快速PCR检测猪链球菌2型方法的研究及应用

目的建立可同时检测猪链球菌2型5种特异基因的快速PCR方法。方法根据已有的5对猪链球菌2型特异基因引物,运用高效聚合酶及优化反应程序,建立针对猪链球菌2型的16sRNA基因、荚膜多糖基因(cps-2J)、溶菌酶释放蛋白相关基因(mrp)、细胞外因子基因(ef)和溶血素基因(sly)的快速PCR方法。结果此法可在一台PCR仪上30min同时扩增猪链球菌2型的5种特异基因,敏感性和特异性与普通PCR无差别。对35株猪链球菌2型菌株的检出率为100%。结论所建立的检测方法具有便捷、快速的优点,可应用于人畜间猪链球菌2型突发疫情的实验室快速诊断。     

PCR快速检测猪链球菌2型方法的建立

目的建立一种快速、特异且敏感的猪链球菌菌型的检测方法。方法从疑似猪链球菌感染患者血液（抗凝血）中提取DNA为模板，并合成引物检测猪链球菌特异性16 Sr RNA基因片段、2型猪链球菌特异性荚膜多糖编码基因片段cps2J、溶菌酶释放相关蛋白编码基因片段mrp、细胞外蛋白因子编码基因片段ef。结果PCR扩增结果证实是猪链球菌2型。结论PCR反应体系是一种检测和鉴定猪链球菌2型的快速、特异且敏感的方法。     

聚合酶链式反应诊断2型猪链球菌

目的从分子水平鉴定四川省2005年不明原因疾病病原菌的属、种、型及毒力基因,为诊断和治疗提供科学依据。方法聚合酶链式反应(PCR)检测链球菌属特异性基因(TUF)、猪链球菌种特异性基因(Species)、2型和毒力特异性基因(CPS2J)以及毒力基因溶菌酶释放相关蛋白基因(MRP)和溶血素基因(SLY);同时与VITEK2等全自动生化鉴定仪鉴定结果进行比对。结果所试103份标本中,98份均具有所检测的5个基因,确定为猪链球菌2型;另5份标本排除猪链球菌可能。73株纯培养细菌用VITEK2全自动生化鉴定仪鉴定有68株菌被鉴定为猪链球菌2型,3株菌被鉴定为猪链球菌1型,2株菌不能鉴定。结论2005年四川省不明原因疾病疫情为猪链球菌2型感染人造成。PCR检测5个特异基因鉴定猪链球菌2型,其结果优于VITEK2全自动生化鉴定仪。     

人感染猪链球菌病的病原分离与PCR方法的快速检测

目的研究人感染猪链球菌的生物学特征，并建立一种快速、特异且敏感的检测方法。方法将疑似猪链球菌感染患者的血液进行增菌培养，对所分离的病原菌进行染色形态观察、API 32 Strep生化鉴定；同时从该疑似患者血液（抗凝血）中提取DNA为模板，并合成引物检测猪链球菌特异性16SrRNA基因片段、2型猪链球菌特异性荚膜多糖编码基因片段cps2J、溶菌酶释放相关蛋白编码基因片段mrp、细胞外蛋白因子编码基因片段ef。结果PCR扩增结果证实是猪链球菌2型，而从血液中分离的病原菌，经API 32 Strep生化鉴定，也证实为猪链球菌2型。结论人感染猪链球菌的病原学及PCR检测符合猪链球菌2型，同时该PCR反应体系是一种检测和鉴定猪链球菌2型的快速、特异且敏感的方法。     

PCR方法快速检测猪链球菌2型的研究

目的 利用PCR方法鉴定疑似猪链球菌(S.suis)菌株,对其应用效果进行评价.方法 采用S.suis种特异性基因(16s rRNA)和荚膜多糖S.suis2型特异性基因(cps2J)引物对3株疑似S.suis菌株进行PCR扩增,并和常规培养方法进行比较.结果 PCR方法对3株疑似S.suis菌株扩增出16s rRNA和cps2J基因条带,鉴定结果为S.suis2型,与常规培养方法结果相符.结论 与常规培养方法相比,S.suis2型PCR检测方法准确、快速,适合S.suis疫情的快速检测.     

