2011-2014年常州地区HIV-1抗体阳性者 免疫印迹带型分析

摘要:目的　分析2011-2014年常州地区HIV-1抗体阳性者的免疫印迹（Western Blot,WB）带型。方法　应用WB试验对2011-2014年常州地区HIV-1抗体阳性待确证标本进行确证检测,并对其WB带型进行统计学分析。结果　1144份HIV-1抗体待确证标本中,36份确证为阴性,71份为不确定,1037份为阳性,阳性率为90.7%。在HIV-1抗体阳性标本WB带型中,gp160阳性率最高,为96.5%;p24和gp120次之,阳性率均在90.0%以上;gp41、p66、p51和p31阳性率较低,均低于90.0%;p17、p55和p39阳性率分别为66.4%、45.7%和41.9%;WB带型阳性率男女性之间差异均无统计学意义（P＞0.05）;20～39岁组的p39阳性率高于其他年龄组（χ2＝10.861,P＜0.05）,＜20岁组的p17阳性率高于其他年龄组（χ2＝7.906,P＜0.05）。结论　p39和p17带型阳性率在4个年龄组之间的差异均有统计学意义;gp160、gp120、gp41和p24是HIV-1抗体确证阳性的重要条带,且本地区检测的HIV-1抗体阳性者多在AIDS期前。     

经长期HAART治疗的中国HIV—AIDS患者外周血细胞内HIV-1前病毒DNA的检测及其意义

目的探索NK细胞是否是HIV-1病毒的储存库细胞之一,并观察在长期HAART治疗后,T淋巴细胞及单核细胞内是否仍有HIV-1前病毒DNA存在。方法对15例规范接受HAART治疗4～7年的HIV—AIDS患者采集血标本进行横断面研究。使用磁珠分选法从外周血单个核细胞（PBMC）中分离出T淋巴细胞、单核细胞和NK细胞,通过HIV实时荧光定量检测外周血HIV-1RNA病毒载量和NK细胞、单核细胞、T淋巴细胞内的HIV-1 DNA水平,流式细胞术检测外周CD4＋T细胞数量,对数据进行统计学处理。结果15例接受4～7年[平均（62．45±13．53）个月]HAART治疗的HIV／AIDS患者外周血HIV-1RNA均低于检测下限（〈50拷贝／ml）;T淋巴细胞、NK细胞中和单核细胞中HIV-1前病毒DNA的平均含量分别为2．03±0．48、1．82±0．32和1．754-0．19（10g10拷贝／10。个细胞）;3种细胞中HIV-1DNA阳性（〉50拷贝／m1）者比例分别为6／15、4／15、2／15。结论中国HIV-1感染者外周血中除了T淋巴细胞和单核细胞外,NK细胞也可能是HIV-1的病毒储存库之一。在长期HAART治疗（4～7年）后,尽管表现出明显的抗病毒效果和免疫重建效果,仍然未能彻底清除NK细胞、T淋巴细胞和单核细胞中的HIV-1前病毒DNA。     

HIV-1新发感染检测技术在新发感染率估计中的应用

HIV新发感染率是反映HIV流行水平、评估预防控制措施效果和卫生资源分配的重要依据.根据HIV-1 RNA、p24抗原和HIV特异性抗体不同特性,不管是在血清阳转前还是阳转后,利用HIV-1新发感染检测技术,通过单次血清标本检测就可以区分新发感染或既往感染,为HIV-1新发感染率估计提供便捷、实用的方法.     

江西口岸出入境人员HIV-1抗体阳性者免疫印迹带型分析

目的研究江西口岸出入境人员HIV-1艾滋病感染者免疫印迹试验（WB）带型的分布特征。方法对2003—2013年3月江西口岸出入境人员HIV－1抗体确证阳性的WB带型结果进行统计分析。结果23例江西口岸出入境人员HIV-1阳性标本免疫印迹带型中gp160、gp120、p66、p51、gp41、p31、p24阳性率为100％,p55阳性率为78．3％,p17阳性率为95．6％;中国籍和非洲籍人员比较,非洲籍人员的p55阳性率高于中国籍人员;不同性别比较,p55阳性率差别有统计学意义,女性高于男性;不同年龄组间比较,p55阳性率差异有统计学意义。结论江西口岸出入境人员HIV—1抗体阳性者gp160、gp120、p66、p51、gp41、p31、p24阳性率高,具备确证HIV－1的特异性条带,对于不同国家的出入境人员还有待进一步扩大样本量进一步研究。     

