AtheNA Multi-Lyte自身抗体自动化检测系统检测抗核抗体的性能评价

目的 评价Luminex公司基于多元微珠流式点阵分析(MBA)技术研制的AtheNA Multi-Lyte自身抗体自动化检测系统检测抗核抗体的性能.方法 用AtheNA Multi-Lyte系统检测146例确诊的自身免疫性疾病患者,200例本实验室常规送检的连续标本和90例献血者血清中的抗SSA、抗SSB、抗ds-DNA、抗rRNP、抗Sm、抗Jo-1、抗Scl-70、抗组蛋白抗体和ACA,与传统的ANA Hep-2 IFA和单个可提取核抗原(ENA)标志物的ELISA法比较.结果 AtheNA系统与Hep-2 IFA法和ELISA法在自身免疫疾病、常规送检标本、献血者的符合率为分别为:81.5%、79.5%、96.7%和95.9%、96.5%、98.9%.436份标本分析中AtheNA系统与ELISA单个标志物抗(SSA、SSB、ds-DNA、rRNP、Sm、Jo-1、Scl-70、组蛋白)抗体和ACA的符合率分别为:95.2%、95.0%、96.1%、89.9%、85.1%、93.1%、97.0%、94.3%、97.9%.结论 AtheNA Multi-Lyte检测系统在特异性自身抗体检测上提供了均相、多元而且客观的崭新方法,在单一微孔中实现同时对多种自身抗体的定性、定量分析,与ELISA结果相比,有较高的敏感性、特异性和一致性.使传统的抗核抗体检测实现了自动化.     

AtheNA Multi—Lyre自身抗体自动化检测系统检测抗核抗体的性能评价

目的评价Luminex公司基于多元微珠流式点阵分析（MBA）技术研制的AtheNA Multi—Lyte自身抗体自动化检测系统检测抗核抗体的性能。方法用AtheNA Multi—Lyte系统检测146例确诊的自身免疫性疾病患者,ZOO例本实验室常规送检的连续标本和90例献血者血清中的抗SSA、抗SSB、抗ds-DNA、抗rRNP、抗Sm、抗Jo-1、抗Scl-70、抗组蛋白抗体和ACA,与传统的ANAHep-2IFA和单个可提取核抗原（ENA）标志物的ELISA法比较。结果AtheNA系统与Hep-2IFA法和ELISA法在自身免疫疾病、常规送检标本、献血者的符合率为分别为：81．5％、79．5％、96．7％和95．9％、96．5％、98．9％。436份标本分析中AtheNA系统与ELISA单个标志物抗（SSA、SSB、ds—DNA、rRNP、Sm、Jo-1、Scl-70、组蛋白）抗体和ACA的符合率分别为：95．2％、95．0％、96．1％、89．9％、85．1％、93．1％、97．0％、94．3％、97．9％。结论AtheNAMulti—Lyte检测系统在特异性自身抗体检测上提供了均相、多元而且客观的崭新方法,在单一微孔中实现同时对多种自身抗体的定性、定量分析,与ELISA结果相比,有较高的敏感性、特异性和一致性。使传统的抗核抗体检测实现了自动化。     

去唾液酸糖蛋白受体H1亚单位基因片段的克隆表达及其检测自身免疫性肝炎的价值

Objective To clone and express the human asialoglycoprotein receptor(ASGPR) H1 subunit, purify and identify the immunoreactivity of the recombinant protein, and establish the enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) to detect anti-ASGPR antibodies in diagnosis of autoimmune hepatitis. Methods The CRDHI cDNA (435 bp) was subcloned into eukaryotic vector PEGH, and the recombinant protein expression was induced by D (+)-Galactose. The recombinant CRDH1 was purified with Glutathione Sepharose 4B, and its immunoreactivity was identified by SDS-PAGE and western blot as well as MALDI-TOF. ELISA was established to detect the anti-ASGPR antibodies in serum samples of 45 patients with AIH, 30 patients with SLE, 30 patients with RA, 10 patients with SS and 30 normal controls. Results The sequencing of recombinant plasmid showed the CRDH1 gene was successfully inserted to the eukaryotic expression vector with correct sequence and open reading frame. The fusion protein showed a molecular weight of 42 500 Da on SDS-PAGE gel and confirmed to be the human ASGPR by MALDI-MS through peptide mass fingerprint analysis with Mascot in human protein database. It shared 98. 34% homology with ASGPR H1 subunit. Western blot analysis showed that the fusion protein had the same immunoreactivity as human ASGPR. The results of ELISA indicated that the positive rate of anti-ASGPR was 35.6% ( 16/45 ), but the ELISA was negative in other control. There was significant difference of positivity of the autoantibodies between AIH and non-AIH controls (χ2 = 31.85,P < 0. 01 ). Conclusions The human plasmid containing ASGPR is successfully clone into Saccharomyces cerevisiae Y258. The recombinant autoantigen owns good antigenicity and specificity. ELISA established with the purified protein shows good specificity for diagnosis of AIH.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中趋化因子受体CXCR3 mRNA表达水平变化

