应用PFGE分析广州稻叶型霍乱弧菌的同源性

目的分析广州40株稻叶型霍乱弧菌的毒力基因和PFGE特征,探讨菌株的同源性和广州稻叶型霍乱弧菌流行的特点。方法应用PCR方法检测稻叶型菌株的4种毒力基因,采用限制性内切酶NotI对菌株进行PFGE分型,使用BioNumerics Version4.0软件（复选Dice相关系数和UPGMA方法）对菌株进行聚类和同源分析。结果绝大多数水型稻叶霍乱疫情相关菌株为genotypeA型菌,而绝大多数环境分离稻叶型霍乱弧菌为genotypeB型和C型菌。40株霍乱菌株分布于18种pulsotype,水型霍乱疫情相关菌株的pulsotype极为相近（相似性系数98%以上）,而环境分离的稻叶型霍乱弧菌呈现明显的pulsotype多样性。结论是否携带ctxA基因是稻叶型霍乱弧菌人源分离株与环境分离株的主要区别之一,绝大多数环境分离的稻叶型霍乱弧菌与人源分离株的同源性较低,但仍需加强对不同来源菌株的同源性分析和溯源追踪。     

多位点基因序列分型在沙门菌鉴定中的应用

目的探讨多位点基因序列分型方法在沙门菌分型鉴定研究中的应用,初步掌握广州地区沙门菌多位点基因序列分型数据。方法选取沙门菌7对保守管家基因aroC、dnaN、hemD、hisD、purE、sucA、thrA作为研究靶标,对其进行扩增、测序及序列分析。结果 41株沙门菌分离株有8个血清群和14个ST型,食品来源沙门菌菌株的血清群有7个,ST型为10个,患者来源菌株血清群为5个,ST型为10个,实验中还发现2个新的ST型。结论沙门菌血清学分群结果与MLST分型结果的对应关系密切,很多ST型菌株的血清群固定,相同血清群菌株也有较固定的ST型,因而,可运用多位点基因序列分型方法对沙门菌进行分型鉴定。     

猪链球菌2型多重PCR鉴定方法建立

目的 建立猪链球菌2型多重PCR鉴定方法.方法 根据猪链球菌种特异基因16S rRNA序列和猪链球菌2型特异性荚膜多糖编码基因cps2J基因序列,设计和合成2对特异引物,通过条件和体系优化,建立多重PCR检测方法.结果 猪链球菌2型参考株及18株分离株均扩增到清晰的目的 条带,而6株非猪链球菌2型参考菌株不能扩增出目的 条带.结论 多重PCR可以用于猪链球菌2型检测,特异性和敏感性好,为该病的快速诊断和分子流行病学调查提供了新的技术方法.     

沙门菌invA基因荧光定量PCR检测

沙门菌是引起食源性感染的常见致病菌~([1]),常规检测方法有分离培养、生化鉴定、血清学试验等.由于沙门菌有2 000多种血清型,因而监测工作多繁琐、费时、费力.实时荧光定量PCR检测技术是近年来的新方法,已经愈来愈多地用于病原体诊断~([2]).     

致呼吸机相关性肺炎的鲍曼不动杆菌分子分型

目的了解引起呼吸机相关性肺炎(VAP)的鲍曼不动杆菌(Ab)分子流行病学特征。方法对分离自VAP患者下呼吸道分泌物标本中的7株Ab菌株进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型及耐药性检测。结果7株Ab的PFGE电泳条带相似度为57%～100%, 分为A、B、C、D 4个PFGE型别,其中A、B、D型各2株（28.57%）,C型1株（14.29%）。Ab对头孢他啶、亚胺培南和妥布霉素等13种抗菌药物产生不同程度的耐药性,均为泛耐药菌株,其中C型Ab为全耐药菌株。结论PFGE分型技术可以准确和快速地用于Ab引起的医院感染溯源、分型。     

重症监护病房中呼吸机相关肺炎的病原学和耐药性特征

目的探讨重症监护病房（ICU）中呼吸机相关肺炎（VAP）的流行病学、病原菌分布、耐药性特征。方法对广州市3所三级甲等医院ICU发生VAP的53例患者进行前瞻性研究，对病原菌进行细菌鉴定和耐药性分析。结果VAP平均发病时间为机械通气后7．8d。97株病原菌中革兰阴性细菌58株（59．8％），革兰阳性细菌23株（23．7％），真菌16株（16．5％）。最常见病原菌分别为铜绿假单胞菌16株（16．5％），金黄色葡萄球菌13株（13．4％），嗜麦芽窄食单胞菌8株（8．2％），肺炎克雷伯菌8株（8．2％），白色念珠菌8株（8．2％）。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）检出率为100．0％；未发现耐万古霉素金黄色葡萄球菌；VAP病原菌存在严重的多重耐药性。结论ICU中VAP的病原菌构成以革兰氏阴性杆菌为主且呈现多重耐药现象，适当的经验性抗菌治疗应以病原学和耐药性的监测结果为依据。     

