基于iTRAQ技术探讨人胃癌细胞乙酰肝素酶调控的信号通路北大核心

目的:探讨人胃癌细胞中乙酰肝素酶(HPSE)调控的差异蛋白和信号通路,为以HPSE为靶点防治胃癌提供依据。方法:利用siRNA干扰技术,在乙酰肝素酶(HPSE)基因高表达的SGC7901细胞中转入干扰HPSE的慢病毒载体(LV-HPSE-RNAi),通过嘌呤霉素筛选出稳定株,利用qPCR和Western blot分别检测HPSE mRNA和蛋白表达;利用细胞划痕实验和Transwell侵袭实验测定细胞的迁移和侵袭能力;利用同位素标记的相对和绝对定量(iTRAQ)联合二维液相色谱串联质谱(2DLC-MS/MS)技术筛查差异蛋白,并进行生物信息学分析,对差异蛋白PKCa应用Western blot进一步验证。结果:人胃癌SGC7901细胞和沉默HPSE表达的ZSGC7901细胞对比检测出98个差异蛋白,并且富集在157条信号通路上。与肿瘤发生发展关系密切的有6条:细胞外基质和受体相互作用、局灶性黏附、PI3K-Akt信号通路、癌途径、癌中microRNAs、Wnt信号通路。且上调的FAK、ITGA、PKCa等蛋白和下调的PKA、CDK6等蛋白在通路中处于重要的位置。Western blot结果证明PKCa在沉默HPSE的ZSGC7901细胞中表现为上调,差异具有统计学意义(P<0.05),与蛋白质组学筛选结果一致。结论:HPSE在人胃癌细胞中调控的蛋白,参与细胞重要生物学过程、参与重要分子功能及重要信号途径,有望可以成为防治胃癌的新靶点。     

舒芬太尼通过AWPPH对宫颈癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨舒芬太尼对宫颈癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响机制。方法采用MTT法、流式细胞仪、Transwell小室检测不同浓度(0.01、0.02、0.04μg/ml)的舒芬太尼对宫颈癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力的影响。采用qRT-PCR检测不同浓度的舒芬太尼对宫颈癌细胞中长链非编码(LncRNA)AWPPH表达水平的影响。利用宫颈癌SiHa细胞为研究对象,实验分组:si-NC组、si-AWPPH组、舒芬太尼0.04+pcDNA3.1组、舒芬太尼0.04+pcDNA3.1-AWPPH组。检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭能力的变化。结果与con组比较,不同浓度的舒芬太尼作用于SiHa细胞后,SiHa细胞增殖抑制率和凋亡率升高,迁移和侵袭数减少,AWPPH表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-AWPPH组SiHa细胞增殖抑制率和凋亡率均升高,迁移及侵袭数均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);AWPPH过表达可明显逆转舒芬太尼对SiHa细胞的作用。结论舒芬太尼可能通过下调AWPPH抑制宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭,诱导细胞凋亡。     

胆总管结石内镜逆行胰胆管造影术后行胆道支架置入和鼻胆管引流并发症的比较

目的探讨胆总管结石患者采用内镜逆行胰胆管造影术（ERCP）取石后同期开展胆道支架置入术或开展经内镜鼻胆管引流术（ENBD），对于防范并发症的价值。 方法按照前瞻性研究原则，选择2017年4月至2019年1月新疆医科大学第一附属医院收治的338例胆总管结石患者，随机分为支架组（170例）与引流组（168例）。两组患者均行ERCP治疗，其中引流组术后同期开展ENBD，支架组患者术后开展胆道支架置入术，对比两组患者腹痛评分、并发症发生情况及预后。 结果两组患者术后均未合并严重出血、穿孔或病死，结石完全清除率差异无统计学意义。与支架组相比，引流组术中胰腺管插管次数，术后4 h血淀粉酶水平、高淀粉酶血症、急性胰腺炎以及并发症总发生率更高，差异有统计学意义（P<0.05），术后24、48、72 h不同时点腹痛测评分值居更高水平（P<0.05）。 结论对于胆总管结石行ERCP治疗的患者，术后予以ENBD、胆道支架置入术的结石完全清除效果对比无明显差异，但胆道支架置入术更能降低术后并发症风险、缓解腹痛症状，患者获益更多。     

三七片DNA条形码分子鉴定及方法学考察

目的为研究DNA条形码技术在中成药鉴定中的应用,以三七片为研究对象,对方法的适用性、专属性与精密度进行考察。方法收集15批次市售三七片样品,考察三七片DNA提取条件,并对"中药材DNA条形码分子鉴定法指导原则"中PCR扩增、序列获得、结果判定等方法适用性进行确认;收集三七、人参、西洋参,制作三七片及其掺伪品,考察方法的专属性和重现性。结果三七片取样量100 mg,56℃水浴8 h所获得DNA的质量浓度平均值为60.7 ng/μL,PCR扩增、序列获得和结果判定均可获成功;三七、人参和西洋参的ITS2序列长度均为230bp,三七与人参、三七与西洋参的序列间均存在7个稳定的SNP位点,自制三七片和掺伪三七片均可成功获得ITS2序列,不同比例三七与人参、三七与西洋参的测序峰图在SNP位点处呈现相应峰高比的SNP套峰具备专属性;重复性、中间精密度和重现性考察符合《中国药典》2015年版(通则9101)相关要求。结论 ITS2序列作为DNA条形码能够稳定、准确鉴定三七片的原料药材,具备良好的专属性和精密度,三七片DNA条形码分子鉴定法将为保障三七片临床用药安全提供新的技术手段,并对《中国药典》其他收载单方制剂的鉴定提供参考。     

