成骨细胞,体外培养,应用DioDynamic细胞应力加载系统分别对2组第3代大鼠成骨细胞加载0%和2%的单轴向周期性牵张应力,使用免疫荧光法检测细胞骨架蛋白表达,使用激光共聚焦显微镜观察细胞骨架的变化,随即抽取视野并测量各组细胞骨架蛋白表达的荧光强度,进行统计学分析.结果 经统计学计算,施加单轴向周期性牵张应力实验组与空白对照组相比,实验组大鼠成骨细胞骨架蛋白的荧光表达减弱;应力纤维变细,明显沿受力方向分布.结论 DioDynamic细胞应力加载系统可以很好地模拟生物体内成骨细胞所受单向周期牵张应力;大鼠成骨细胞细胞骨架感知单轴向周期性牵张应力,参与细胞的力学信号转导和细胞形态重构.     

IL-17A促进卵巢癌顺铂耐药的体外机制探讨

目的:探究IL-17A促进卵巢癌顺铂（DDP）耐药的体外机制。方法:应用流式细胞术分析外源性rhIL-17A对DDP诱导的A2780（顺铂敏感卵巢癌细胞株）和OVCAR3（顺铂耐药卵巢癌细胞株）细胞的凋亡和周期分布变化的影响,并以IL-17RAmAb进行相应的阻断实验。结果:rhIL-17A对A2780和OVCAR3细胞的凋亡无显著影响;但可显著降低DDP对A2780和OVCAR3细胞的毒性作用（P<0.05）,以IL-17RAmAb进行阻断实验可部分消除rhIL-17A对DDP诱导的A2780和OVCAR3细胞凋亡的阻滞作用（P<0.05）。rhIL-17A对A2780和OVCAR3细胞的周期分布无显著影响;但可显著抑制 DDP诱导的A2780和OVCAR3细胞周期阻滞（P <0.05）,使A2780和OVCAR3细胞的G0/G1期比例增加,G2+S期比例减少。结论: IL-17A可通过IL-17RA抑制DDP诱导的卵巢癌细胞凋亡,同时可抑制DDP诱导的卵巢癌细胞周期阻滞,从而加剧以DDP为基础的卵巢癌化疗耐药性。     

蛋白激酶Cξ蛋白通路调控周期性牵张应力促进成骨细胞增殖的研究

 目的 探讨蛋白激酶Cξ(protein kinases Cξ, PKCξ)蛋白通路参与响应调控周期性牵张应 力促进成骨细胞增殖的相关机制。 方法无菌环境下, 组织分离法培养SD大鼠成骨细胞, 应用BioDynamic 细胞应力加载系统对第三代大鼠成骨细胞进行单轴周期性牵张应力加载, 形变量为2%, 加载频 率为0.25 Hz, 单轴向周期性牵张应力180 min(即实验组);应用同样的方法加载以PKCξ特异性经典抑 制剂Myristoylate 预处理的成骨细胞(即经典抑制剂组);使用同样的培养加载方式形变量为0%单轴向 周期性牵张应力180 min(即静态对照组)。应用流式细胞术检测大鼠成骨细胞的细胞周期表达, 并使用 免疫印迹法(Western blotting)、免疫荧光法分别检测实验组、经典抑制剂组和静态对照组大鼠成骨细胞 内转导蛋白通路PKCξ与磷酸化PKCξ(p-PKCξ)的表达。 结果 与静态对照组、经典抑制剂组相比, 单 轴向周期性牵张应力可以使大鼠成骨细胞S 期显著前移, 并显著上调大鼠成骨细胞转导蛋白通路PKCξ 与p-PKCξ的表达;同时, 抑制剂可以明显抑制p-PKCξ活化, 从而抑制PKCξ的表达。 结论 成骨细胞 PKCξ蛋白通路参与感知周期性牵张应力刺激, 并调控促进大鼠成骨细胞增殖, 是力学信号传导通路中 重要的环节。