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)中CXCR3mRNA表达及其与疾病发病机制、疾病活动性的关系.方法 采用逆转录实时荧光定量(FQ-RT)-PCR的方法,在Light Cycler Real time PCR检测仪上检测59例PBC患者(活动期29例、缓解期30例)、结缔组织病(CTD)患者20例(疾病对照组)、健康体检者29名(健康对照组)外周血PBMC中CXCR3 mRNA的表达水平和含量.以Act=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)比较基因表达水平的变化.结果 活动期PBC患者CXCR3 mRNA表达水平(Act=5.41±2.69)明显高于缓解期PBC患者(Act=7.77±2.74,t=3.39,P＜0.01);活动期PBC患者CXCR3 mRNA表达水平(Act=5.41±2.69)明显高于正常对照组(Act=7.16±2.76,t=2.45,P＜0.01)和疾病对照组(Act:7.24±2.75,t=2.53,P＜0.01);缓解期PBC患者CXCR3 mRNA表达水平与正常人及疾病对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 PBC患者CXCR3 mRNA表达水平显著高于正常人、疾病对照组和疾病缓解期,提示CXCR3的表达与PBC的发生发展存在一定关联性.     

蛋白芯片技术在自身抗体检测中的应用

目的建立应用蛋白芯片技术检测抗核抗体谱中11种自身抗体的方法，并对蛋白芯片技术对自身抗体检测的敏感性和特异性进行评价。方法通过蛋白芯片技术与间接免疫荧光法（IIF）和酶联免疫吸附法（ELISA）自身抗体检测试剂盒进行比对，验证抗核抗体谱检测蛋白芯片（抗SSA-52抗体、抗SSA-60抗体、抗SSB抗体、抗Sm抗体、抗RNP抗体、抗Scl-70抗体、抗Jo-1抗体、抗dsDNA抗体、抗rRNP抗体、抗着丝点抗体和抗核抗体）在临床应用中的敏感性和特异性。除抗Jo-1抗体阳性样品较罕见，仅检测阳性样品32份，其他10种自身抗体，每种选择各阳性样本70份，阴性样本294份；并对检测结果进行统计学分析。结果除抗SSA52抗体和抗SSB抗体的检测敏感度分别为95．7％和98．6％外，其他9种自身抗体的检测敏感度均为100％；除抗SSB抗体、抗RNP-68抗体、抗Scl-70抗体、抗dsDNA抗体、抗CEN-B抗体、抗核抗原提取物抗体（ANA）的检测特异度分别为98．0％、98．0％、99．7％、99．7％、99．7％、98．3％外，其他5种自身抗体的检测特异度均为100％。结论蛋白芯片技术检测11种抗核抗体谱自身抗体的检测敏感度（均〉95．0％）和特异度（均〉98．0％）均较高，且与IIF和EHSA法有较高的符合率，能满足临床检测自身抗体谱的要求。此外，蛋白芯片技术检测自身抗体时具有高通量、简单快速、敏感度好和特异度强等优点，值得临床推广应用。     

类风湿关节炎患者蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22基因多态性的研究

目的 探讨蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22(the protein tyrosine phosphatage nonreceptor 22,PTPN22)基因1123G＞C(rs2488457)单核苷酸多态性(SNP)与类风湿关节炎(RA)的关系.方法 采用实时荧光定量PCR对200例RA患者,100例其他风湿病患者,200名健康体检者PTPN22基因进行分型.用SPSS 11.0软件进行统计学分析和行×列表X2检验.结果 RA组PTPN22 CC基因型频率(0.120)与其他风湿病组(0.020)及健康对照组(0.015)比较差异有统计学意义(X2 值分别为18.708和24.337,P均＜0.01),而其他风湿病组与健康对照组比较,差异无统计学意义(X2值为1.066,P＞0.05);RA组C等位基因频率(0.360)明显高于其他风湿病组(0.190)及健康对照组(0.215),且差异有统计学意义(P＜.005).结论 PTPN22基因可能是RA的易感基因和RA等自身免疫病治疗的靶基因之一.     

