荧光分子扩散动态测量在肥大细胞脱颗粒体外检测中的应用

 目的：建立基于荧光分子扩散动态测量的肥大细胞脱颗粒的体外快速评估方法。方法：分别采用β-己糖苷酶法、扫描电镜法及光栅图像关联光谱法（raster image correlation spectroscopy, RICS）对稳定表达CD63-绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）的大鼠肥大细胞株RBL-2H3的脱颗粒过程进行评价,比较不同检测方法的灵敏度。结果：β-己糖苷酶法的检测灵敏度为5 mg/L,扫描电镜法的检测灵敏度均为3.9×10-2 mg/L,RICS方法也在3.9×10-2 mg/L即可检测到扩散系数的降低,并与未给药组有显著差异。结论：RICS方法比传统β-己糖苷酶法更灵敏,虽然与电镜方法灵敏度相当,但该方法较扫描电镜法简便易行成本低,易操作,且所观察的指标为扫描电镜所不能做到的活体动态观测,能在细胞脱颗粒早期即可判定过敏反应的发生,具有传统方法不具备的优势,有潜力成为制药企业质量控制的标准方法,或临床过敏性物质筛查的有利工具。     

动物类中药中蛋白多肽成分的口服吸收机制及其研究进展

综述动物类中药中蛋白多肽成分的口服吸收机制及其研究进展。通过查阅国内外文献总结蛋白多肽类物质主要是通过载体转运、胞饮作用和M细胞途径、细胞旁路、谷胱甘肽(GSH)转运系统这4种方式进行吸收转运,并分析了临床疗效显著的蛇毒、水蛭素、蚓激酶、鹿茸这4种动物类来源蛋白口服吸收入血途经及部分相关机制,对开发口服动物来源蛋白多肽类药物具有极大的应用价值和推广意义。     

黄芪对乳鼠肥大心肌细胞钙瞬变及钙调蛋白激酶Ⅱ的影响

目的:研究黄芪注射液对体外培养乳鼠肥大心肌细胞内钙瞬变及钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的影响。方法:原代培养乳鼠心肌细胞,分为对照组(不加任何干预因素)、模型组(AngⅡ刺激心肌细胞肥大)、黄芪组(AngⅡ+黄芪注射液)。MTT法确定最佳检测时间,激光共聚焦显微镜检测单个心肌细胞(给予KN-93前后)钙瞬变。Western blot法检测CaMKⅡδ蛋白含量。结果:①AngⅡ作用48h后乳鼠心肌细胞存活率下降(P<0.05);②与对照组相比,模型组总蛋白含量显著增加,黄芪组较模型组显著下降;③与对照组相比,模型组钙瞬变荧光强度变化率降低,达峰时间、峰回落时间显著增高,黄芪治疗后钙瞬变荧光强度变化率回升,并降低峰回落时间与达峰时间;④与对照组相比,模型组CaMKⅡδ的蛋白含量显著增加,黄芪组较之模型组则显著下降。⑤与对照组相比,给予KN-93后模型组仅使峰回落时间显著增加,黄芪组较模型组可显著降低峰回落时间。结论:黄芪注射液可抑制心肌细胞肥大,其机制可能与抑制钙调蛋白激酶途径中CaMKⅡδ的表达改善收缩功能有关,并可能通过其他机制而改善舒张功能。     

