针对MAGE-1基因RNAi在恶性胶质瘤SHG-44细胞中的作用研究

目的构建抑制黑色素瘤抗原-1(MAGE-1)的siRNA表达载体,鉴定其在人恶性胶质瘤细胞系SHG-44细胞中对MAGE-1基因表达的干涉作用。方法化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE-1基因寡核苷酸链,克隆到经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上,重组构建RNA干涉(RNAi)质粒载体。利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术和荧光显微镜,检测经稳定转染后SHG-44细胞中MAGE-1的表达,以了解siRNA的干扰效果。结果重组构建的pSUPER-MAGE-1载体经双酶切电泳及插入基因片段序列分析,表明寡核苷酸链成功插入到预计位点,并且序列与预期完全一致。稳定转染后G418筛选出的SHG-44多克隆细胞MAGE-1的表达经RT-PCR、流式细胞术和荧光显微镜检测,2对siRNA均有较明显的干涉作用。结论成功构建了针对MAGE-1基因的siRNA表达载体,抑制SHG-44细胞中的MAGE-1分子的表达。     

RNA干扰基因敲除MAGE-1在恶性胶质瘤U87细胞中的初步研究

目的：通过构建抑制MAGE-1的短片段双链核糖核酸（siRNA）表达载体，鉴定其在人恶性胶质瘤细胞系U87细胞中对MAGE．1基因表达的干涉作用。方法：化学合成2对编码短发夹RNA序列的靶向MAGE—1基因寡核苷酸链，克隆至经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER载体上，重组构建核糖核酸干扰（RNAi）质粒载体。利用RT-PCR、流式细胞术和荧光显微镜，检测经稳定转染后胶质瘤U87细胞中MAGE-1的表达，以了解siRNA的干涉效果。结果：重组构建的pSUPER—MAGE—1载体经双酶切、电泳及插入基因片段序列分析，表明寡核苷酸链成功地插入至预计位点，且序列与预期完全一致。稳定转染后G418筛选出的U87多克隆细胞MAGE-1的表达经RT—PCR、流式细胞术和荧光显微镜检测，2对siRNA均有较明显的干扰作用。结论：载体的成功构建并能对U87细胞中的MAGE—1分子进行RNAi，为进一步研究MAGE—1在肿瘤中的作用，分析基因功能，展开肿瘤基因治疗奠定了基础。     

骨髓炎与恶性骨肿瘤软组织改变的影像比较

目的 探讨软组织影像改变对骨髓炎和恶性骨肿瘤的鉴别诊断价值。方法 通过回顾性分析。对57例骨髓炎和70例恶性骨肿瘤患者软组织异常CT和MRI征象进行界定、观察、记录和统计学比较。结果57例骨髓炎患者中，CT检查54例，MR检查14例。CT检查的54例中，软组织肿胀52例（Ⅰ度19例、Ⅱ度16例、Ⅲ度17例），脓肿样囊腔6例，软组织肿块5例，软组织内气体、脂液平面和窦道各1例。MR检查的14例骨髓炎中，软组织肿胀14例（Ⅰ度2例、Ⅱ度6例、Ⅲ度6例），脓肿样囊腔（扩散加权成像均呈明显高信号）3例，软组织肿块和脂液平面各1例。70例恶性骨肿瘤患者中，CT检查54例，MR检查49例。CT检查的54例中，软组织肿胀44例（Ⅰ度29例、Ⅱ度12例、Ⅲ度3例），软组织肿块49例，软组织肿块边缘残留骨壳或壳样钙化16例，软组织肿块内肿瘤骨或瘤软骨钙化25例。MR检查的49例恶性骨肿瘤中，软组织肿胀46例（Ⅰ度21例、Ⅱ度17例、Ⅲ度8例），软组织肿块43例。骨髓炎组和恶性骨肿瘤组CT图像显示的软组织肿胀程度（Uc=4．1066，P〈0．01）以及脓肿样囊腔（X^2=4．4118，P〈0．05）、肿块（X^2=71．7037，P〈0．01）、肿块边缘残留骨壳或壳样钙化（X^2=18．7826，P〈0．01）和肿块内肿瘤骨或瘤软骨钙化（X^2=32．5301，P〈0．01）出现比例差异具有统计学意义。MR图像所示的软组织肿胀程度（Uc=2．5997，P〈0．01）以及脓肿样囊腔（四格表确切概率P=0．0092）和肿块（X^2=29．8757，P〈0．01）出现比例差异亦有统计学意义。结论 软组织肿胀程度和软组织肿块对骨髓炎和恶性骨肿瘤鉴别具有一定价值。软组织肿块边缘残留骨壳或壳样钙化以及软组织肿块内肿瘤骨或瘤软骨钙化是恶性骨肿瘤的特异性征象。脓肿样囊腔、软组织内气体、脂液征和窦道是骨髓炎的可靠征象。     

腹腔镜胆囊切除术中腹腔引流管的应用体会

目的：总结腹腔镜胆囊切除术（laparoscopic cholecystectomy,LC）中腹腔引流管的临床应用经验。方法：回顾分析2001年1月至2006年6月1650例LC患者的临床资料。结果：1650例中1487例（90.1%）术中未放置腹腔引流管,恢复顺利,放置腹腔引流管的163例中159例（97.5%）引流管无明显液体引出,或仅有少量腹腔冲洗液,术后24～48h拔除,康复好,4例患者术后发生胆漏。结论：应严格掌握放置腹腔引流管的指征,多数LC术中不放置腹腔引流管是合理可行的,更有利于患者的康复。     

