免疫印迹法测定Tp47蛋白与梅毒患者血清的免疫反应性

目的克隆Tp47基因、构建原核表达载体、表达并纯化Tp47蛋白,通过免疫印迹法(Western-Blot)检测其免疫反应活性。方法聚合酶链反应扩增Tp47基因,将Tp47克隆至pGEX-6P-1载体,构建重组表达质粒pGEX-6P1-Tp47,经测序鉴定正确后,转化大肠埃希菌BL21(DE3),经诱导表达后,用亲和层析方法纯化重组蛋白,鉴定正确后采用Western-Blot检测重组蛋白与梅毒阴性、阳性血清的免疫反应性。结果成功构建pGEX-6P1-Tp47原核表达质粒,表达、纯化后获得了相对分子质量约为71×103的重组蛋白;Western-Blot检测显示其能与梅毒阳性患者血清发生特异性反应,而与梅毒阴性患者血清无交叉反应性。结论成功克隆、表达、纯化Tp47重组蛋白,其与临床各期梅毒患者血清具有较好的免疫反应性,为Tp47重组蛋白用于梅毒早期诊断提供了理论依据。     

木瓜总黄酮抗肿瘤活性研究

目的:研究木瓜总黄酮抗肿瘤活性。方法:通过乙醇-正丁醇萃取方法提取木瓜总黄酮;通过分子药物筛选模型、酶联免疫法检测木瓜总黄酮对免疫共刺激分子程序性死亡因子(PD)-1与其配体(PD-L1)结合的抑制作用。通过H22肿瘤细胞模型小鼠,观察木瓜总黄酮对模型小鼠体内肿瘤体积与存活时间的影响;流式细胞仪测定小鼠腹水中肿瘤细胞及淋巴细胞表面相关分子的表达。结果:正丁醇馏分中木瓜总黄酮占85%。木瓜总黄酮具有抑制PD-1和PD-L1结合的作用,且抑制效率具有剂量依赖性。木瓜总黄酮在复制模型10 d后对模型小鼠体内肿瘤有明显抑制作用;对S180细胞表面PD-L1表达具有明显抑制作用,对体内淋巴细胞侵润有明显增强作用。结论:木瓜总黄酮可以抑制PD-1与PD-L1的结合,同时可降低肿瘤细胞表面PD-L1的表达从而促进机体对肿瘤的免疫应答,最终达到抑制肿瘤生长,提高肿瘤鼠存活率的作用。     

四种细胞系培养沙眼衣原体易感性的比较

目的:比较McCoy、Hela、Vero、HaCat四种细胞培养沙眼衣原体的易感性及药物敏感性试验结果。方法:将5 000和1 000 IFU的衣原体分别接种到McCoy、HeLa、Vero、HaCat细胞中,培养48和72 h,通过碘染色和单克隆荧光抗体染色法,观察衣原体包涵体的数量。比较四种细胞对衣原体的易感性和两种染色方法的敏感性。培养McCoy和HeLa细胞,进行10株衣原体临床株对5种抗生素的药物敏感性试验,观察衣原体的最小抑菌浓度(MIC)。结果:在衣原体感染后48 h和72 h,比较McCoy、HeLa、Vero与HaCat细胞对沙眼衣原体的易感性,差异均具有统计学意义(P0.05)。在相同接种浓度下,碘染色观察McCoy和HeLa细胞中衣原体包涵体数量比HaCat细胞多,Vero细胞中包涵体数量最少;荧光染色时,McCoy和HeLa细胞中衣原体包涵体数量较多,HaCat细胞包涵体数量最少。衣原体感染48 h,碘染和荧光染色计数McCoy、HeLa和HaCat细胞内包涵体数量无明显差异(P0.05),Vero细胞具有明显差异(P0.05)。在McCoy和HeLa细胞中,5种抗生素对衣原体的最小抑菌浓度范围基本相同。结论:沙眼衣原体对McCoy细胞和Hela细胞有较高的易感性,碘染色观察Vero细胞中衣原体包涵体敏感性低,衣原体在McCoy和Hela细胞中的药敏试验结果一致。     

