| 自身启动子调控miR-7真核表达载体的构建及其意义 |
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| 引用本文： | 郭萌萌,廖珍媛,赵娟娟,陶弋婧,胡燕,陈超,秦娜琳,郑静,徐林.自身启动子调控miR-7真核表达载体的构建及其意义[J].遵义医学院学报,2015,38(3). |
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| 作者姓名： | 郭萌萌 廖珍媛 赵娟娟 陶弋婧 胡燕 陈超 秦娜琳 郑静 徐林 |
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| 作者单位： | 遵义医学院免疫学教研室暨贵州省免疫学研究生教育创新基地,贵州遵义,563099 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，教育部新世纪优秀人才计划资助项目，贵州省国际合作项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建带有miR-7自身启动子的miR-7重组真核表达载体,研究其对人肺癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响.方法 预测miR-7启动子序列,设计含有该序列和miR-7前体序列目的片段的引物,PCR扩增后亚克隆入pGL3.0-Basic载体以构建miR-7自身启动子调控的真核表达载体pGL3.0-Basic-miR-7-promoter(命名为p-miR-7-pro);将所构建载体转染人肺癌95D细胞,Real-time PCR探针法检测95D细胞中miR-7的表达水平;MTT和克隆形成实验分别检测95D细胞的增殖和克隆形成能力;划痕法观察95D细胞体外迁移能力的变化;FACS检测95D细胞的凋亡情况.结果 酶切和测序结果证明成功构建p-miR-7-pro真核表达载体,转染95D细胞后可有效表达miR-7;与对照组相比,p-miR-7-pro转染组95D细胞的体外增殖能力受到明显的抑制(0.60 ±0.03 vs 0.19 ±0.05,P＜0.05);同时其迁移能力也显著降低(473 ±7 vs 99 ±2,P＜0.05);而细胞凋亡则显著增加(9.233 ±0.586％vs 12.967 ±0.643％,P＜0.05).结论 成功构建由自身启动子调控的miR-7真核表达载体,为后续研究miR-7在肺癌基因治疗中的作用提供重要实验基础.
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| 关 键 词： | miR-7 真核表达 肺癌 95D细胞 增殖 迁移 凋亡 |
Construction of an eukaryotic expression vector encoding miRNA-7 with self promoter and its significance |
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