2007—2009年深圳市外来劳务工乙肝病毒感染情况分析

目的分析2007—2009年深圳市乙肝五项异常的外来劳务工的乙肝DNA感染情况,为深圳市劳务工群体乙型肝炎的预防和控制提供科学依据。方法利用实时荧光定量PCR法对2007—2009年深圳市1226名乙肝五项异常的外来劳务工进行乙肝DNA检测分析。结果深圳市乙肝五项异常的外来劳务工的乙肝DNA总阳性率为48.94%。30岁以下乙肝五项异常的外来劳务工乙肝DNA阳性人数占乙肝DNA阳性总数的85.5%。64.73%的20岁以下乙肝五项异常的劳务工为乙肝DNA阳性。不同年龄组劳务工乙肝DNA阳性率差异具有统计学意义（P〈0.001）,而不同年份、不同性别以及不同省份的劳务工的乙肝DNA阳性率差异无统计学意义（P〉0.05）。结论深圳市乙肝五项异常的劳务工乙肝DNA的阳性率较高,应加强对30岁以下（特别是20岁以下）乙肝五项异常的外来劳务工的乙肝DNA监测,以便对外来劳务工乙肝病毒感染者的传染性进行正确的评估,为防治方案提供依据。     

诺如病毒深圳株SZ2010422全基因组序列测定及分析

目的 分析GⅡ-4型诺如病毒深圳分离株SZ2010422全基因组序列,了解其分子结构特点及进化特性.方法 根据New Orleans参考株全序列设计引物,用RT-PCR分段扩增诺如病毒全基因组,经分子克隆、测序后进行系统进化分析及衣壳区氨基酸位点分析.结果 GⅡ-4型诺如病毒深圳SZ2010422株病毒基因组全长7559 bp,病毒基因组分三个开放阅读框(ORFs),ORF1、ORF2及ORF3长度分别为5100 bp、1623 bp和807 bp,ORF1与ORF2之间有19个核苷酸重叠.深圳株SZ2010422基因组核苷酸序列与参考株GⅡ-4型New Orleans变异株同源性最高,全长同源性为99.3％,ORFI、ORF2、ORF3同源性分别为99.5％、99.2％和98.6％.根据系统进化分析,深圳SZ2010422株属于GⅡ-4 New Orleans变异株.通过对衣壳区氨基酸比对,New Orleans变异株位点变化情况为:aa310N或K→S,aa341D→N,aa359T→S,aa396H→P,aa460H→Y.结论 诺如病毒深圳株SZ2010422属于GⅡ-4型New Orleans变异株.     

2009年深圳地区肠道病毒71型毒株VP4基因进化分析

目的 对深圳地区手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)肠道病毒71型分离株(enterovirus 71,EV71)的VP4基因遗传进化进行分析.方法 2009年采集深圳市儿童医院就诊的HFMD患者的粪便标本491份,选取其中8份经细胞培养鉴定为阳性的EV71毒株用RT-PCR扩增VP4基因,利用MEGA4.0软件进行遗传进化分析.结果 2009年深圳地区8株EV71 VP4基因全长207 bp,编码69个氨基酸;8株EV71 VP4基因核苷酸同源性为94.2％ ～98.1％,与深圳2001至2004年分离的17株EV71毒株核苷酸同源性在89.9％ ～98.1％,与GenBank中其他EV71病毒株VP4的核苷酸同源性为79.2％～100％;其中与亚洲流行株阜阳株(EU703812)核苷酸的同源性最高(100％),其次是C4代表株及2004年深圳株(AY895144)为94.2％ ～97.1％.除了印度株和其中1株EV71的VP4编码的氨基酸在第54位(ACA)不同之外,其余7株EV71 VP4编码的氨基酸序列之间以及与GenBank报道的其他序列同源性达100％.8株EV71 VP4基因核苷酸与C4代表株相比有17处不同,除1处以外其余全在简并密码位点上;轻重症病例毒株之间VP4基因序列未见明显改变.进化树显示8株EV71均属于C4基因亚型.结论 2009年深圳市流行的EV71属于C4基因亚型,流行的EV71 VP4基因非常保守,不属于变异区段,绝大部分核苷酸的变异属无义突变,VP4基因编码的氨基酸变异几乎为0.     

肠道病毒71型真核双基因表达载体的构建

目的通过克隆肠道病毒71型结构前体蛋白P1和非结构蛋白3CD,构建共表达P1前体蛋白和非结构蛋白3CD的真核双基因表达载体。方法设计合成脑心肌炎病毒(EMCV)IRES序列的特异性引物,克隆至真核表达载体pcDNA3.0上,命名为pc-IRES。从手足口病重症患者分离EV71病毒株,经逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术分别扩增出EV71病毒的P1前体蛋白区与3CD区的片段,并将其定向克隆至真核表达载体pc-IRES载体中IRES序列的上游和下游,随后转化到大肠埃希菌DH5α中,最后经PCR和双酶切鉴定转化菌落。结果通过重组质粒p-IRES-P1-3CD进行酶切和DNA序列分析,重组真核双基因表达载体p-IRES-P1-3CD构建成功。结论成功构建共表达EV71病毒P1前体蛋白和非结构蛋白3CD真核双基因表达载体,这将为下一步制备基于DNA载体的EV71病毒的类病毒颗粒疫苗打下基础。     

