新型冠状病毒VSV假病毒的 构建及其感染能力的初步研究

目的 分析HIV-1感染者在长期抗反转录病毒治疗（antiretroviral therapy, ART）前后血浆中p24抗体和总HIV-1特异性抗体水平变化特点及其与HIV-1储存库关系。方法?选取2009年11月—2013年7月于我中心接受ART满5年的27例HIV-1感染者作为研究对象,采用荧光素酶免疫吸附试验和酶联免疫吸附试验,分别检测患者接受ART 0、1、3、5年时间点的p24抗体和总HIV-1特异性抗体的水平,同时对其与总HIV-1 DNA和细胞相关RNA（cell-associated RNA, CA-RNA）的水平进行相关性分析。结果?在ART 0、1、3、5年时,p24抗体水平分别为2.450（1.910～5.460）、1.460（1.080～2.160）、1.280（1.120～1.800）、1.570（1.090～2.180） LU;总HIV-1特异性抗体水平分别为3.378（3.157～3.710）、3.489（3.237～3.622）、3.446（2.742～3.573）、3.336（2.860～3.566）。p24抗体与总HIV-1 DNA和CA-RNA的水平均呈正相关（r分别为 0.407、0.305,P 均＜ 0.05）;总HIV特异性抗体水平与总HIV-1 DNA和CA-RNA水平没有相关性（r分别为0.155、0.165,P 均＞ 0.05）。结论?总HIV-1特异性抗体水平在ART期间没有明显变化,且与HIV-1储存库大小没有相关性,p24抗体水平随着ART时间增加呈逐渐降低的趋势,与HIV-1储存库的大小呈正相关,可为HIV-1特异性抗体和HIV-1储存库大小关系的研究提供依据。     

新型冠状病毒VSV假病毒的 构建及其感染能力的初步研究

摘要]?目的?在二级生物安全实验室条件下,通过构建新型冠状病毒（新冠病毒）VSV假病毒,研究新冠病毒及其流行变异株的侵入特性。方法?通过购买的新冠病毒（Wuhan-Hu-1株）VSV-luc假病毒构建VSV-G/VSV-ΔG-luc假病毒;利用VSV-G/VSV-ΔG-luc假病毒构建新冠病毒VSV假病毒。通过分子克隆对新冠病毒S基因相应位点进行突变,构建新冠病毒不同变异株的刺突蛋白表达质粒,由此包装出新冠病毒各种变异株假病毒。比较新冠病毒Wuhan-Hu-1株与D614G株、Delta株在不同细胞系中的感染能力。 结果?新冠病毒VSV假病毒构建成功。评价新型冠状病毒Wuhan-Hu-1株、D614G株、Delta株在4种不同细胞系中侵入情况,与Wuhan-Hu-1株相比,D614G株和Delta株的感染水平均明显增加（P均＜ 0.05）,同时在Calu-3和Caco-2细胞系中,Delta株的感染水平明显强于D614G株（P均＜0.05）。利用模拟细胞-细胞间传播的感染试验发现,Delta株感染HEK-293T细胞与Vero细胞的能力明显高于D614G株（P均＜0.05）。 结论?新冠病毒Delta株的感染能力明显强于Wuhan-Hu-1株和D614G株。VSV假病毒系统能够模拟、替代新冠病毒活病毒在侵入细胞的过程中的生理功能,并且安全可靠、易于量化、应用广泛,在新冠病毒研究领域中能够发挥重要作用　　 摘要]?目的?在二级生物安全实验室条件下,通过构建新型冠状病毒（新冠病毒）VSV假病毒,研究新冠病毒及其流行变异株的侵入特性。方法?通过购买的新冠病毒（Wuhan-Hu-1株）VSV-luc假病毒构建VSV-G/VSV-ΔG-luc假病毒;利用VSV-G/VSV-ΔG-luc假病毒构建新冠病毒VSV假病毒。通过分子克隆对新冠病毒S基因相应位点进行突变,构建新冠病毒不同变异株的刺突蛋白表达质粒,由此包装出新冠病毒各种变异株假病毒。比较新冠病毒Wuhan-Hu-1株与D614G株、Delta株在不同细胞系中的感染能力。 结果?新冠病毒VSV假病毒构建成功。评价新型冠状病毒Wuhan-Hu-1株、D614G株、Delta株在4种不同细胞系中侵入情况,与Wuhan-Hu-1株相比,D614G株和Delta株的感染水平均明显增加（P均＜ 0.05）,同时在Calu-3和Caco-2细胞系中,Delta株的感染水平明显强于D614G株（P均＜0.05）。利用模拟细胞-细胞间传播的感染试验发现,Delta株感染HEK-293T细胞与Vero细胞的能力明显高于D614G株（P均＜0.05）。 结论?新冠病毒Delta株的感染能力明显强于Wuhan-Hu-1株和D614G株。VSV假病毒系统能够模拟、替代新冠病毒活病毒在侵入细胞的过程中的生理功能,并且安全可靠、易于量化、应用广泛,在新冠病毒研究领域中能够发挥重要作用     

