人胃癌细胞乙酰肝素酶对Src激酶活化的影响

目的探讨人胃癌细胞乙酰肝素酶与Src激酶的关系。方法利用Western blot检测Src激酶抑制剂pp2的活性、pp2对人胃癌SGC-7901细胞中乙酰肝素酶表达的影响以及乙酰肝素酶表达被沉默的人胃癌SGC-7901细胞中磷酸化Src（p-Src）激酶蛋白的表达。结果pp2对乙酰肝素酶蛋白表达无影响,在乙酰肝素酶被沉默的人胃癌SGC-7901细胞中p-Src蛋白表达降低。结论人胃癌细胞乙酰肝素酶可能调节Src激酶的磷酸化,乙酰肝素酶-Src可能是参与人胃癌侵袭、迁移和诱导血管生成的一条信号通路。     

沉默MTA1表达对胃癌SGC7901细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:观察转移相关基因1（MTA1）基因沉默对人胃癌细胞SGC7901增殖和迁移侵袭能力的影响,探讨 MTA1基因在胃癌发生发展中的作用。方法:利用脂质体法将靶向MTA1的小分子干扰 RNA（siRNA） 转染到胃癌细胞株 SGC7901中。运用Real time PCR 和Western blot 技术检测SGC7901细胞内MTA1的 mRNA和蛋白表达水平。CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell小室实验观察细胞迁移和侵袭能力。结果:MTA1 siRNA 可有效抑制SGC7901细胞MTA1基因在 mRNA 和蛋白水平上的表达（P﹤0.01）。CCK-8实验表明MTA1 siRNA 转染后细胞增殖不受影响;Transwell小室实验表明细胞迁移和侵袭能力明显下降。结论:沉默MTA1表达可抑制胃癌细胞株 SGC7901迁移和侵袭,而不影响细胞增殖。MTA1在胃癌侵袭转移过程中可能发挥重要作用。     

臭牡丹总黄酮通过Keap1/Nrf2/ARE信号通路对胃癌SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨臭牡丹总黄酮(total flavone of clerodendrum bungei,TFCB)通过Keap1/Nrf2/ARE信号通路对胃癌SGC7901细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:用臭牡丹总黄酮溶液干预人胃癌SGC7901细胞,然后采用MTT法检测TFCB对SGC7901细胞增殖能力的影响;划痕修复及Transwell小室侵袭实验检测TFCB对SGC7901细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot及RT-PCR法检测TFCB对SGC7901细胞Keap1、Nrf2及maf蛋白及mRNA表达的影响。结果:低、中、高剂量组TFCB均显著抑制了SW620细胞的增殖、迁移和侵袭,随着药物干预浓度的增加,抑制程度逐渐增加。与空白对照组比较,低剂量干预组TFCB处理后Nrf2及maf蛋白相对表达量均显著下降(P＜0.05),Keap1蛋白相对表达量显著升高(P＜0.05),但Keap1、Nrf2及maf mRNA表达量无显著的统计学差异(P＞0.05);高中剂量干预组TFCB处理后Nrf2及maf蛋白及mRNA相对表达量亦显著下降,Keap1蛋白及mRNA表达量显著升高,并且在高中低剂量干预组间Keap1、Nrf2及maf蛋白及mRNA相对表达量均有统计学差异(P＜0.05)。结论:TFCB可明显抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖、迁移和侵袭,且其作用机制可能与TFCB阻滞Keap1-Nrf2-ARE信号通路的信号传导,抑制通路蛋白及mRNA合成有关。     

沉默FOXM1拮抗肝细胞生长因子对胃癌细胞SGC7901增殖、迁移和侵袭的诱导作用

目的:探索转录因子FOXM1在肝细胞生长因子(HGF)诱导胃癌细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用.方法:体外培养胃癌细胞SGC7901,根据不同处理将细胞分组:空白对照组、20 ng/ml HGF组、40 ng/ml HGF组、60 ng/ml HGF组、siRNA-scramble+HGF组、siRNA-FOXM1+HGF组.采用MTT法检测各组SGC7901细胞的增殖,Transwell法检测各组细胞的迁移和侵袭情况,qRT-PCR和Western blot法分别检测各组细胞中FOXM1 mRNA和蛋白水平.结果:与空白对照组相比,不同浓度HGF均能够促进胃癌细胞SGC7901增殖、迁移和侵袭,同时上调FOXM1的表达水平,并且呈浓度依赖性关系.沉默HOXM1表达能够明显抑制HGF对SGC7901细胞的增殖、迁移和侵袭的诱导作用.结论:HGF对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的诱导作用可能与上调FOXM1表达有关,沉默FOXM1表达能够抑制HGF的作用.     