复方黄柏液涂剂对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌毒力和生物膜的影响

目的 研究复方黄柏液涂剂（FFHBFP）对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）毒力和生物膜的抑制作用，发现FFHBFP对MRSA的抗菌作用，为临床指导用药提供理论依据与参考。方法 首先采用微量稀释法和时间-生长曲线测定FFHBFP和万古霉素（VAN）对MRSA的最低抑菌浓度（MIC）和对细菌生长的影响；而后选择亚抑菌浓度（sub-MIC）分别观察FFHBFP和VAN对MRSA毒力因子脂肪酶的抑制能力和恢复过氧化氢（H₂O₂）敏感性能力；采用微孔板法检测FFHBFP和VAN对MRSA生物膜形成期和成熟期的抑制能力；应用扫描电子显微镜（SEM）观察给药前后成熟生物膜在细菌形态方面的变化；结合实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测生药质量浓度50.600 g·L^-1 FFHBFP对MRSA毒力基因crtM和生物膜形成基因fnbA、icaA表达的影响，最后运用分子对接技术预测FFHBFP中潜在抗菌有效成分与MRSA毒力和生物膜的作用靶点机制。结果 VAN的MIC为2 mg·L^-1，在1 mg·L^-1以下时不影响MRSA生长，而FFHBFP无法测定出MIC，在生药质量浓度101.200~202.400 g·L^-1时对生长有抑制作用；相比于空白组和VAN组，sub-MIC（生药质量浓度25.300~50.600 g·L^-1）具有显著抑制脂肪酶和恢复MRSA对H₂O₂敏感（P<0.01）；微孔板法结果显示FFHBFP（生药质量浓度25.300~202.400 g·L^-1）对生物膜形成期和成熟期均有明显抑制作用（P<0.05，P<0.01）；SEM显示FFHBFP使生物膜结构疏松，菌体大小不一；生药质量浓度50.600 g·L^-1质量浓度FFHBFP能显著抑制相关的毒力基因和生物膜形成基因的表达（P<0.05，P<0.01），同时分子对接结果也显示FFHBFP主要抗菌活性成分对作用靶点有较好的结合能力。结论 FFHBFP对MRSA没有直接杀灭的能力，而是通过削弱毒力表达和生物膜形成等致病能力来发挥临床疗效。     

光学相干断层扫描技术在皮肤医学领域的应用进展

近年来,光学相干断层扫描(OCT)已被广泛应用于各种皮肤病研究,用于早期发现疾病及评估治疗效果。相较于传统病理诊断方法,OCT在检测速度、无创等方面具有极大优势,因此被越来越多的皮肤病学者重视,以挖掘其更大的应用价值。本文比较了OCT与皮肤病学中其他非侵入性成像技术的差异,并回顾了OCT系统的基本原理、分类及其在皮肤病学领域最新的应用进展。     

双光子成像技术在大鼠放射性皮肤损伤修复评估中的应用

目的 采用双光子激发荧光（TPEF）成像技术,无创、活体评估X射线引起大鼠皮肤放射性损伤发展和修复过程。方法 24只SD大鼠采用随机数表法分为4组,健康对照组、25 Gy组、35 Gy组和45 Gy组,每组6只。照射后不同时间评估皮肤损伤程度,通过TPEF成像技术在体检测表皮细胞尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸（磷酸）[NAD（P）H]和真皮胶原纤维荧光信号的病理改变。结果 第10天,各辐射组大鼠出现红斑和脱皮;第15~20天,随着辐射剂量地增加,辐射组出现递进性的渗出、水肿和溃疡;第25天,25 Gy组开始修复,其他组仍有渗出和溃疡。第10天,25、35和45 Gy组表皮细胞NAD（P）H荧光信号减少,乳头层和网状层荧光信号值减少,与健康对照组比较,差异有统计学意义（t=24.145、28.303、26.989、6.654、7.510、7.997,P<0.05）;第30天,25 Gy组表皮细胞NAD（P）H和真皮胶原纤维开始修复,颗粒层、棘层和基底层细胞出现荧光信号,35、45 Gy组未出现NAD（P）H荧光信号;25 Gy组乳头层和网状层荧光信号均逐渐增高,但仍低于健康对照组（t=115.133、17.431,P<0.05）,而45 Gy组未出现荧光信号。结论 TPEF技术可以无创、活体检测X射线照射后表皮细胞和真皮胶原纤维信号损伤和修复的病理变化。     

钠曲线与超滤曲线联合应用于血液透析的护理研究

目的 研完可调钠结合超滤曲线对血液透析患者血压的影响.方法 将尿毒症终末期维持性血液透析患者20例,采用钠曲线结合超滤曲线血液透析为治疗组,常规透析为对照组,每组各10例,观察2种透析模式透析前后血压、超滤量和低血压、失衡综合症的发生率.结果 可调钠结合超滤曲线透析模式时低血压及失衡综合征的发生率.给予的护理干预等都低于常规血液透析模式.结论 对血液透析过程中有低血压、失衡综合征倾向的患者,可选用钠曲线结合超滤曲线的血液透析模式.     