2013-2017年厦门市HIV抗体蛋白印迹实验检测结果分析

目的 了解2013-2017年厦门市HIV抗体初筛阳性标本的复检与确证结果,为艾滋病防治工作提供数据支持。方法 对初筛阳性的标本,用北京万泰抗原抗体酶联免疫吸附试剂盒以及雅培公司HIV抗体快速诊断试剂盒（胶体硒法）,进行复检,其中任何一种试剂检测结果呈阳性反应即使用MP生物亚太公司的HIV-1/2 blot确证试剂盒（WB法）进行确证检测。结果 2873例WB实验,确证HIV-1抗体阳性2344例（81.6%）,HIV抗体不确定202例（7.1%）,HIV抗体阴性为327例（11.4%）。在HIV-1抗体阳性样本中,WB检测反应条带gp160、gp120和gp41的出现率最高,均为100%（2344/2344）,条带p55以及p17出现的概率较低,分别为38.7%（907/2344）和46.4%（1088/2344）。完成随访的202例样本中,env类和gag类带型的阳转率分别为95%（96/101）和18.5%（5/27）。结论 在检测过程中不可避免的会假阳性结果,必须通过WB实验确认是否为HIV抗体阳性;要加强对不确定样本的随访。     

HIV-1CN54膜抗原Gp145去糖基化修饰对其免疫效果的影响

目的构建表达Ⅰ型艾滋病病毒（human immunodeficiency virus-1type,HIV-1）CN54膜蛋白Gp145去糖基化突变体的DNA疫苗和重组痘病毒疫苗,并对其进行抗原改造和免疫原性测试。方法采用分子生物学方法构建了表达HIV-1CN54膜蛋白Gp145或其突变体（Gp145dG,去除了V1/V2区的6个糖基化位点）的DNA疫苗（SV145、SV145dG）和重组痘病毒疫苗（rTTV145、rTTV145dG）。运用DNA初免-重组痘病毒疫苗加强的方式接种雌性BALB/c小鼠,免疫结束后,分别采用IFN-γ酶联免疫斑点技术（enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT）和酶联免疫吸附测定技术（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）对Gp145特异性细胞免疫反应和抗体反应进行检测。结果 SV145初免-rTTV145加强所活化的特异性T细胞反应强度为（1 949±1 307）斑点形成细胞数（spotforming cells,SFCs）/106个脾淋巴细胞,对数抗体滴度为（4.020±0.3...     

265例HIV-1抗体阳性者抗体蛋白印迹带型分析

目的通过对本实验室以蛋白印迹（WB）法确认的HIV-1抗体阳性者抗体WB条带的分析，了解不同人群抗体WB带型分布的差异。方法WB法确认HIV-1抗体阳性。结果抗pol基因编码蛋白的抗体WB带型分布以及P31抗体的阳性率在不同传播途径的HIV-1抗体阳性者问差异有统计学意义（P〈0．01）；年龄（age，A）≤40岁的HIV-1抗体阳性者P66和P24抗体阳性率分别明显高于相应A〉40岁以上者，（P〈0．05）；抗pol基因编码蛋白的抗体WB带型分布以及P66抗体阳性率在不同地域的HIV-1抗体阳性者闻差异有统计学意义（P〈0．01）。结论HIV-1抗体WB带型分布在不同性别、不同年龄人群间差异无统计学意义。但在不同传播方式、不同地域的人群间差异有统计学意义；HIV-1 pol、gag基因编码的某些蛋白的抗体产生在不同传播方式、不同年龄及不同地域的人群间差异有统计学意义。     

金磁微粒为载体的免疫PCR检测HIV-1 p24

目的建立以金磁微粒为载体的免疫PCR HIV-1 p24检测体系。方法以金磁微粒作为免疫PCR的载体并通过载体的特异性和非特异性反应验证其可行性;以小鼠抗HIV-1 p24单克隆抗体作为捕获抗体包被金磁微粒,生物素化的羊抗p24多克隆抗体作为检测抗体;报告DNA用生物素标记的引物通过PCR扩增预先制备,并通过链亲和素的桥联标记生物素化的多抗,被两抗体夹心捕获的人重组HIV-1 p24抗原通过PCR扩增报告DNA的方式予以检测;并对检测的灵敏度和线性检测范围进行分析。结果金磁微粒上偶联抗体的效率可>95%,偶联抗体的一致性较好,几乎不产生非特异性吸附,分离与洗涤步骤更简便更彻底;免疫PCR检测p24的灵敏度为0.1ng/L,比ELISA法检测的灵敏度高1.5×104倍,线性检测范围为p24浓度在0.1~100ng/L。结论金磁微粒是较理想的免疫PCR反应载体,金磁微粒为载体的免疫PCR检测HIV-1 p24是一种可兹应用的高灵敏度的检测方法。     

