Keap1-Nrf2-ARE信号通路在多器官疾病中的研究进展

<正>Nrf2作为细胞抗氧化应激反应的核心转录因子,能够激活内源性抗氧化应答。在生理状态下,Nrf2分子与胞浆中的Keap1蛋白分子结合而处于非活性状态,通过泛素化-蛋白酶体途径进行降解,无法进入细胞核发挥转录活性。当机体受到亲电试剂刺激或处于氧化应激状态时,Nrf2与Keap1解偶联,Nrf2磷酸化后转移入核并与抗氧化反应原件(antioxidant response element,ARE)上的相应位     

3D腹腔镜下前列腺癌根治术34例分析

目的 探讨经腹膜外3D腹腔镜下前列腺癌根治术的优缺点. 方法 收集分析2014年1月至2015年4月于我科行经腹膜外Storz及Viking 3D腔镜下前列腺癌根治术的34例患者的相关临床资料. 结果 34例手术均成功.手术时间78～195 min,平均115 min.出血量70～750 ml,平均约209 ml,2例输血.术中未出现直肠、双侧输尿管和其他脏器损伤.术中、术后未出现心肺并发症.13例患者拔出导尿管后轻度尿失禁,经治疗后12例痊愈,1例生物反馈治疗中.3例术后病理提示尿道切缘阳性.10例保留性功能手术中5例勃起功能3个月内恢复. 结论 3D腔镜技术在前列腺癌根治术中具有优势,尤其是在缝合及精细操作方面.     

正常前列腺间质细胞对前列腺癌细胞糖代谢水平的影响

目的:探讨正常前列腺组织不同区带来源的前列腺间质细胞对前列腺癌细胞生长的影响及其作用机制。方法:以激素非依懒性前列腺癌细胞系DU145细胞为研究对象,取新鲜的正常前列腺外周带(PZ)和移行带(TZ)组织,提取间质细胞并体外培养。收集不同区带来源的间质细胞培养上清作为条件培养液培养DU145细胞,CCK8法测定肿瘤细胞的生长曲线,台盼蓝染色测定细胞数量及活力,细胞划痕实验测定细胞侵袭性,Western印迹法测定间质细胞对肿瘤细胞糖代谢关键酶的影响。结果:1PZ间质细胞的条件培养液能促进肿瘤细胞的生长,而TZ间质细胞的条件培养液抑制肿瘤细胞的生长;2PZ间质细胞的条件培养液明显增加肿瘤细胞糖代谢关键酶己糖激酶2(HK-2)、丙酮酸激酶2(PKM-2)、乳酸脱氢酶(LDHA)、丙酮酸脱氢酶(PDH)的表达,而TZ则抑制上述酶的表达。结论:前列腺不同来源的间质细胞对肿瘤细胞的生长影响不同,其机制可能与不同来源的间质细胞对糖酵解代谢的影响不同有关。     

ATF3和CTGF基因在尿道下裂患者包皮中的表达及雌激素调控研究

目的:雌激素与尿道下裂的发生关系密切,本研究旨在比较尿道下裂患儿包皮和同龄正常儿童包皮中转录激活因子3(ATF3)和结缔组织生长因子(CTGF)的表达,明确二者与尿道下裂的关系,探寻雌激素引起尿道下裂的分子机制。方法:从包皮中分离成纤维细胞并原代培养,用不同浓度(1.0μmol/L、0.1μmol/L、10.0nmol/L、1.0nmol/L、0.1nmol/L)的17-β乙炔雌二醇(17-EE)处理2h,或选择0.1μmol/L的17-EE处理不同时间(0.5、1、2、4、8、16、24h),观察17-EE对ATF3和CTGF表达的影响。MTT法检测17-EE对细胞增殖的影响,RT-PCR法观察成纤维细胞ATF3和CTGF表达情况。结果:尿道下裂患者包皮中ATF3和CTGF的表达显著高于正常人包皮组织(P<0.05);高浓度的17-EE干预对包皮成纤维细胞有抑制作用;在17-EE干预早期(1～2h)ATF3的表达呈现一过性增加;CTGF的表达在24h内17-EE干预未见明显变化。结论:ATF3和CTGF是与尿道下裂密切相关基因,雌激素可能通过上调ATF3和CTGF的表达参与调节生殖结节的异常发育,导致尿道下裂。     

人脂肪干细胞与猪尿路上皮细胞隔离共培养后向尿路上皮样细胞分化

目的 研究人脂肪干细胞与猪尿路上皮细胞体外隔离共培养后向尿路上皮样细胞转化的可行性.方法 从人抽脂术后脂肪组织中提取脂肪干细胞,同时从猪膀胱中获取尿路上皮细胞,两种细胞体外培养扩增后,通过"Trans-well"体系进行体外隔离共培养3周.倒置显微镜下观察脂肪干细胞形态变化.RT-RCP鉴定诱导后人脂肪干细胞中尿路上皮特异性标记Uroplakin-Ⅱ在基因水平的表达,免疫荧光鉴定AE1/AE3和Uroplakin-Ⅱ在蛋白水平的表达情况.结果 人脂肪干细胞与猪尿路上皮细胞体外隔离共培养3周后,倒置显微镜可见细胞折光性变强,细胞触角缩短,依然保持良好的增殖状态,但未见典型的尿路上皮细胞"铺路石样"改变.免疫荧光发现AE1/AE3和Uroplakin-Ⅱ均有表达,RT-PCR检测发现Uroplakin-Ⅱ基因表达阳性.结论 人脂肪干细胞与猪尿路上皮细胞隔离共培养后,可以表达成熟尿路上皮特异性标记,说明脂肪干细胞可以向尿路上皮样细胞分化.     