广州市市售食品食源性致病菌污染状况调查

目的了解广州市市售食品中食源性致病菌的污染状况。方法采用随机抽样方法分别对我市10个区以及两个地级市的集贸市场、超市、宾馆饭店及个体熟食销售点的7类食品共363份样品中沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、单增李斯特菌、肠出血性大肠杆菌O157∶H7、空肠弯曲菌等6种致病菌依据国标的方法进行了监测。结果363件样品中检出致病菌72株。其中副溶血性弧菌检出率为33.93%,主要污染水产品;金黄色葡萄球菌为3.00%,主要污染熟食品;沙门氏菌和单增李斯特菌检出率分别为1.93%和0.66%;未检出大肠杆菌O157:H7和空肠弯曲菌。在各类食品中,致病菌带菌数有显著性差异(以!2检验,P<0.005)。水产品致病菌带菌率最高,以副溶血性弧菌为主;其次为生肉类,以检出沙门氏菌为多。结论我市市售食品存在食源性致病菌污染,水产品和生肉类是主要污染食品。应加强市售食品监督管理,以减少可能引起食源性疾病的因素。     

中国脑膜炎奈瑟菌中插入序列1301的分布与分子流行病学研究

目的 研究中国脑膜炎奈瑟菌(Nm)中插入序列IS1301的分布与分子流行病学特征.方法 设计IS1301引物,应用PCR方法检测2007年1月至2008年10月收集全国16个省、市、自治区219株Nm菌株的IS1301,对IS1301扩增产物进行DNA测序和序列比对,PCR扩增IS1301阳性菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析及核酸印迹杂交,研究不同Nm菌株中IS1301的分布特征.结果 219株Nm菌株中,34株携带IS1301(15.53%),A、B、C群和不可分群的Nm菌株IS1301阳性率分别为11.11%、20.75%、6.17%和28.57%;IS1301扩增产物测序结果与GenBank登记编号ZA9092.1的Nm菌株序列相似度为94%～100%,进化树分析可分为两簇;C群Nm菌株与其他血清群菌株IS1301序列存在较大差别;研究的Nm菌株基因组中至少存在6～17个IS1301拷贝,相同PFGE带型Nm菌株所携带的IS1301拷贝数具有多态性特征.结论 IS1301在中国Nm菌株中的分布具有遗传多态性.     

猪链球菌2型gdh基因的克隆与表达

目的 克隆表达猪链球菌2型诊断性抗原谷氨酸脱氢酶GDH. 方法 根据基因库中的gdh基因序列设计PCR引物,自病人分离株2007SF0165基因组扩增GDH的编码基因gdh,克隆至pMD19-T载体后进行测序分析,并且构建重组表达质粒pGEX4T-2-gdh,转化E.coli BL21（DE3）,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测. 结果 PCR法自猪链球菌2型菌株2007SF0165基因组扩增出约1.3kb的目的片段;序列分析显示猪链球菌的GDH具有GDH蛋白家族Ⅰ的典型保守序列;构建筛选的原核重组表达质粒pGEX4T-2-gdh经诱导表达,获得蛋白相对分子质量为45 kDa目的蛋白. 结论 克隆并表达出猪链球菌2型诊断性抗原GDH,可为进一步研究奠定坚实的基础.     

PCR-RFLP与特异引物PCR对副溶血性弧菌进行分型鉴定探讨

目的:探讨在流行病学溯源方面,运用PCR-RFLP与特异引物PCR对副溶血性弧菌进行分型鉴定的可行性.方法:选择副溶血性弧菌核糖体基因16SrRNA序列进行PCR-RFLP分析、保守核糖体基因间隔序列16-23SrRNA(RS)和肠道细菌重复内显子保守序列(ERIC)进行特异引物PCR分析.结果:16SrRNA PCR-RFLP分析有4种模式图,RS-PCR分析有3种模式图,ERIC-PCR分析有10种模式图.结论:PCR-RFLP与特异引物PCR可以对副溶血性弧菌进行快速分子分型鉴定,有利于流行病学溯源.