AtheNA Multi—Lyre自身抗体自动化检测系统检测抗核抗体的性能评价

目的评价Luminex公司基于多元微珠流式点阵分析（MBA）技术研制的AtheNA Multi—Lyte自身抗体自动化检测系统检测抗核抗体的性能。方法用AtheNA Multi—Lyte系统检测146例确诊的自身免疫性疾病患者,ZOO例本实验室常规送检的连续标本和90例献血者血清中的抗SSA、抗SSB、抗ds-DNA、抗rRNP、抗Sm、抗Jo-1、抗Scl-70、抗组蛋白抗体和ACA,与传统的ANAHep-2IFA和单个可提取核抗原（ENA）标志物的ELISA法比较。结果AtheNA系统与Hep-2IFA法和ELISA法在自身免疫疾病、常规送检标本、献血者的符合率为分别为：81．5％、79．5％、96．7％和95．9％、96．5％、98．9％。436份标本分析中AtheNA系统与ELISA单个标志物抗（SSA、SSB、ds—DNA、rRNP、Sm、Jo-1、Scl-70、组蛋白）抗体和ACA的符合率分别为：95．2％、95．0％、96．1％、89．9％、85．1％、93．1％、97．0％、94．3％、97．9％。结论AtheNAMulti—Lyte检测系统在特异性自身抗体检测上提供了均相、多元而且客观的崭新方法,在单一微孔中实现同时对多种自身抗体的定性、定量分析,与ELISA结果相比,有较高的敏感性、特异性和一致性。使传统的抗核抗体检测实现了自动化。     

去唾液酸糖蛋白受体H1亚单位基因片段的克隆表达及其检测自身免疫性肝炎的价值

Objective To clone and express the human asialoglycoprotein receptor(ASGPR) H1 subunit, purify and identify the immunoreactivity of the recombinant protein, and establish the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) to detect anti-ASGPR antibodies in diagnosis of autoimmune hepatitis. Methods The CRDHI cDNA (435 bp) was subcloned into eukaryotic vector PEGH, and the recombinant protein expression was induced by D (+)-Galactose. The recombinant CRDH1 was purified with Glutathione Sepharose 4B, and its immunoreactivity was identified by SDS-PAGE and western blot as well as MALDI-TOF. ELISA was established to detect the anti-ASGPR antibodies in serum samples of 45 patients with AIH, 30 patients with SLE, 30 patients with RA, 10 patients with SS and 30 normal controls. Results The sequencing of recombinant plasmid showed the CRDH1 gene was successfully inserted to the eukaryotic expression vector with correct sequence and open reading frame. The fusion protein showed a molecular weight of 42 500 Da on SDS-PAGE gel and confirmed to be the human ASGPR by MALDI-MS through peptide mass fingerprint analysis with Mascot in human protein database. It shared 98. 34% homology with ASGPR H1 subunit. Western blot analysis showed that the fusion protein had the same immunoreactivity as human ASGPR. The results of ELISA indicated that the positive rate of anti-ASGPR was 35.6% ( 16/45 ), but the ELISA was negative in other control. There was significant difference of positivity of the autoantibodies between AIH and non-AIH controls (χ2 = 31.85,P < 0. 01 ). Conclusions The human plasmid containing ASGPR is successfully clone into Saccharomyces cerevisiae Y258. The recombinant autoantigen owns good antigenicity and specificity. ELISA established with the purified protein shows good specificity for diagnosis of AIH.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中趋化因子受体CXCR3 mRNA表达水平变化

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中CXCR3mRNA表达及其与疾病发病机制、疾病活动性的关系.方法 采用逆转录实时荧光定量(FQ-RT)-PCR的方法,在Light Cycler Real time PCR检测仪上检测59例PBC患者(活动期29例、缓解期30例)、结缔组织病(CTD)患者20例(疾病对照组)、健康体检者29名(健康对照组)外周血PBMC中CXCR3 mRNA的表达水平和含量.以Act=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)比较基因表达水平的变化.结果 活动期PBC患者CXCR3 mRNA表达水平(Act=5.41±2.69)明显高于缓解期PBC患者(Act=7.77±2.74,t=3.39,P＜0.01);活动期PBC患者CXCR3 mRNA表达水平(Act=5.41±2.69)明显高于正常对照组(Act=7.16±2.76,t=2.45,P＜0.01)和疾病对照组(Act:7.24±2.75,t=2.53,P＜0.01);缓解期PBC患者CXCR3 mRNA表达水平与正常人及疾病对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PBC患者CXCR3 mRNA表达水平显著高于正常人、疾病对照组和疾病缓解期,提示CXCR3的表达与PBC的发生发展存在一定关联性.     