规范传染病研究所研究生实验记录管理的有效措施探讨

首都医科大学附属北京地坛医院传染病学研究所在制定实验记录规范的基础上,对研究生实验记录进行＂开始培训,过程监督和最后建档＂管理。这些措施对于研究生形成良好的科研习惯,从源头上预防学术不端行为的产生,加强研究所科研平台建设等方面均起到举足轻重的作用。     

多色流式细胞术检测HIV/AIDS患者CD4+ T细胞亚群变化

目的　以多色流式细胞术为基础,检测HIV/AIDS患者外周血单个核细胞中辅助性T细胞（helper T cell, Th）亚群的比例。方法　用11种细胞表面抗体CD3、CD4、CD8、7-AAD、CD45RA、CCR7、CXCR5、CCR4、CCR6、CCR10、CXCR3建立多色流式方案,识别7种主要的Th,并对15例HIV/AIDS患者和15例健康对照外周血中Th的比例进行分析。结果　根据多种趋化因子受体组合搭配,明确Th1、Th2、Th9、Th17、Th22、滤泡辅助性T细胞、ThG分析策略。通过检测分析发现,与健康对照相比,HIV/AIDS患者中Th2亚群比例增高,Th22亚群比例降低。结论　建立的多色流式表面标志物检测方案可以方便快捷地检测外周血中Th的比例,所需样本量少,操作步骤简单且结果稳定,并能精准定量。     

脓毒症导致小鼠胸腺萎缩的原因探讨

目的 利用小鼠盲肠结扎穿刺模型探讨脓毒症导致胸腺萎缩的原因.方法 采用盲肠结扎穿刺(CLP)手术建立脓毒症小鼠模型(脓毒症组),以假手术(Sham)小鼠作为对照组.术后7 d,采用流式细胞仪检测小鼠胸腺中各群胸腺细胞和胸腺前体细胞比例的变化及胸腺细胞凋亡情况.结果 与对照组相比,脓毒症组小鼠的胸腺明显萎缩,胸腺细胞的绝对计数显著减少(P< 0.001);胸腺中的CD4-CD8-细胞(DN)、CD4+CD8+细胞(DP)、CD4+CD8-细胞、CD8+CD4-细胞数亦明显减少(P< 0.001);胸腺中Lin-CD44+CD117+前体细胞比例显著降低(P< 0.001);各群胸腺细胞凋亡的比例均显著增加(P< 0.001).结论 脓毒症模型小鼠胸腺萎缩不仅与胸腺细胞凋亡增加有关,与胸腺前体细胞减少也相关.     