顺铂联合米托蒽醌调节脑胶质瘤U87细胞Sonic Hedgehog信号通路的研究

目的：观察米托蒽醌（Mitoxantrone,MXT）联合顺铂（Cisplatin,CDDP）对脑胶质瘤U87细胞杀伤活性及对Sonic Hedgehog信号通路的影响。方法：应用MTT法检测不同浓度米托蒽醌、顺铂以及两药物联合对U87细胞成活率的影响。显微镜观察细胞的形态变化DiOC6荧光染料对细胞线粒体染色检测其膜电位变化来反映细胞凋亡。RT-PCR法检测顺铂、米托蒽醌及两药联合对U87细胞Gli1和Ptch基因表达的影响。结果：MTT结果显示顺铂、米托蒽醌均可以有效抑制U87细胞的增殖,当米托蒽醌和顺铂浓度≤0.625μg/ml时,两药联合对U87细胞增殖具有协同抑制作用;细胞形态变化及线粒体膜电位结果显示,单药处理可促进U87细胞凋亡,而联合用药可以协同促进U87细胞的凋亡;RT-PCR法检测显示顺铂对Gli1基因的表达有上调作用,而米托蒽醌、米托蒽醌联合顺铂能下调Ptch和Gli1基因的表达。结论：胶质瘤U87细胞在化疗药物米托蒽醌以及两药物联合作用下可影响Sonic Hedgehog信号通路,协同发挥其促凋亡作用,进而增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。     

广东省9个城市性病门诊男性就诊者生殖道沙眼衣原体感染危险因素分析

目的 了解性病门诊男性就诊者生殖道沙眼衣原体（genital Chlamydia trachomatis,GCT）感染现状及危险因素,加强该人群GCT监测,为针对该人群开展干预工作提供依据。方法 2015年4-6月结合HIV监测哨点开展研究,选取性病门诊男性就诊者为调查对象,开展匿名问卷调查及检测。结果 本次共纳入就诊者1 749例,平均年龄（39.53±14.36）岁,多数为已婚（73.87%,1 292/1 749）、广东籍（92.28%,1 614/1 749）、汉族（99.49%,1 740/1 749）;GCT阳性率、HIV阳性率、梅毒阳性率、HCV阳性率、淋球菌阳性率、尿常规白细胞阳性率分别为6.06%（106/1 749）、0.46%（8/1 749）、3.43%（60/1 749）、0.45%（7/1 550）、2.74%（48/1 749）、7.89%（138/1 749）。多因素logistic分析显示,GCT感染相关危险因素包括注射吸毒（OR=13.98,95% CI：3.35～58.38）、与男性发生过肛交（OR=3.11,95% CI：1.45～6.71）、淋球菌阳性（OR=9.64,95% CI：5.09～18.24）、尿常规白细胞阳性（OR=1.96,95% CI：1.08～3.55）。结论 广东省性病门诊男性就诊者GCT感染率较高,该人群为性病艾滋病防控的高危人群,应针对不同地区的人群特点,实施精准干预。     

珠海地区淋球菌耐药性监测及耐药质粒分型

目的 监测珠海地区2015-2016年淋球菌临床分离株对常用抗菌药物的敏感性,了解质粒介导的TEM-1和tetM基因分子流行情况.方法 用琼脂稀释法测定淋球菌对7种抗菌药物(青霉素、四环素、环丙沙星、头孢克肟、大观霉素和阿奇霉素)的最低抑菌浓度(MIC).采用纸片酸度法测定产青霉素酶淋球菌(PPNG),PCR方法分别扩增TIEM-1和tetM耐药质粒基因片段,电泳分析其耐药质粒型别.结果 93株淋球菌中检出PPNG共26株(27.96％)、耐四环素淋球菌(TRNG)24株(25.81％).93株淋球菌对青霉素、四环素、环丙沙星、阿奇霉素的耐药率分别40.86％、75.27％、100.00％、7.53％,青霉素低敏率为51.61％;未发现对大观霉素、头孢曲松、头孢克肟耐药菌株,但对头孢克肟的低敏率达到30.11％.耐药质粒分型结果PPNG亚洲型15株(57.69％),非洲型11株(42.31％),未检出多伦多/里约型;TRNG荷兰型23株(95.83％),美国型1株(4.17％).结论 珠海地区淋球菌对四环素、环丙沙星、青霉素耐药率较高,但对头孢曲松和大观霉素敏感率高,可作为治疗淋病的首选药物;PPNG以亚洲型和非洲型为主,TRNG以荷兰型为主,偶见美国型.     