CD88在胃癌组织中的表达及其对细胞侵袭能力的影响

目的观察CD88在胃癌组织中的表达水平,探索CD88的表达水平对胃癌细胞侵袭能力的影响及其机制。方法采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot方法检测CD88在癌及癌旁组织中mRNA和蛋白的表达水平。使用CD88特异性小干扰RNA(siRNA)转染人胃癌细胞株SGC7901,然后采用划痕及transwell方法检测细胞侵袭能力改变。结果在胃癌组织中,CD88 mRNA和蛋白表达水平明显比癌旁组织高,沉默CD88后,SGC7901的侵袭迁移能力明显减弱。结论 CD88在胃癌中表达增加,并可增强胃癌细胞的侵袭迁移能力,可为胃癌的靶向治疗研究提供新的靶点。     

沉默乙酰肝素酶对人胃癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的:探讨RNA干扰沉默乙酰肝素酶(heparanase, HPA)基因表达对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响.方法:根据人HPA基因序列转录RNA的位置及小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)设计原则,设计了4个靶位点,并构建了4个分别针对靶位点的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的质粒表达载体,同时合成了阴性和阳性对照质粒表达载体.采用阳离子脂质体法将以上质粒转染入人胃癌SGC-7901细胞,分别采用RT-PCR和Western印迹法检测转染前后HPA mRNA和蛋白表达的变化,选出对HPA沉默效果最佳的质粒,再应用Transwell小室基质侵袭实验和划痕损伤实验分别研究HPA表达沉默后对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移能力的影响.结果:质粒载体pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085沉默人胃癌SGC-7901细胞HPA mRNA和蛋白表达的效果最好.pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085转染组中穿透Transwell小室基质的SGC-7901细胞数(289.90±18.11)明显高于对照组(44.00±15.22) (P<0.05),SGC-7901细胞的迁移距离在48、72和96 h内 pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085转染组明显低于对照组(P<0.05). 结论:RNA干扰技术可沉默人胃癌SGC-7901细胞中HPA mRNA和蛋白表达,从而抑制SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力.HPA可能是治疗胃癌侵袭和转移的一个新靶点.     

CDKL1对胃癌细胞迁移及侵袭的作用

目的:探讨细胞周期素依赖激酶样蛋白1(CDKL1)对胃癌细胞系SGC7901迁移及侵袭的作用.方法:将胃癌细胞系SGC7901分为实验组及对照组,采用慢病毒转染siRNA至胃癌细胞构成实验组,转染无意义序列作为对照组.通过细胞划痕实验检测胃癌SGC7901细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测其侵袭能力;Western blot检测CDKL1低表达后对胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白表达的影响.结果:与对照组相比,CDKL1低表达后实验组细胞迁移及侵袭能力明显降低(P＜0.05),实验组胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白的表达水平明显下降(P＜0.05).结论:特异性下调CDKL1基因可抑制胃癌细胞的迁移及侵袭能力,表明CDKL1基因可促进胃癌细胞的侵袭以及转移,并且与AEG-1和MMP-9密切相关.     

TGF-β1通过诱导自噬促进胃癌SGC7901细胞侵袭

目的:探讨转化生长因子(TGF-β1)诱导人胃癌SGC7901细胞发生自噬的作用及其对细胞侵袭能力的影响.方法:将体外培养的人胃癌SGC7901细胞用不同浓度TGF-β1处理24 h,采用Western blot 法检测细胞中自噬标记蛋白LC3和Beclin1的表达水平.Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力变化.结果:TGF-β1可显著诱导人胃癌SGC7901细胞发生自噬,且随着浓度增加自噬表达水平逐渐升高.自噬抑制剂3-MA能够阻断TGF-β1诱导的自噬.此外,TGF-β1可显著增强人胃癌SGC7901细胞的迁移和侵袭能力,而自噬抑制剂3-MA能够逆转这一过程.结论:TGF-β1通过诱导自噬发生从而促进人胃癌SGC7901细胞的侵袭.     