福建省3市男男性行为者HIV-1感染率与新发感染率初探

目的了解福建省男男性行为（MSM）人群HIV-1感染的流行状况,为制定防治策略提供依据。方法对2010—2012年福州、泉州和厦门市哨点监测MSM人群进行问卷调查和HIV-1抗体筛查和确证,计算感染率;用BED HIV-1捕获酶联法对HIV抗体阳性样本进行检测,估算HIV-1血清阳转时间在168d内的新发感染率。结果 2010、2011和2012年福州、泉州和厦门市MSM人群HIV-1感染率分别为7.1%（39/553）、8.7%（94/1 078）和9.3%（95/1026）;在HIV抗体阳性者中,新发感染率分别为5.8%、2.2%和10.9%。结论 2010—2012年福建省3地市MSM人群HIV的感染率与新发感染率均达到较高水平,且有上升的趋势。     

2620份HIV-1抗体阳性标本蛋白印迹条带分析

目的 分析HIV-1抗体阳性蛋白印迹带型,了解红河州艾滋病感染者的带型分布特征.方法 对某实验室2008、2009年经蛋白印迹试验检测为HIV-1抗体阳性标本的带型进行统计分析.结果 2620份HIV-1抗体阳性蛋白印迹带型中全带的有40.61％ (1064/2 620)、次全带有35.46％ (929/2620)、13.86％ (363/2620),各WB条带的阳性检出率为:抗env(外膜蛋白)最高gp160为100％ (2 620/2 620)、gp120为100％ (2620/2620)、gp41为98.32％ (2576/2620),其次是抗pol(逆转录酶蛋白)p66为98.21％ (2573/2620)、p51为96.87％ (2538/2620)、p31为94.96％ (2410/2620),抗gag(核心蛋白)除p24为99.65％ (2611/2620)外,其他条带检出率都较低p55为48.02％ (1258/2620)、p39为44.77％ (1173/2620)、p17为77.44％ (2029/2620).不同感染途径和不同年龄组比较p31、p55、p39、p17检出率的差异有统计学意义;不同性别比较p55、p39检出率的差异有统计学意义.结论 红河州HIV-1抗体阳性标本抗体蛋白印迹条带检出率与其他地区的报道有差异,其原因有待进一步研究和探讨.     

探讨ELISA和化学发光法对血清中HIV-1/HIV-2抗体、梅毒抗体和丙肝抗体的检测

目的:比较ELISA法和化学发光法对血清中HIV-1/HIV-2抗体、梅毒抗体和丙肝抗体的检测。方法:用ELISA法与化学发光法对病人血清和标准物质进行以上三种抗体的检测,并对结果进行分析。结果:(1)化学发光法测定值较低的阳性标本,ELISA法测定有可能为阴性。(2)用化学发光法检测病人血清中HIV-1/HIV-2抗体为阴性标本的测定数据有一定程度的波动。(3)同一公司生产的以上三种抗体的标准物质,用ELISA均为阳性,可是用化学发光法仅丙肝抗体检测为阳性,而其它两种均为阴性。结论:基本证实了化学发光法比ELISA法敏感性高。     

2007-2010年浙江省HIV双阳夫妻对流行病学特征分析

目的了解2007-2010年浙江省双方HIV-1抗体阳性夫妻流行病学特征,为预防艾滋病在夫妻间传播提供依据。方法通过浙江省艾滋病疫情报告资料和个案调查建立艾滋病阳性夫妻数据库,并进行流行病学特征分析。结果 2007-2010年全省共报告421对(842例)双方HIV-1抗体阳性的夫妻。男性和女性中本省户籍分别占62.00%、51.31%;夫妻主要危险行为是婚外异性性接触和婚内性接触。仅男方有危险行为、仅女方有危险行为、双方均有危险行为者分别占51.00%、22.09%、24.94%。80.52%感染夫妻通过临床可疑和医院体检中发现。80.8%的夫妻检测发现时间间隔在一个月以内。共发现17例经母婴传播感染儿童。结论本省内及外省的农村男性流动人群、外省的女性流动人群是造成夫妻间传播的重要人群。感染危险行为主要为婚外异性性接触,以夫妻一方有危险行为为主,夫妻双方有危险行为比例在增加。加强农村流动人群的高危性行为干预,促进夫妻双方共同定期检测、夫妻间行为干预可能有利于预防艾滋病在家庭内传播。     