小鼠PD-1胞外段的克隆、原核表达及活性分析

目的小鼠PD-1胞外段(ePD-1)原核表达载体的构建、表达、纯化及其生物学效应初步研究。方法应用小鼠脾细胞总RNA,采用RT-PCR克隆PD-1胞外段基因,将其重组到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达载体pGEX-4T-1-ePD-1,转化至E.coli DH5α,筛选阳性菌落,进行酶切及测序鉴定。将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-ePD-1转化至E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot检测,同时通过蛋白质纯化仪纯化GST-ePD-1融合蛋白。利用流式细胞术和Alamar Blue法,检测纯化的PD-1胞外段融合蛋白对淋巴细胞增殖的影响,评价其生物学活性。结果成功构建重组质粒pGEX-4T-1-ePD-1,并在E.coli BL21(DE3)中获得了成功表达,利用蛋白质纯化仪得到纯化的GST-ePD-1融合蛋白。流式细胞术和Alamar Blue法结果均显示,不同浓度的融合蛋白作用于混合淋巴细胞,与阴性对照相比,可明显促进淋巴细胞的增殖。结论成功地克隆、表达和纯化了小鼠ePD-1蛋白,纯化的重组蛋白可有效促进淋巴...     

各期梅毒患者治疗前IgG、IgA和IgM抗体表达差异的研究

目的:分析梅毒各个时期治疗前IgG、IgA和IgM抗体的表达差异。方法:采用免疫印迹法检测已确诊的34份不同时期(一期8例,二期15例,三期11例)梅毒患者治疗前血清中IgG、IgA和IgM Tp蛋白表达情况。结果:IgG抗体Tp47、Tp45、Tp34和Tp15在治疗前各期梅毒患者血清中均100%表达,Tp33在三期梅毒中的阳性率(63.6%)明显低于一、二期梅毒(均为100%),差异有统计学意义(P=0.009)。IgA抗体各期表达无明显差异,其中一期梅毒中Tp41、Tp34、Tp33和Tp30抗体以及三期梅毒中Tp33均无阳性条带出现。IgM抗体Tp41和Tp37在各期梅毒患者血清中阳性率差异有统计学意义(P值分别为0.035、0.020),其余差异均无统计学意义。结论:强阳性的Tp蛋白Tp47、Tp45和Tp15可作为早期梅毒诊断的指标;在各期表达有明显差异的Tp41、Tp37和Tp33可考虑作为临床分期观察指标;Tp45、Tp41、Tp17和Tp15可作为以后临床治疗效果的辅助诊断参考。     

妊娠合并腹水疾病的分类及诊治

妊娠期合并腹水在临床常见,但腹水成因复杂,容易误诊误治,严重影响母婴健康,因此明确腹水原因并进行相关治疗至关重要.本文分别从母体因素(妊娠相关性腹水、肝性腹水、肿瘤性腹水等)及胎儿因素(镜像综合征)等妊娠期腹水病因、鉴别与诊治要点做一总结,为该类疾病的临床诊治工作提供参考.     

杂交链反应在超灵敏检测方面的应用进展

DNA在生命活动中具有重要意义,针对DNA检测技术日益增多,近些年一种无酶等温高效的超灵敏扩增技术,杂交链反应(HCR)逐渐引起广泛的关注。HCR,仅在特定的核苷酸引发物(NI)和两个特殊设计的发夹DNA(H1,H2)同时存在的情况下进行自组装,实现了原位扩增反应。由于NI,H1,H2的可编辑性及可修饰性,使得HCR适用于分子生物学的各个领域,具有广泛的应用前景。该文通过HCR在核酸检测、蛋白检测、细胞检测及生物成像等方面的应用进展来探究其优点和不足。