敲低PRMT5基因表达对胃癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制

目的 观察蛋白质精氨酸甲基转移酶5（PRMT5）在胃癌细胞中的表达,探讨敲低PRMT5表达水平后对胃癌细胞生物学行为的影响。方法 Western blot检测胃癌细胞系MGC803、SGC7901、MKN45和人胃黏膜上皮细胞GES-1中PRMT5蛋白表达水平,转染siRNA1和siRNA2质粒敲低PRMT5的表达水平,细胞增殖和凋亡实验、Transwell实验分别检测细胞增殖能力、凋亡率和细胞的侵袭能力,Western blot检测β-catenin、Cyclin D1和Bax蛋白表达水平。结果 与GES-1细胞比较,MGC803、SGC7901和MKN45细胞中PRMT5蛋白表达水平增加（P<0.001）。敲低PRMT5表达后细胞的增殖和侵袭能力减弱,凋亡率增加（P<0.05）,β-catenin和Cyclin D1蛋白的表达降低,Bax蛋白的表达增加（P<0.001）。结论 PRMT5在胃癌细胞中表达水平升高,敲低其表达水平后可通过减弱Wnt/β-catenin信号通路转导抑制细胞的增殖和侵袭并促进细胞凋亡。     

lncRNA BCAR4通过调节Wnt/β-catenin信号通路对胃癌发生发展的影响

目的:探讨lncRNA BCAR4通过调节Wnt/β-catenin信号通路调控胃癌细胞的增殖和凋亡。方法:通过实时定量PCR法检测lncRNA BCAR4在胃癌组织和胃癌细胞中的表达;免疫组化方法分析胃组织中c-myc和cyclin D1蛋白的表达;通过MTT、克隆形成和流式细胞术分别检测lncRNA BCAR4对胃癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响,并通过Western blot法检测lncRNA BCAR4敲除前后对SGC7901细胞中c-myc、cyclin D1蛋白以及Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果:相比于癌旁组织以及胃黏膜上皮细胞,lncRNA BCAR4在人胃癌组织和胃癌细胞中表达显著升高（P＜0.01）;同时,c-myc和cyclin D1蛋白的表达在胃癌组织和胃癌细胞中也有所增加,尤其在SGC7901胃癌细胞中上调最为显著（P＜0.01）; lncRNA BCAR4敲除能够显著降低细胞活力,促进细胞凋亡（P＜0.01）。lncRNA BCAR4敲除能够显著抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化（P＜0.01）,进而降低其下游增殖相关蛋白c-myc和cyclin D1的表达（P＜0.01）。结论:降低lncRNA BCAR4能够通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化,从而降低下游c-myc和cyclin D1蛋白表达,导致胃癌细胞的增殖抑制,促进细胞凋亡。     

应用iTRAQ技术筛选预测食管鳞癌放化疗疗效优势蛋白的研究

目的:利用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术筛选预测食管鳞癌放化疗疗效的血清差异蛋白，以指导临床个体化治疗。方法:纳入52例诊断明确的局部晚期和晚期食管鳞癌患者，行规范放化疗，判断疗效及长期随访，同时收集患者治疗前、后血清。应用iTRAQ技术筛选放化疗疗效相关的血清差异蛋白。应用Uniprot、KEGG等数据库对差异蛋白进行生物学分析，筛选出与肿瘤相关、具有核心作用且介导肿瘤相关通路的优势蛋白。结果:疗效评价结果:放化疗敏感组（CR+PR）食管癌患者占59.62%（31/52例）；放化疗抗拒组（SD+PD）占40.38%（21/52例）。放化疗敏感组对比放化疗抗拒组:共筛选出17个有显著差异的差异蛋白，其中上调蛋白为脂联素（ADIPOQ）、IgL C7、血清转铁蛋白（TF）、中性粒细胞防御素（DEFA1）共4个，下调蛋白为聚合物免疫球蛋白受体（PIGR）、单核细胞分化抗原14（CD14）等13个。KEGG通路分析显示，TF、CD14可能分别参与HIF-1、MAPK信号通路的调节。结论:食管鳞癌患者外周血中能够筛选出预测放化疗疗效的潜在优势蛋白，并参与一些关键通路；TF、ADIPOQ、PIGR、CD14对于食管鳞癌放化疗疗效具有潜在的预测价值。     