乳腺钙化组织中骨桥蛋白的表达及其临床意义

目的 检测骨桥蛋白（osteopontin protein,OPN）mRNA在含钙化灶乳腺组织中的表达,及其在乳腺癌转移发生发展中的意义.方法 采用RT-PCR法检测128例乳腺病变组织及相应癌旁乳腺组织和9例乳癌转移淋巴结中骨桥蛋白mRNA的表达.结果 骨桥蛋白mRNA表达在含钙化灶乳腺癌组织及转移淋巴结组织中表达最高,良性钙化灶乳腺组织次之,而在癌旁乳腺组织及良性无钙化病变组织中表达最低,差异有显著意义（P＜0.05）.结论 骨桥蛋白的表达与乳腺癌组织钙化有关,并可能与乳腺癌的发生有关,检测其表达水平,可望能指导临床治疗,评判患者预后.     

基质细胞在DU145前列腺癌细胞种植小鼠肿瘤模型中的作用

目的探讨前列腺基质细胞对肿瘤发生的作用。方法将BALB／c裸鼠分为两组,每组10只,对照组（D组）裸鼠皮下单纯注射前列腺癌细胞株DU145细胞,实验组（D＋P组）混合注射DU145细胞和前列腺外周带分离的基质细胞（PrSC）,注射后第9周收集肿瘤组织,记录肿瘤重量。采用TUNEL法检测凋亡细胞的数量,采用免疫组织化学法标记α-SMA、Ki67和P53阳性细胞,分别检测肿瘤组织中基质细胞和血管数目,增殖细胞的数目和P53蛋白的表达。结果D＋P组瘤重、血管数量和增殖细胞多于D组,但凋亡细胞和P53的表达两组之间差异并无统计学意义。结论基质细胞在肿瘤产生中发挥了重要作用,PrSC的作用可能是促进肿瘤细胞增殖和血管生成,对细胞的凋亡影响较小。     

正常人前列腺外周带和移行带成纤维细胞差异性基因表达与蛋白分泌的研究

目的:寻找正常人前列腺外周带和移行带细胞在基因表达水平及相关信号通路蛋白表达水平的差异.试图从机理上探求两者在不同前列腺疾病中所占比例不同的原因.方法:用Trizol一步法从外周带(PZ)和移行带(TZ)成纤维细胞中抽提总RNA.通过定量RT-PCR技术测定CXCL1、CXCL2、CXCL3、IGFBP2、IGFBP3、IL-8、TA GLN、MEST的基因表达水平.此外,从PZ、TZ 成纤维细胞条件培养基中收集、浓缩分泌的蛋白,通过Western blotting技术比较分析分泌蛋白的水平.结果:一些分泌蛋白的基因表达水平在PZ与TZ成纤维细胞存在显著差别,其中CXCL1、CXCL2、CXCL3与IL-8的mRNA在TZ成纤维细胞中的表达水平明显高于其在PZ成纤维细胞中的表达水平.而IGFBP2、IGFBP3与TAGLN的mRNA在PZ成纤维细胞中的表达水平明显高于其在TZ成纤维细胞中的表达水平.IGFBP3与TAGLN在PZ成纤维细胞中的蛋白分泌水平明显高于其在TZ成纤维细胞中的蛋白分泌水平.结论:PZ与TZ成纤维细胞中基因表达及蛋白分泌水平的差异可能参与导致前列腺癌与前列腺增生(BPH)发病率在前列腺不同区带的显著区别.     

门静脉动脉化及部分肝切除术对肝硬化的影响

目的研究行部分肝切除术后PVA对肝硬化的影响,证实PVA能促进部分肝切除术后肝细胞再生,改善肝硬化。方法肝硬化模型犬随机分三组,A组肝脏42％切除＋门静脉动脉化;B组肝脏42％切除;C组对照组。实验中按计划行多普勒超声检查,血化验研究肝功能变化,检测血管内皮细胞标记抗原CD。结果A组肝重显著高于B组（P〈0．01）;A组肝功能的改善亦加快;血流动力学改变在术后A组高于其余二组;免疫组化检测血管内皮细胞标记抗原CD34计数A组高于其余二组。结论①门静脉动脉化有助于部分肝切除术后肝功能的改善;②门静脉动脉化增加肝细胞再生及改善肝硬化。