整合酶抑制剂在HIV感染全程管理中的应用优势

随着HIV抗反转录病毒治疗（antiretroviral therapy, ART）的研究进展,ART时机的不断提前以及ART药物的迅速发展,HIV感染者可以获得期望寿命。现在对HIV感染者的关注不仅仅在于AIDS本身,更多应该关注HIV感染者的合并症,甚至心理疾病。中华医学会发布的《艾滋病诊疗指南（2018版）》提出全程管理的概念,而整合酶抑制剂在HIV感染全程管理的多个环节中优势显著,本文就其在全程管理中的地位以及应用展开讨论。     

十色流式检测HIV/AIDS患者外周血中T淋巴细胞亚群及活化状态

目的建立十色流式方案检测HIV/AIDS患者外周血中T淋巴细胞亚群及活化状态。 方法按多色流式配色原则,初步确立抗人CD3、CD4、CD8、CD45RA、CD25、CCR7、CD28、CD38、HLA-DR抗体及7-AAD的配色方案。采用1例HIV/AIDS患者外周血PBMC标本进行最适电压调节、荧光补偿设定和FMO对照;设定条件后,检测5例HIV/AIDS患者的外周血样本。 结果建立检测人外周血中T淋巴细胞亚群及活化状态的最优十色流式染色方案,采用此方案检测5例HIV/AIDS患者外周血标本,分析T淋巴细胞各亚群比例及活化程度,发现不同细胞亚群中活化分子HLA-DR、CD38、CD28的表达模式存在显著差异。 结论十色流式方案可检测HIV/AIDS患者外周血中T淋巴细胞亚群及其活化状态操作简便,结果可靠。     

活化型血小板-CD4细胞聚合体与HIV/AIDS患者免疫状态的关系

目的 分析HIV/AIDS患者不同疾病状态下外周血中CD4细胞与活化血小板形成聚合体的比例变化,并探讨活化型血小板-CD4细胞聚合体聚集的原因及与疾病进展的关系。方法 入组符合标准的100例未经cART的HIV/AIDS患者（TN）,18例经cART治疗后的免疫应答（IR）者,13例免疫无应答（INR）者与20例健康对照（HC）。利用流式细胞术检测活化型血小板-CD4细胞聚合体的比例和血小板及CD4细胞的自身活化程度,探究活化型血小板-CD4细胞聚合体比例变化特点、与疾病进展的关系以及参与聚合体形成的影响因素。结果 TN组活化型血小板-CD4细胞聚合体比例显著升高（TN vs. HC：中位数6.420 vs. 5.200,Z=2.093,P=0.033 2）,且该比例与CD4细胞计数、CD4/CD8细胞比值呈显著负相关（CD4细胞计数,r=-0.553 0,P<0.000 1;CD4/CD8细胞比值,r=-0.601 5,P<0.000 1）,与病毒载量呈显著正相关（r=0.329 8,P=0.001 0）。经cART后,IR组较TN组活化型血小板-CD4细胞聚合体比例显著...     

气管滴注法与雾化吸入法建立小鼠急性肺损伤模型及其效果比较

目的：比较脂多糖（LPS）气管滴注法与雾化吸入法建立的小鼠急性肺损伤（ALI）模型,确立更为有效的小鼠肺损伤建模方法。方法20只健康雄性C57BL/6小鼠随机分为生理盐水（NS）气管滴注组、NS雾化吸入组、LPS气管滴注组和LPS雾化吸入组。分别采用气管滴注法和雾化吸入法建立肺损伤模型,5 h后进行小鼠肺湿重/干重（W/D）比值测定、支气管肺泡灌洗液（BALF）蛋白含量测定、细胞分类计数及炎性细胞因子检测。结果与对照组相比,LPS气管滴注组和LPS雾化吸入组小鼠肺W/D比值,BALF中总蛋白浓度,TNF-α、IL-6、MCP-1和IL-1β等多项炎性细胞因子以及中性粒细胞数目均显著升高（P均＜0.05）;NS气管滴注组较NS雾化吸入组炎症背景高;LPS气管滴注组较LPS雾化吸入组各项肺部炎症指标组内差异大。结论雾化吸入方法对于建立小鼠ALI模型更有效。