人卵丘颗粒细胞凋亡与卵子发育潜能的关系

目的:探讨人卵子周围卵丘颗粒细胞的凋亡状态与相应卵子发育潜能的关系。方法:收集卵泡浆内单精子注射(ICSI)患者每个卵子周围的卵丘颗粒细胞,流式细胞仪检测卵丘颗粒细胞的凋亡率,研究其凋亡率与卵子的成熟度、受精率及相应胚胎质量的关系。结果:MⅡ期卵子周围卵丘颗粒细胞的凋亡率明显低于GV期、MⅠ期及退变死亡的卵子周围卵丘颗粒细胞的凋亡率(P<0.05);MⅡ期受精卵子的卵丘颗粒细胞凋亡率显著低于未受精的卵子(P<0.01);发育成优质胚胎的MⅡ期卵子周围卵丘颗粒细胞的凋亡率低于发育成评分较低胚胎的卵子的卵丘颗粒细胞(P<0.05)。结论:卵巢刺激周期获取的卵子的成熟状态和发育潜能与相应卵丘颗粒细胞的凋亡程度相关。     

控制性超排卵长、短方案在IVF-ET中的疗效比较

目的:比较促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)长、短方案控制性超排卵在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中的疗效。方法:将2001年7月-2002年4月因双侧输卵管梗阻IVF-ET的患者100人随机分为长方案组(50人)和短方案组(50人)进行超排卵。长方案组从使用促性腺激素(Gn)治疗前1月经周期黄体期(月经21天)使用GnRHa 0.3mg/d,至垂体完全降调节后加用Gn;短方案组从月经周期第2天开始用GnRHa0.1mg/d,同时加用Gn。当患者有3个以上卵泡直径>18mm时肌肉注射人绒毛膜促性腺激素(HCG),36小时后取卵行IVF,取卵48小时后行ET。结果:两组患者平均获卵数、受精率、卵裂率、优质胚胎率、移植胚胎数、临床妊娠率、胚胎种植率及流产率差异无显著性。而两者的Gn使用量有差别,短方案组少于长方案组,两组差异有显著性。两组用Gn第7天雌激素水平不同,短方案组明显高于长方案组,两者差异有显著性。结论:GnRHa长、短方案在IVF-ET中控制性超排卵效果相同,但所需Gn数量不同。     

早期有丝分裂抑制因子1对DNA损伤后人乳头瘤病毒16亚型E7基因介导的DNA重复复制的调控作用

目的 探索DNA损伤后人乳头瘤病毒16亚型E7致癌基因(HPV-16 E7)引起的DNA重复复制的分子机制。方法 首先在稳定表达HPV-16 E7的RPE1 E7细胞及对照空载细胞RPE1 Vector中利用流式细胞术检测DNA损伤前后细胞周期改变情况;然后利用免疫印迹检测DNA损伤前后早期有丝分裂抑制物1(Emi1)在RPE1 E7及RPE1 Vector细胞中的蛋白表达水平;最后在DNA损伤后的RPE1 E7细胞中利用小干扰RNA干扰Emi1的表达后,通过流式细胞术检测细胞多倍体的比例变化。结果 与对照细胞相比,DNA损伤后的RPE1 E7细胞中多倍体比例显著增高(t=6.397,P=0.0031);在DNA损伤后的RPE1 E7细胞中Emi1的蛋白表达水平显著增高(t=8.241,P=0.0012);在DNA损伤后的RPE1 E7细胞中应用2条独立的小干扰RNA干扰Emi1的表达后,多倍体细胞比例均显著降低(t=2.916,P=0.0434;t=3.452,P=0.0260)。结论 DNA损伤后HPV-16 E7可通过 Emi1介导DNA重复复制。     

两种冷冻方法对人大块卵巢组织卵泡活性的影响

目的 探讨两种冷冻方法冻融人类大块卵巢组织的冷冻效果及对卵泡活性的影响。方法 收集15例人卵巢组织,每例修剪成3块卵巢组织
（约15 mm×15 mm×2mm）,分别随机分配到新鲜对照组（A组）、玻璃化冷冻组（B组）、两步法冷冻组（C组）,组织学分析3组卵泡形态学变
化,并进行卵巢组织体外培养后测定培养液上清中雌激素、孕激素浓度,免疫组织化学染色测定培养后的卵巢组织细胞核增殖相关抗原Ki67 及
B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl-2）表达水平,评估卵泡增殖及凋亡活性。结果 A组正常形态卵泡比率（91.9%）显著高于B组（71.3%）和C组
（82.9%）,差异有统计学意义(P<0.05),C组高于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。C组的始基卵泡和初级卵泡的正常形态率分别为86.8%、
54.4%,均分别高于B组73.8%、44.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。同一时期3组激素测定结果差异不显著(P>0.05)。C组Ki67的阳性率为73%,
分别显著高于A组50%和B组55%(P<0.05),A组低于B组(P<0.05)。Bcl-2阳性率,A组为57%和C组61%相比无差异(P>0.05),但B组42%阳性率分别低
于A组和C组(P<0.05)。结论 人体大块卵巢组织冻融后仍具有活性,并且两步法冻存效果优于玻璃化冷冻法。     