金黄色葡萄球菌的多重PCR快速鉴定方法

目的 建立多重PCR快速鉴定金黄色葡萄球菌检测方法,并了解nuc和nucA基因在食源性金黄色葡萄球菌中的分布状况.方法 设计nuc、nucA和16S rDNA基因的引物,利用单重PCR方法和测序验证引物的特异性;建立多重PCR快速检测方法,并应用此方法对23株食源性金黄色葡萄球菌、15株其他种属细菌以及一起食物中毒样品的增菌液进行检验,以评价该方法的特异性和灵敏性.结果 利用单对引物对实验室的4个菌株进行盲筛,出现的条带均为单一条带,且与目的片段长度一致,测序结果显示扩增片段为目的基因片段.建立的多重PCR方法对金黄色葡萄球菌有很好的特异性和灵敏性,灵敏度达100 cfu/μl,研究所涉及的23株食源性金黄色葡萄球菌nuc和nucA基因均为阳性.结论 该方法简便、快速、特异性好、灵敏度高,适用于金黄色葡萄球菌的快速鉴定.     

鉴别脑膜炎奈瑟菌A、B、C、Y、W135群的多重聚合酶链反应诊断方法

目的建立一种能鉴别脑膜炎奈瑟菌（Nm）A、B、C、Y、W1355个血清群的多重聚合酶链反应（PCR）方法.方法首先PCR扩增Nm crgA基因,确定Nm感染;再通过多重PCR扩增荚膜表达基因orf-2和siaD基因,根据特异条带区分不同群Nm.结果多重PCR检测61株Nm与4株非Nm,能准确地鉴定并可将Nm分成5个血清群;检测4例流行性脑脊髓膜炎患者的脑脊液,2例出现A群400 bp的特异条带,而细菌培养和胶乳凝集方法检测均为阴性;检测18份流行性乙型脑炎患者标本,与胶乳凝集试验结果一致.结论多重PCR诊断方法能正确鉴别不同群Nm,对流行性脑脊髓膜炎的临床诊断与流行病学调查有重要意义.     

多重PCR检测毒力型艰难梭菌的方法学研究及应用

目的建立多重PCR方法检测毒力型艰难梭菌。方法设计艰难梭菌种特异tpi引物和毒力基因tcdA、tcdB特异性引物,建立多重PCR方法。利用已知菌株,验证方法的特异性和最低检出限。与厌氧培养法、ELISA法比较其检测临床菌株和其毒素分泌的准确性。结果多重PCR方法检测艰难梭菌的最低检出浓度为0.7 pg/μ1,特异性为100%。53株厌氧培养法鉴定的艰难梭菌临床分离株,多重PCR方法检测tpi基因均为阳性,其中tcdA+/tcdB+为39株,tcdA-/tcdB-为14株。ELISA法检测毒素A/B显示23株为阳性、30株为阴性。23株ELISA法毒素A/B阳性的艰难梭菌多重PCR方法检测结果均为tcdA+/tcdB+。结论多重PCR方法可用于检测毒力型艰难梭菌具有较高的临床应用价值。     

应用多重PCR法快速检测伤寒沙门菌的研究

目的:建立快速、特异检测伤寒沙门菌的多重PCR法,应用于临床肠热症的快速诊断。方法:根据GenBank,EMBL及DDBL公布的伤寒沙门菌鞭毛蛋白抗原基因、菌体抗原基因及表面抗原基因的核酸序列,设计出针对fliC-d,rfbE,rfbS及viaB基因的4对特异性引物,采用多重PCR法检测伤寒沙门菌标准株、非伤寒沙门菌标准株及伤寒沙门菌临床菌株。结果:实验结果证实,所有伤寒沙门菌株应用多重PCR法均成功扩增出预先设计的4条特异性目的条带。结论:所建立的多重PCR法可用于快速检测和鉴定伤寒沙门菌,为肠热症的临床诊断及流行病学溯源提供了一种更简便易行的检测技术。     

致病性猪链球菌主要毒力因子基因多重PCR检测

目的建立多重PCR体系．实现猪链球菌毒力相关因子基因cps、mrp、epf，（epf^＊）和sly的同步检测。方法根据上述毒力因子基因核苷酸序列，设计和合成4对特异性引物，通过体系和条件优化，建立多重PCR检测方法，并对72株种属背景明确的实验菌株（其中猪链球菌48株、阴性对照株24株）及49株猪临床分离的链球菌样本进行检测分析。结果48株猪链球菌中，cps2检出率为33．3％（16／48）、mrp检出率为29．2％（14／48）、epf检出率为25％（12／48）、epf^＊检出率为6．3％（3／48）、sly检出率为54．2％（26／48），上述检测结果与菌株的毒力因子背景情况完全相符；24株阴性对照和49株猪临床分离样本毒力因子检测结果均为阴性。结论多重PCR可用于猪链球菌毒力相关因子CPS2、MRP、EF、Sly的基因检测，特异性和敏感性好，为该病快速诊断和分子流行病学调查提供了新的技术手段。