抗中性粒细胞胞浆抗体荧光核型与靶抗原不符的特殊情况分析

目的分析血清中胞质型抗中性粒细胞胞浆抗体(cANCA)和核周型抗中性粒细胞胞浆抗体(pANCA)荧光模型与靶抗原不相符的情况,探讨其临床意义。方法用间接免疫荧光法(IIF)检测抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)荧光模型cANCA、pANCA,用ELISA法检测靶抗原髓过氧化物酶(MPO)、蛋白酶3(PR3)。将pANCA合并MPO阳性、cANCA合并PR3阳性以外ANCA荧光模型以及靶抗原同时有阳性的其他特殊情况定义为ANCA荧光模型与靶抗原不相符,分析2017年4月至2019年4月北京协和医院ANCA荧光模型与靶抗原不相符患者的临床资料。结果 pANCA合并PR3阳性的患者组中,年龄(44.20±17.25)岁,诊断为溃疡性结肠炎(UC)的占56.8%,ANCA相关性血管炎占15.2%,其中诊断为UC与非UC的患者的年龄分布差异有统计学意义(χ~2=13.42,P=0.001)。pANCA合并MPO、PR3阳性的患者组中,年龄(58.20±14.05)岁,诊断为ANCA相关性血管炎的最多,占48.3%。cANCA合并MPO阳性患者组中,年龄(56.06±20.39)岁,诊断为ANCA相关性血管炎的占61.8%,间质性肺炎以及甲状腺亢进各占8.8%。结论 pANCA、PR3阳性可作为UC的敏感性指标,pANCA、MPO、PR3阳性及cANCA、MPO阳性也可作为ANCA相关性血管炎的指标。     

系统性红斑狼疮患者转化生长因子β1及其Ⅱ型受体的表达及意义

系统性红斑狼疮（SLE）是一种累及全身的自身免疫性疾病（AID），以B淋巴细胞功能亢进，产生大量自身抗体为特征，目前SLE的启动及疾病维持机制尚不十分清楚。转化生长因子β1（TGF-β1）是人体多种组织细胞的生长调控因子，对细胞外间质基因表达、基质降解、细胞增殖分化和细胞凋亡功能等具有明确作用。转化生长因子BU型受体（TβRⅡ）基因的缺失及变异可使TGF-β1的信号转导通路受阻，使细胞增殖失去控制，导致细胞异常增殖或免疫失调。本研究测定TGF—β1与TpRⅡ在SLE不同疾病组中的变化，以评价其与SLE活动性之间的关系以及在SLE发病中作用，并为SLE诊断提供有价值的指标。     

葡萄糖-6-磷酸异构酶mRNA在RA患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的探讨葡萄糖-6-磷酸异构酶（glucose-6-phosphate isomerase，GPI）mRNA在类风湿关节炎（RA）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中的表达及其与RA疾病活动性的关系。方法对30例RA活动期患者、30例RA缓解期患者、30例其他风湿性疾病患者及30名健康体检者，采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）半定量检测PBMCs中GPImRNA的表达水平。结果RA活动期患者GPImRNA的表达水平明显高于RA缓解期患者、其他风湿性疾病患者及正常对照组（P〈0．05），在RA活动组和RA缓解组，差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论GPImRNA在部分RA患者中高表达，其可能在RA发病机制中起作用，并与疾病的活动性相关。     

2013年全国175家临床实验室检测抗中性粒细胞胞浆抗体的比对分析

目的通过全国多中心实验室自身抗体检测比对活动,了解国内抗中性粒细胞胞浆抗体的检测水平现状,以提高检测质量。方法由卫生公益性行业科研专项“风湿免疫病诊疗关键技术临床推广及转化应用研究”项目组(以下称“项目组”)制备自身抗体比对样品(液体血清),向全国175家自愿报名参加抗中性粒细胞胞浆抗体检测的实验室发放比对品。比对品包含抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)阳性或阴性、抗髓过氧化物酶(MPO)抗体阳性或抗蛋白酶3(PR3)抗体阳性,共计1组5支血清。由项目组统一寄送至各实验室。要求各实验室在规定时间内完成检测,并将结果上传至项目组。采用Excel软件对检测结果进行统计分析。结果参加ANCA,抗MPO抗体及抗PR3抗体检测比对工作的实验室数目分别为134家,148家和148家。ANCA,抗MPO抗体及抗PR3抗体比对品检测结果阳性符合率分别为90.8%,98.0%和98.0%,阴性符合率分别为94.4%,96.1%和98.8%。间接免疫荧光法为国内实验室检测ANCA的主要方法,但回报的结果符合率参差不齐,荧光模型回报率尚不理想,仅为77.9%。结论2013年全国实验室检测ANCA比对品的阳性符合率尚不理想,且应用IIF法检测ANCA时荧光模型回报率不高。抗MPO抗体及抗PR3抗体比对结果较为满意。ANCA检测质量仍有待提高。