人CD226分子胞膜外区D1和D2真核表达载体的构建、表达和鉴定

目的 构建含有人CD226分子胞膜外区结构域1(D1)和结构域2(D2)的真核表达载体,表达并纯化重组蛋白.方法用特异性引物分别扩增CD226 D1和D2的基因,定向插入真核表达载体pSecTag2B-Fc,进行酶切和DNA测序鉴定,重组质粒瞬时转染293T细胞,收集上清,纯化蛋白及SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.结果利用PCR方法克隆出CD226胞膜外区D1和D2的基因,并正确插入pSecTag2B-Fc载体中,真核表达载体瞬时转染293T细胞,Western blot结果证实转染293T细胞的培养上清液中含有hCD226D1-Fc和hCD226D2-Fc融合蛋白,培养上清经亲和层析柱纯化,可获得较高纯度的重组蛋白.结论 成功的构建了分泌型融合蛋白hCD226D1-Fc和hCD226D2-Fc真核表达载体,获得纯度较高的融合蛋白,为进一步探讨其配受体的相互作用机制奠定了基础.     

趋化性细胞因子对人Tc1和Tc2细胞内Ca~(2+)浓度变化的影响

为了探讨趋化性细胞因子在体外对人Tc1和Tc2亚群细胞内Ca2 + 浓度变化的影响 ,从PBMC中分离纯化CD8+ T细胞 ,在特定细胞因子及细胞因子抗体作用下 ,体外定向诱导出能长期培养的Tc1和Tc2细胞系 ,用免疫荧光染色结合流式细胞术分析对其进行鉴定后 ,通过流式细胞术检测在趋化性细胞因子刺激前后 ,细胞内Ca2 + 浓度的变化。发现受SDF 1作用后 ,Tc1及Tc2细胞内Ca2 + 浓度变化均不明显 ,而IP 10刺激后 ,Tc1及Tc2细胞内Ca2 + 水平在短时间内明显上调 ,且在Tc1胞内的上升幅度远高于Tc2细胞 ,在MIP 1β刺激后 ,也观察到类似趋势 ;受Eotaxin刺激后 ,Tc1及Tc2细胞内Ca2 + 水平均有微小上升 ,在Tc2细胞内的上升幅度略高于Tc1细胞。说明Tc1和Tc2细胞受趋化性细胞因子作用后 ,细胞内Ca2 + 浓度有不同程度的变化 ,且与趋化性细胞因子受体的表达呈现一定的相关性。     

TLSFJM抑制大鼠心脏移植排斥反应的作用

目的　在同种异体大鼠异位心脏移植模型中 ,探讨TLSFJM对急性移植排斥反应的抑制作用及机制。方法　以F344大鼠作为心脏移植受体 ,以LOU/CN大鼠作为心脏移植供体 ,建立大鼠异位心脏移植模型。受体大鼠分为 3组 ,于移植前后分别施以RPMI16 4 0、CsA或TLSFJM。每天观察移植心脏跳动情况 ,并于停跳当天或之前解剖观察。分别取供体大鼠脾细胞作为刺激细胞 ,取受体大鼠脾细胞作为反应细胞 ,进行单向混合淋巴细胞反应。结果　TLSFJM可明显延长大鼠异位移植心脏的存活时间 :RPMI16 4 0对照组移植心脏的存活期全部为 6d ,TLSFJM治疗组最长均可存活 2 7d ,高剂量 (15mg/kg·d)CsA治疗组存活期超过 2 7d。TLSFJM治疗组大鼠脾细胞增殖的cpm值均低于对照组。结论　TLSFJM具有良好的抗急性移植排斥反应作用。TLSFJM对同种异体抗原诱导T细胞增殖的明显抑制 ,可能是其发挥免疫抑制作用的机制之一     

HPLC测定能恩诺齐胶囊中人参皂苷Rg1的含量

目的 采用HPLC测定能思诺齐胶囊中人参皂苷Rg1的含量。方法 用C18柱，流动相为乙腈-0．1％磷酸溶液(19．4：80．6)，UV检测波长为203nm。结果 人参皂苷Rg1在所建方法的条件下线性关系良好，平均加样回收率为99．55％(n＝6)。结论 所用方法分离效果良好、准确、可靠。     

HPLC法测定三七中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量

目的：建立HPLC测定三七中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1含量的方法。方法：色谱条件为：C18柱，流动相为乙腈-0．05％磷酸溶液(21．5：78．5)，UV检测波长为203nm。结果：此方法线性关系良好，平均加样回收率分别为人爹皂苷Rg199．54％和三七皂苷R1101．40％(n=6)。结论：本方法分离良好，结果准确可靠。     

HPLC测定乳腺清胶囊中橙皮苷的含量

目的:建立乳腺清胶囊中橙皮苷的含量测定方法.方法:回流提取,HPLC测定乳腺清胶囊中橙皮苷的含量.采用C18柱,乙腈-0.1%磷酸(25:75)为流动相,检测波长为284nm.结果:此方法线性关系良好,平均加样回收率为101.56%,RSD为1.2%(n=6).结论:本方法简便易行、结果准确,可用于乳腺清胶囊的质量控制.