miR-9-5p靶向FGF9抑制胃癌细胞迁移侵袭的作用机制

目的:探讨miR-9-5p在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞株SGC7901、AGS细胞迁移和侵袭影响的作用机制。方法:real-time PCR和Western blot检测癌旁组织、胃癌组织及其细胞系中miR-9-5p和FGF9的表达；Transwell小室检测过表达miR-9-5p或敲除FGF9对SGC7901和AGS细胞迁移和侵袭能力的影响；TargetScan在线分析、双荧光素酶报告基因和Western blot实验验证miR-9-5p和FGF9的靶向关系；将转染后的SGC7901细胞分为对照（NC）组和实验（miR-9-5p）组接种于裸鼠右侧腋窝皮下，观察记录裸鼠成瘤情况并绘制生长曲线。结果:与癌旁组织相比，胃癌组织及其细胞系中miR-9-5p表达下调、FGF9表达上调（P＜0.05）；过表达miR-9-5p或敲除FGF9能抑制SGC7901、AGS细胞迁移和侵袭；TargetScan在线分析、双荧光素酶报告基因和Western blot实验表明miR-9-5p能调控FGF9表达；miR-9-5p组细胞成瘤速度较NC组慢（P＜0.05），肿瘤体积及重量小（P＜0.05）。结论:miR-9-5p在胃癌组织中表达下调，过表达miR-9-5p可抑制FGF9表达，从而抑制胃癌细胞的迁移和侵袭，减缓肿瘤生长。     

沉默PD-L1基因表达抑制胃癌细胞黏附、迁移、侵袭及上皮间质转化

目的:初步探讨程序性死亡受体配体（programmed death-ligand 1,PD-L1）对胃癌细胞SGC7901侵袭、迁移的影响及PD-L1表达对上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响。方法:采用siRNA干扰技术,下调SGC7901细胞株中PD-L1的表达,采用RT-PCR法及Western blot法验证PD-L1的沉默,并将后续实验分为空白对照组、空载体组（siRNA-NC组）及PD-L1沉默组（siRNA-PD-L1组）。采用RT-PCR法及Western blot法分别对各组细胞EMT相关指标（E-cadherin、Vimentin、Snail）的mRNA和蛋白表达情况进行检测。利用MTT实验比较各组细胞的黏附能力,Transwell小室实验比较各组细胞的迁移能力及侵袭能力。结果:下调PD-L1表达后,siRNA-PD-L1组Vimentin及Snail 两项指标的mRNA和蛋白表达量,细胞的黏附能力、迁移能力及侵袭能力均低于空白对照组和siRNA-NC组,E-cadherin mRNA和蛋白表达量高于其他两组,差异均具有统计学意义（P＜0.001）,而空白对照组和siRNA-NC组之间上述指标的差异无统计学意义。结论:PD-L1的表达影响胃癌细胞黏附、迁移、侵袭等生物学行为,促进胃癌细胞的上皮间质转化,与胃癌的预后可能存在相关性。     

下调PHLDB3对胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR药物敏感性的影响

目的:探讨下调PHLDB3对胃癌耐药细胞系 SGC7901/ADR 药物敏感性的影响。方法:采用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹技术（Western blot）的方法检测胃癌及癌旁正常组织中PHLDB3的表达（分别是20对和10对）;qRT-PCR和Western blot检测PHLDB3在胃癌细胞系 SGC7901以及胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR和SGC7901/VCR中的表达;MTT法检测SGC7901、SGC7901/ADR及转染PHLDB3 siRNA后 SGC7901/ADR的半数抑制浓度（IC50）值;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:qRT-PCR和Western blot结果显示:PHLDB3在胃癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织（P<0.000 1）;PHLDB3在耐药细胞系SGC7901/ADR和SGC7901/VCR中的表达明显高于其亲本细胞系SGC7901（P<0.000 1和P<0.05）。Western blot结果显示:相对于转染 PHLDB3 negative control（NC）组,转染 PHLDB3 siRNA组的SGC7901/ADR细胞中PHLDB3的表达降低（P<0.005）。MTT结果显示:SGC7901与 SGC7901/ADR的IC50值分别为（1.5±0.1） μg/ml与（5.5±0.2） μg/ml（P<0.000 1）;SGC7901/ADR 转染 PHLDB3 siRNA 后对顺铂的IC50值明显下降（P<0.05）。流式细胞术（flow cytometry,FCM）检测凋亡,结果显示:下调PHLDB3的表达后,SGC7901/ADR细胞的凋亡率明显增加（P<0.05）。结论:PHLDB3能够促进胃癌细胞系 SGC7901/ADR产生多药耐药。     