基于微生物快速鉴定系统对金黄色葡萄球菌耐药性鉴定新评估方法的建立

目的:探讨微生物快速鉴定系统(MALDI-Biotyper System)用于快速鉴定铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.a),临床分离金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.a)耐药性情况的可行性。方法:通过采用微生物快速鉴定系统及肉汤稀释法进行鉴定质控、临床分离金黄色葡萄球菌的耐药性情况,并将微生物快速鉴定系统检测结果与肉汤稀释法最低抑菌浓度(MIC)值进行比较分析,最后通过同步鉴定铜绿假单胞菌耐药性情况确定微生物快速鉴定系统的准确性及适用性。结果:微生物快速鉴定系统评分鉴定结果显示敏感质控菌株金黄色葡萄球菌评分值大于2.000,耐药质控菌株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant S.a,MRSA)评分值在1.700~2.000。临床分离金葡菌评分鉴定结果均在1.700~2.000,显示耐药,与肉汤稀释法MIC值结果一致。同时,无关质控敏感菌株铜绿假单胞菌的系统评分鉴定值大于2.000,显示敏感,其本身为敏感菌株,结果一致。结论:微生物快速鉴定系统评分方法可以用于金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞菌耐药性情况的快速鉴定。     

彩色多普勒超声诊断单脐动脉与胎儿畸形相关性的研究

目的:通过单脐动脉胎儿的产前发育情况及产后半年内的随访,了解单脐动脉对胎儿及新生儿的影响。方法:选取2009年3月～2011年3月天津市中心妇产科医院57例单脐动脉胎儿,综合分析产前超声、胎儿或新生儿的染色体检查、临床常规产检、产后脐带病理回报结果及对新生儿产后半年内的追访的结果。结果:在57例单脐动脉的病例中,合并其他系统胎儿发育异常者26例,取脐血行染色体检查异常的5例,产后追访发现3例单纯性单脐动脉胎儿合并微小畸形。结论:当产前超声检查中发现有单脐动脉时,应多方位、多角度观察胎儿及妊娠附属物,结合染色体检查早期发现胎儿异常,降低人口出生缺陷率,同时为临床监测孕产妇各项指标提供依据。     

痰热清注射液与亚胺培南西司他丁联合对广泛耐药铜绿假单胞菌的抑菌作用

目的:观察痰热清注射液(痰热清)与亚胺培南西司他丁联合对广泛耐药铜绿假单胞菌的抑菌作用,并研究其作用机制,为临床治疗耐药菌提供参考。方法:将医院临床分离到广泛耐药铜绿假单胞菌采用微量稀释法检测痰热清与亚胺培南西司他丁最小抑菌浓度(MIC);棋盘法检测联合用药抑菌效果;微孔板法检测对成熟生物膜内细菌代谢活性的影响;Bio Flux动态观察药物对生物膜的影响并用激光共聚焦扫描显微镜观察活死细菌的分布;扫描电子显微镜(SEM)观察药物作用后细菌的形态变化。结果:亚胺培南西司他丁和痰热清的MIC分别为512 mg·L~(-1)和16 500 mg·L~(-1)。棋盘法结果显示痰热清可增强亚胺培南西司他丁的敏感性,二者协同抑菌,并确定联合用药浓度。与空白组或单用亚胺培南西司他丁组比较,联合用药各组显著减少生物膜内活菌量(P0.05,P0.01)。Bio Flux结果表明与空白组或单用药物组比较,联合用药各组可破坏生物膜结构,减小生物膜面积(P0.05);荧光染色结果显示联合用药对动态生物膜内细菌的代谢活性有明显抑制。SEM显示痰热清可抑制细菌分裂。结论:痰热清与亚胺培南西司他丁联合对浮游和生物膜状态的细菌生长有抑制作用,还可对生物膜产生破坏作用。