原发性胆汁性肝硬化患者血清抗酿酒酵母抗体不同亚型的临床意义初探

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者血清中不同亚型的抗酿酒酵母抗体（ASCA）的临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测130例PBC患者、81例肝病（LDC组）患者、110例炎症性肠病（IBD组）及35例健康对照者血清ASCA的 IgA和IgG亚型.结果 PBC患者血清中ASCA-IgA亚型阳性率为22.3%,ASCA-IgG亚型阳性率10.0%;ASCA-IgA或ASCA-IgG亚型阳性率为26.9%;ASCA-IgA和ASCA-IgG亚型同时阳性率5.4%,PBC组患者ASCA-IgA或ASCA-IgG阳性率、ASCA-IgA阳性率与LDC、IBD组比较差异均无统计学意义（均P ＞0.05）,但与健康对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;PBC组患者ASCA-IgA和ASCA-IgG同时阳性者阳性率、ASCA-IgG阳性率与LDC、IBD、健康对照组比较差异均无统计学意义（均P ＞0.05）,但ASCA-IgG亚型阳性率低于IBD组中的克罗恩病患者的22.0%（P＜0.05）.在PBC患者的AMA-M2和抗SP100抗体阴、阳性组中的ASCA-IgA、IgG亚型的检出率差异无统计学意义（P ＞0.05）,抗GP210抗体阳性组中的ASCA-IgA或IgG亚型检出率高于抗GP210抗体阴性组（P＜0.05）.ASCA-IgA阳性的PBC患者组中的TBil、IgA、IgM高于阴性组,ALB低于阴性组（P＜0.05）;ASCA-IgG阴、阳性组中的PBC患者的肝脏生化、免疫学指标均无统计学意义（均P ＞0.05）.结论 ASCA-IgA或ASCA-IgG可作为PBC患者的自身抗体在血清中存在,且ASCA-IgA 亚型与PBC的发病机制中存在一定的关系,并与PBC的预后有关.     

软骨寡聚基质蛋白在脊柱关节病患者血清中的水平及意义的研究

目的探讨血清软骨寡聚基质蛋白（COMP）水平与脊柱关节病（SpA）患者病情活动及骨破坏的相关性。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法,检测38例SpA患者、18例正常人及10例注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体一抗体融合蛋白（商品名益赛普）治疗前后SpA患者血清COMP水平、血沉及C反应蛋白,并行骶髂关节CT分级．记录患者BAS、ASDAS评分及夜间脊柱痛视觉评分（VAS）,分析其与COMP的相关性。结果SpA患者组血清COMP水平为（30．835±8．539）ng／ml,明显高于正常对照组的（12．639±2．939）ng／ml（P〈0．01）;病情活动组血清COMP水平为（34．168±7．988）ng／ml．明显高于非活动组的（25．122±6．243）ng／ml（P=0．01）;治疗后SpA患者血清COMP水平为（17．670±7．199）ng／ml．较治疗前的（35．645±7．381）ng／ml明显下降（P〈0．01）。COMP水平与夜间脊柱痛VAS、ESR、CRP及骶髂关节CT分级正相关．与BSADAI、BSAFI、ASDAS—ESR、ASDAS—CRP正相关,与年龄、病程、BASMI及外周关节受累无显著相关。结论SpA患者血清COMP高水平存在提示病情活动,可能预示明显骨质破坏,血清COMP有可能成为判断SpA疾病活动性和疗效的指标。     

高密度蛋白微阵列芯片技术及其在疾病研究中的应用

许多具有高通量特点的蛋白质组学分析技术成为大规模研究蛋白分子间相互作用,快速高效地揭示机体许多生命活动现象的必备手段,并在近几年得到迅猛发展,高密度蛋白微阵列芯片(Protein microarrays chip)技术就是其中之一。大规模同时检测分析一个物种的蛋白,以及对这些蛋白进行亚细胞定位和相关功能的分析,同时提供不同蛋白间的相互作用是高密度蛋白微阵列芯片的用途之一。     

葡萄糖-6-磷酸异构酶mRNA在RA患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的探讨葡萄糖-6-磷酸异构酶（glucose-6-phosphate isomerase，GPI）mRNA在类风湿关节炎（RA）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中的表达及其与RA疾病活动性的关系。方法对30例RA活动期患者、30例RA缓解期患者、30例其他风湿性疾病患者及30名健康体检者，采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）半定量检测PBMCs中GPImRNA的表达水平。结果RA活动期患者GPImRNA的表达水平明显高于RA缓解期患者、其他风湿性疾病患者及正常对照组（P〈0．05），在RA活动组和RA缓解组，差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论GPImRNA在部分RA患者中高表达，其可能在RA发病机制中起作用，并与疾病的活动性相关。     