重组痘苗病毒嵌合巨蛋白的免疫学研究

目的　pSFJ1 6与pSFJ38均是以牛痘病毒包涵体 (ATI)启动子和分别串联的 1 6个和 38个p7 5突变型早期启动子为基本构件组成的复合型启动子 (ATI-p7 5)、痘苗病毒复制非必需区血凝素 (HA)基因为侧翼的痘苗病毒表达载体。分别插入编码艾滋病病毒 (HIV - 1 )外膜蛋白env、核心蛋白gag与编码干扰素 (IFNα - 2b)基因 ,观察其表达产物诱导的机体内产生抗体效价的变化规律。方法　利用分子克隆技术构建重组质粒 ,经脂质体转染与野生型痘苗病毒在Cos- 7细胞内同源重组 ,筛选、纯化、获得重组痘苗病毒vJ1 6env/IFNα - 2b和vJ38gag/IFNα - 2b。免疫小鼠后 ,经间接ELISA分折免疫小鼠血清抗体的OD4 90 值变化。结果　免疫小鼠后体内抗体的OD4 90 值 ,实验组与阴性对照组平均数有显著性差异 (P <0 0 5) ,实验组与阳性对照组之间无显著性差异 (P >0 0 5)。结论　重组痘苗病毒vJ1 6env/IFNα - 2b和vJ38gag/IFNα- 2b免疫小鼠后可诱导机体产生高滴度的抗HIV - 1env、gag与IFNα - 2b巨蛋白抗原的抗体 ,蛋白稀释度与血清抗体OD4 90 值呈负相关     

Eliciting broad neutralizing antibody to HIV-1: envelopes of different lentivirus cross immunization by prime-boost vaccination

The greatest challenge of HIV vaccine development lies in the diversity of circulating HIV-1 strains. For an effective vaccine, neutralizing antibodies are assumed to be of crucial importance, but previous attempts results only very limited breadth and potency of Nab titer. While the amino acid sequences of lentivirus envelope have many differences, those envelope proteins share almost same structural conformations. If the envelopes of different lentivirus were used immune animals, the response to the conserved sites will be strengthened while the un-conserved sites will not be. In this study, compared to only protein immunization regimen, HIV-1 CN54 gp140 DNA prime and protein boost strategy generated Nab titer increased significantly. So, the prime-boost strategy and HIV-1 CN54 gp140 protein were employed to different lentivirus cross immunization schedule. The results indicated that, the different lentivirus and HIV-1 cross immune by prime-boost strategy elicited breath and potency neutralization antibody to tier 1, tier 2, and tier 3 viruses with 14 tested viruses. To tested tier 2 and tier 3 viruses, in SIV and HIV-1 cross immunization group, the neutralization breadth of ID50 is 91.7% and the breadth of ID70 is 50%; in HIV-1, FIV and SIV cross immunization group, the breadth of ID50 is 83.3% and the breadth of ID70 is 58.3%, while in only HIV-1 vaccinated group, the breadth of ID50 is 75% and the breadth of ID70 is only 25%. These data demonstrate that HIV-1 and different lentivirus especially with SIV cross immunization by prime-boost strategy elicit broad neutralizing antibodies much better than only HIV-1 immunization.     

体外研究HIV-1潜伏库实验方法进展

HIV-1在未治疗的艾滋病患者体内,虽可以持续复制,但也可潜伏在细胞内以逃避宿主的免疫清除,这一现象即病毒潜伏.由于病毒潜伏对抗病毒治疗带来了挑战,也引起人们的高度关注.此文对体外研究HIV-1潜伏库的实验方法 进展进行综述.     

体外研究HIV-1潜伏库实验方法进展

HIV-1在未治疗的艾滋病患者体内,虽可以持续复制,但也可潜伏在细胞内以逃避宿主的免疫清除,这一现象即病毒潜伏.由于病毒潜伏对抗病毒治疗带来了挑战,也引起人们的高度关注.此文对体外研究HIV-1潜伏库的实验方法 进展进行综述.     

HIV-1病毒储存库的特征及检测方法

HIV-1在未治疗的艾滋病患者体内,虽可以持续复制,但也可潜伏在细胞内以逃避宿主的免疫清除,这一现象即病毒潜伏.由于病毒潜伏对抗病毒治疗带来了挑战,也引起人们的高度关注.此文对体外研究HIV-1潜伏库的实验方法 进展进行综述.