2010年广东省深圳市病毒性腹泻监测结果分析

目的 了解广东省深圳市病毒性腹泻的感染情况。 方法 采用实时荧光定量-聚合酶链反应对2010年1-12月深圳市925例疑似腹泻患者粪便标本同时进行轮状病毒、诺如病毒、星状病毒和肠道腺病毒核酸检测。 结果 4种常见腹泻病毒的检出率分别为25.30%、20.11%、1.51%和2.27%。轮状病毒和诺如病毒全年各月均维持较高的检出率;轮状病毒感染有明显的季节特征,秋冬季为发病高峰;诺如病毒感染则无特殊的季节特征。0~2岁年龄组患者的感染率显著高于3岁以上年龄组患者。 结论 2010年深圳市病毒性腹泻呈高发状态,其中轮状病毒和诺如病毒是主要的病原之一,星状病毒与肠道腺病毒的检出率较低。应加强对病毒性腹泻,尤其是婴幼儿病毒性腹泻的监测。     

一起札如病毒所致成年人急性胃肠炎暴发的分子流行病学研究

目的 了解一起成年人急性胃肠炎暴发流行的病原学。 方法 采用国家标准方法对样本进行沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、副溶血弧菌、变形杆菌、致泻性大肠埃希菌、蜡样芽孢杆菌、空肠弯曲菌及单核细胞增生李斯特菌10种致病菌进行检测。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测诺如病毒和札如病毒核酸,对阳性PCR产物进行核苷酸序列测定,并进行基因系统进化分析。 结果 7份粪便样本中4份为札如病毒核酸阳性。4株札如病毒与GⅠ. 2型参考株核苷酸序列同源性在94.7%~98.4%之间。基因进化分析显示,札如病毒深圳株与Sapovirus Hu/Oshima1/2009/JP、Houston/90(U95644)、Parkville/94/U73124 在同一进化树遗传分支,属于GⅠ. 2型。 结论 此起成年人急性胃肠炎暴发是由札如病毒GⅠ. 2型感染所致。     

转基因食品安全性检验的核酸检测技术研究

以国际市场上转基因食品的主流产品转基因大豆及玉米和我国生产的转基因辣椒为材料 ,以PCR方法为基础 ,研究适用于转基因食品安全性检验的核酸检测技术。针对抗除草剂 (孟山都公司 )GM 大豆 ,转Bt 176玉米 (Novartis Ciba Geigy公司 )及转抗菌肽辣椒 (华农 )产品的插入基因及调控序列设计不同引物进行PCR检测。建立了转基因大豆、玉米、辣椒的鉴别和相关标记基因、目的基因检测的技术 ,该方法简便快速 ,检测结果与标准及申报材料相符。     

中国部分城市A组轮状病毒感染状况调查及VP7血清型分析

目的 研究我国A组轮状病毒感染状况及VP7血清型分布。方法 利用PAGE电泳检测北京、沈阳、新乡、上海、深圳、广州六个城市1997和（或）1998年秋冬季婴幼儿腹泻A组轮状病毒的感染状况,并采用RT－PCR方法对4种主要的VP7血清型（G1、G2、G3和G4型）进行分型。结果 374份标本中有181份为轮状病毒阳性,检出率48．4％。各地标本的检出率为32％－63％之间,北京、上海地区两年的检出率基本近似。阳性标本经PCR分型方法鉴定G1、G2、G3和G4型的感染率分别为89．5％、6．1％、2．8％和0。有两例为G1和G2型混合感染,另有1例经测序证实为G9型。各地之间、每年之间RV的流行状况略有差异。结论 G1、G2、和G3型是我国A组轮状病毒感染的主要血清型。     

大蒜素体外抗肠道病毒EV71的研究

目的:探究肠道病毒EV71对VERO细胞的损害作用和大蒜素对肠道病毒EV71的治疗性和预防性干预作用。方法:分别观察大蒜素对VERO细胞的毒性,肠道病毒对VERO细胞的毒性,大蒜素对肠道病毒EV71的治疗性和预防性干预作用。结果:大蒜素对VERO细胞的半数中毒浓度(TC50)为724.44μg/ml,最大无毒浓度(TC0)为150μg/ml;大蒜素对肠道病毒EV71的治疗性干预试验的半数有效浓度(EC50)为16.22μg/ml,治疗指数(TI)为44.66;大蒜素对肠道病毒EV71的预防性干预试验的最佳作用时间为6h,此时大蒜素的半数有效浓度(EC50)为39.64μg/ml,治疗指数(TI)为18.28。结论:大蒜素体外对肠道病毒EV71有治疗性和预防性干预作用。     

保龄球馆公共物品的微生物污染及其预防措施的研究

近年来．保龄球运动在我国迅速发展起来，加入保龄球运动的人数不断增加。目前．我国《公共场所卫生管理条例)未将保龄球馆纳入公共场所的管理，对该类场所亦未有相应的卫生标准和卫生要求。为了解保龄球馆的公共物品的卫生状况．并针对该行业的特点，提出可行的消毒措施和卫生管理要求，以防止疾病传染，