抗膜突蛋白抗体与系统性硬化病相关肺间质病变的临床相关性研究

目的 分析抗膜突蛋白抗体与系统性硬化病(SSc)相关肺间质病变(ILD)的临床相关性.方法 纳入参加欧洲抗风湿病联盟硬皮病试验研究组(EUSTAR)的SSc患者62例,采用酶联免疫吸附试验检测患者血清中的抗膜突蛋白抗体.分别根据高分辨CT特征、肺功能指标、炎症指标和病程的差异进行分组,比较不同分组之间抗膜突蛋白抗体的阳性率和滴度(吸光度值).计量资料采用独立样本t检验和非参数秩和检验,计数资料采用χ2检验.结果 SSc-ILD组的抗膜突蛋白抗体滴度(0.156±0.062)高于无ILD组(0.107±0.026),差异有统计学意义(P=005).在SSc患者中,检测抗膜突蛋白抗体对于诊断其合并ILD的敏感性为44.0%,特异性为91.7%(Kappa=0.2,P=0.022).肺高分辨CT上具有蜂窝样变、小叶间隔增宽及纵隔淋巴结肿大特征的SSc患者抗膜突蛋白抗体的阳性率显著高于不具上述特征者,差异均具有统计学意义(P<0.05).在肺总量(TLC%)减低组的患者中,该抗体的滴度(0.172±0.067)高于正常组(0.133±0.039).差异有统计学意义(P=0.011),一氧化碳弥散量(DLco%)减低组患者的抗体滴度(0.153±0.580)亦高于对照组(0.120±0.340),但差异无统计学意义(P=0.089).抗膜突蛋白抗体的阳性率在红细胞沉降率、C反应蛋白、免疫球蛋白和补体增高组与正常组间的差异无统计学意义(P>0.05).SSc病程≤5年组与>5年组的抗膜突蛋白抗体滴度差异无统计学意义(P=0.272),但ILD病程≤12个月者的抗体滴度(0.182±0.073)显著高于病程>12个月者(0.138±0.049),差异有统计学意义(P=0.040).结论 抗膜突蛋白抗体在SSc相关的ILD患者有较高的特异性,可能为揭示SSc-ILD的发病机制提供了新的线索.在SSc患者血清中检测该抗体对于早期筛查和评估ILD的价值值得进一步验证.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞FCGR3A和TYROBP mRNA的表达及其临床意义

目的通过研究原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中免疫球蛋白G Fc段受体Ⅲa(Fc fragment of IgG,low affinity Ⅲ a,receptor,FCGR3A)和酪氨酸激酶结合蛋白(tyrosine kinase binding protein,TYROBP)mRNA的表达,探讨FCGR3A和TYROBP在PBC发病机制中的作用及临床意义。方法采用实时荧光定量逆转录(FQ-RT)-PCR检测80例PBC、55例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis type B,CHB)和68名健康对照者(healthy control,HC)PBMC中FCGR3A和TYROBP mRNA基因表达水平,以2-△△Ct法计算基因表达的量,并比较FCGR3A mRNA与TYROBP mRNA表达水平的相关性及FCGR3A和TYROBP mRNA表达水平与肝功能指标的相关性。结果 PBC患者PBMC中FCGR3A mRNA表达水平(1.96±1.87)显著高于疾病对照组CHB患者(1.38±1.19,P=0.044)和HC组(0.75±0.40,P=0.000),CHB患者也明显高于HC组(P=0.000);PBC患者PBMC中TYROBP mRNA表达水平(1.29±0.66)显著高于HC组(0.98±0.36,P=0.009),而与CHB患者无明显差异(1.19±0.76,P=0.233);PBC患者FCGR3A与TYROBP mRNA表达水平有显著相关性(r=0.519,P=0.000);FCGR3A mRNA表达水平与PBC患者肝功能指标r-谷氨酰转肽酶(GGT)的含量呈明显正相关(r=0.427,P=0.000),而与其他指标无相关;PBC患者TYRBOP mRNA表达水平与肝功能指标无相关。结论 PBC患者FCGR3A和TYROBP mRNA表达水平的异常,表明FCGR3A和TYROBP可能参与PBC的发病和疾病的维持。FCGR3A mRNA的表达和肝功能指标GGT相关,可能直接参与PBC肝损伤。     

AtheNA Multi-Lyte自身抗体自动化检测系统检测抗核抗体的性能评价

目的 评价Luminex公司基于多元微珠流式点阵分析(MBA)技术研制的AtheNA Multi-Lyte自身抗体自动化检测系统检测抗核抗体的性能.方法 用AtheNA Multi-Lyte系统检测146例确诊的自身免疫性疾病患者,200例本实验室常规送检的连续标本和90例献血者血清中的抗SSA、抗SSB、抗ds-DNA、抗rRNP、抗Sm、抗Jo-1、抗Scl-70、抗组蛋白抗体和ACA,与传统的ANA Hep-2 IFA和单个可提取核抗原(ENA)标志物的ELISA法比较.结果 AtheNA系统与Hep-2 IFA法和ELISA法在自身免疫疾病、常规送检标本、献血者的符合率为分别为:81.5%、79.5%、96.7%和95.9%、96.5%、98.9%.436份标本分析中AtheNA系统与ELISA单个标志物抗(SSA、SSB、ds-DNA、rRNP、Sm、Jo-1、Scl-70、组蛋白)抗体和ACA的符合率分别为:95.2%、95.0%、96.1%、89.9%、85.1%、93.1%、97.0%、94.3%、97.9%.结论 AtheNA Multi-Lyte检测系统在特异性自身抗体检测上提供了均相、多元而且客观的崭新方法,在单一微孔中实现同时对多种自身抗体的定性、定量分析,与ELISA结果相比,有较高的敏感性、特异性和一致性.使传统的抗核抗体检测实现了自动化.