蒙医心身互动疗法对焦虑状态的作用

目的探讨蒙医心身互动疗法对焦虑状态的作用。方法将30例符合焦虑状态的患者,对其接受蒙医心身互动疗法治疗前和治疗后每7d(共21d),分别选用焦虑自评量表(SAS)、汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评定。比较治疗前后的量表评分。结果接受蒙医心身互动疗法后焦虑状态的改善。结论蒙医心身互动疗法对焦虑状态的患者有明显疗效,使焦虑状态得到缓解。     

乙肝肝硬化肝胆湿热及肝肾阴虚证物质基础研究＊

目的 运用代谢组学技术分析乙肝肝硬化患者肝肾阴虚及肝胆湿热两种典型证候（同病异证）的血清差异代谢产物及其代谢通路，探寻虚、实两种典型证候的内在物质基础，以期从代谢水平上为中医证候分类提供客观依据。方法 对符合纳入标准的111例不同证候的乙肝肝硬化患者（肝胆湿热证40例，肝肾阴虚证41例，隐证(无证可辨）者30例）中医症状及体征进行描述性分析，发现两种不同证型的临床信息分布规律及证候特征；采用气相色谱-飞行时间质谱联用（GC-TOF/MS）技术对乙肝肝硬化患者，以及与之相匹配的60例健康人的血清样本进行检测，经非监督的主成分分析（Principal Components Analysis，PCA）、有监督的偏最小二乘判别分析（Partial Least Square Discriminant Analysis，PLS-DA）及监督的正交偏最小二乘法（Orthogonal Partial Least SquareDiscriminant Analysis，OPLS-DA）分析，找出与乙肝肝硬化疾病本身及其两种典型证候相关的差异性物质；运用MetaboAnalyst 3.0数据库，寻找并解析肝胆湿热及肝肾阴虚虚实两种证候间差异性物质的相关代谢通路。结果 （1）肝胆湿热证中出现频率较高（50%以上）的症状为小便色黄，口干，口苦，口臭或有异味等。肝肾阴虚证中出现频率较高的症状为口干、腰酸、乏力、腿软等。两证共见症/征为口干、尿黄、易怒、舌红。（2）各组间丙氨酸氨基转移酶（Alanine Aminotransferase,ALT）数值无统计学差异（P > 0.05）；与健康组比较，隐证组中白蛋白（Albumin，ALB），肝胆湿热证中总胆红素（Total Bilirubin，TBil）、直接胆红素（Direct Bilirubin，DBil）、谷草转氨酶（Aspartate Transaminase，AST）、碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase，ALP）、谷氨酰转肽酶（Gamma-Glutamyl Transpeptidase，GGT）、总胆汁酸（Total Biliary Acid，TBA）及ALB，肝肾阴虚证TBil、ALP、GGT、TBA、ALB值差异均有统计学意义（P < 0.05）；与隐证比较，肝胆湿热证TBil、DBil、AST、ALP、TBA、ALB，肝肾阴虚证TBA、ALB差异有统计学意义（P < 0.05）；肝胆湿热证与肝肾阴虚证相比，TBil、DBil差异有统计学意义（P < 0.05）。（3）代谢组学检测及代谢通路分析，发现各组之间代谢谱均有良好的区分，并获得各组间的差异性物质。发现肝胆湿热及肝肾阴虚两典型证的共同物质10个，去除疾病（隐证）的信息，则得到两证共同物质6个，涉及的代谢通路为甘氨酸、丝氨酸及苏氨酸代谢和苯丙氨酸代谢；同时，分别获得两证各自特异性的代谢物质各8个，分别涉及亚油酸代谢和甘氨酸、苏氨酸及丝氨酸代谢。结论 运用代谢组学技术，发现肝胆湿热及肝肾阴虚不同证之间既存在病的共同物质（同病），也存在证的差异物质（异证），从而在代谢层面上为中医证候分类的科学性提供科学依据。     

HPLC法测定棘豆止咳散中甘草苷的含量

目的:建立棘豆止咳散中甘草苷的含量测定方法。方法:采用XTerra MSC18(4.6 mm×250 mm, 5.0μm)色谱柱,乙腈(A)-0.05%磷酸水(B)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长237 nm,柱温40℃。结果:HPLC法测定甘草苷线性关系良好(r~2=0.9993),精密度、稳定性、重复性的RSD值均小于3.0%,加样回收率为90.19%～97.87%。结论:所建立的方法简便,可靠,重复性好,可用于棘豆止咳散的质量控制。