FMNL2通过Rho信号通路促进胃癌细胞的侵袭和迁移

目的:研究同源形成素样蛋白2（FMNL2）是否通过Rho信号通路促进胃癌细胞的侵袭和迁移。方法:利用Oncomine数据库中的大数据分析FMNL2在胃癌及癌旁组织中的表达水平。运用实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blot）检测胃癌细胞系中FMNL2 mRNA和蛋白的表达情况,使用shFMNL2质粒和空载质粒转染胃癌细胞系,并分为敲减组和对照组。采用 CCK8法、划痕实验、Transwell侵袭实验分析细胞的生物学功能,包括增殖、迁移及侵袭能力,利用Western blot方法检测两组细胞经Rho信号通路抑制剂Y27632处理后的E-cadherin、Vimentin及Rho信号通路相关蛋白的表达情况。结果:经生物信息学分析发现FMNL2在胃癌组织中高表达。同样FMNL2在胃癌细胞中表达水平升高。划痕实验和Transwell侵袭实验结果表明敲减组的迁移和侵袭能力显著下降。Western blot结果显示与对照组相比,E-cadherin在敲减组表达上调,Vimentin、RhoA、ROCK在敲减组表达下调。加入通路抑制剂Y27632后,EMT相关蛋白表达可被逆转。结论:下调FMNL2的表达可抑制胃癌细胞的侵袭迁移能力,并且可通过抑制Rho信号通路来实现。     

剪接因子SF3b6通过MAPK信号通路促进胃癌细胞的增殖和迁移

目的：探讨剪接因子3b亚基6（splicing factor 3b subunit 6,SF3b6）对胃癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等的影响及其作用机制。方法：通过组织芯片检测 SF3b6 在胃癌和癌旁组织中的表达,采用 WB 和 qPCR检测SF3b6在正常永生化胃上皮细胞(GES-1)和胃癌细胞系(HGC27、AGS、BGC823、MGC803、SGC7901、MKN45)中的表达水平。选取AGS和MGC803细胞转染SF3b6-siRNA、BGC823和SGC7901细胞转染SF3b6过表达质粒进行功能实验,CCK-8实验检测SF3b6对胃癌细胞增殖的影响,Transwell迁移和侵袭实验检测SF3b6对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡水平,WB检测凋亡和迁移相关分子及MAPK信号分子在蛋白水平的变化。结果:SF3b6在胃癌细胞MGC803和AGS表达水平高于正常胃上皮细胞GES-1,而在BGC823和SGC7901细胞中低于GES-1细胞（P<0.05或P<0.01）。敲低SF3b6的表达抑制了胃癌细胞系AGS和MGC803的增殖、迁移和侵袭,并促进了细胞凋亡（P<0.05或P<0.01）;过表达SF3b6促进了胃癌细胞系BGC823和SGC7901的增殖、迁移和侵袭（P<0.05或P<0.01）。机制研究表明,敲低SF3b6表达促进了JNK 和 P38 的活化,以及凋亡相关蛋白 cleaved caspase-9、cleaved PARP、Bax的表达（P<0.05或P<0.01）,同时抑制胃癌细胞上皮间质转化的进程。结论：剪接因子SF3b6通过MAPK信号通路增强胃癌细胞增殖和迁移,促进胃癌的发展进程。     

Upregulation of soluble resistance-related calcium-binding protein (sorcin) in gastric cancer

The aim of this paper was to identify novel proteins involved in the development of gastric cancer (GC). Isobaric tags for relative and absolute quantification (iTRAQ) analysis was adopted to separate the differentially expressed proteins between normal gastric epithelial cell line GES-1 and GC cell line SGC7901. Western blotting was utilized to validate the increased expression of sorcin in SGC7901; immunohistochemistry was performed to investigate its relationship with clinicopathological features of GC. Twelve differential proteins were identified. Seven proteins were found to be significantly upregulated (≥twofold), while five proteins were markedly downregulated (≤0.5-fold), in SGC7901 cells. Sorcin was detected by this proteomic approach with a 5.4-fold upregulation in SGC7901. Western blotting and immunohistochemistry confirmed the overexpression of sorcin in GC. Immunohistochemistry showed us that sorcin was overexpressed in 55 samples of GC tissue (55/85, 64.71%) and was related closely to the depth of invasion, TNM stage, and lymph node metastasis of GC (P < 0.05). The development of GC is regulated by multiple genes. Sorcin will be a novel molecular biomarker for the diagnosis, treatment, and prognosis of GC.