玻璃化冷冻兔卵巢组织自体移植后卵巢功能观察

目的 观察玻璃化冷冻兔卵巢组织经子宫系膜内种植后卵泡的发育情况。方法 15只新西兰白兔随机分为两组：1组（10只）,玻璃化冷冻兔卵巢组织子宫系膜内种植;2组（5只）,对照组。通过卵巢组织光镜、阴道脱落细胞学检查,观察种植后卵巢组织长期存活、卵泡生长发育及内分泌功能恢复及维持情况,观察存活的卵巢组织对促性腺激素的反应性,采集MⅡ期成熟卵进行卵泡浆内单精子注射（intracytoplasmic sperm injection, ICSI）,进一步观察移植后发育成熟的卵母细胞的受精情况。结果 移植2个月和6个月后卵巢组织中各级卵泡所占的比例与正常卵巢组织相比差异无统计学意义﹙P＞0.05）;移植半年后对卵巢组织应用卵泡刺激素,与未用卵泡刺激素的卵巢组织相比,近成熟卵泡所占的比例明显增多﹙P＜0.05）;成熟卵母细胞ICSI受精后,能够得到正常的胚胎。结论 玻璃化冷冻兔卵巢组织自体子宫系膜内种植能够很好地恢复卵巢功能,其功能可维持较长时间,结合体外受精技术可以产生正常的胚胎。     

重组人促性腺激素对早期鼠胚发育的影响

目的:探讨重组人促性腺激素对小鼠早期胚胎发育的影响。方法:将35只昆明种小鼠随机分为7组,实验组注射一定剂量的重组人促卵泡激素(rhFSH 20 IU)结合不同剂量的重组人促黄体激素(rhLH)对小鼠进行超促排卵,对照组注射孕马血清(PMSG10 IU)和hCG(10 IU),受精0.5 d处死各组雌鼠,收集2-细胞期的鼠胚进行体外培养,观察并记录鼠胚发育至各细胞期的数目。结果:10 IU和15 IU rhLH 组收集的胚胎数与对照组无差异,20 IU rhLH组则高于对照组,但20 IU rhLH组鼠胚发育至4-细胞、8-细胞、桑椹胚、囊胚、扩张期囊胚和孵出期的比率却较低,与对照组比有统计学差异,其余各组收集的胚胎数和胚胎发育至各细胞期数均低于对照组。结论:合适剂量的rhLH对小鼠早期胚胎的发育有明显的促进作用,但剂量过高则对胚胎发育有抑制作用。     

Ⅱ、Ⅲ级胚胎活检后体外发育能力的研究

目的:探讨形态学评价质量较差的胚胎有无活检价值,活检后能否正常发育。方法: 160个IVF和ICSI周期剩余的Ⅱ级、Ⅲ级胚胎,来自同一例患者分级相同的胚胎配对,随机分为实验组和对照组。实验组采用喷酸透明带打孔法取出1个卵裂球,对照组继续培养,对比两组囊胚的形成率、孵化率、囊胚细胞总数,并观察不同形态学特征的胚胎活检后的发育情况。结果:活检组胚胎囊胚形成率,囊胚总细胞数与对照组相比没有差别,但囊胚第6天孵出率活检组明显高于对照组;Ⅲ级胚胎活检后囊胚形成率、第6天孵化率、囊胚总细胞数均明显低于Ⅱ级胚胎;活检前细胞数少于7个的胚胎,活检后发育能力显著降低。结论:活检不影响胚胎体外继续发育的能力;Ⅱ级胚胎活检后具有较好的发育潜力,Ⅲ级胚胎活检后囊胚形成率较低,即使形成囊胚,细胞数也较少,不能正常发育;第3天活检时具有7个或7个以上卵裂球的胚胎具有较好的继续发育能力。     

磷酸化信号转导和转录激活因子3(Y705)在子宫腺肌症中的表达及其临床意义

目的通过检测磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)(Y705)和血管内皮生长因子(VEGF)在正常子宫内膜与子宫腺肌症在位内膜中的定位与表达,探讨p-STAT3(Y705)和VEGF在子宫腺肌症中发生发展中的作用。方法免疫组织化学SP法检测14例正常子宫内膜和14例子宫腺肌症在位内膜中p-STAT3(Y705)和VEGF的定位和表达情况;Real-time PCR检测正常子宫内膜与子宫腺肌症在位内膜组织中STAT3 mRNA表达情况;Western blotting检测正常子宫内膜与子宫腺肌症在位内膜组织中p-STAT3(Y705)、STAT3和VEGF蛋白的表达水平。结果 p-STAT3(Y705)主要在正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜腺上皮细胞核中表达,子宫腺肌症在位内膜蛋白表达高于正常子宫内膜(P0.05),正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜相应的增殖期和分泌期p-STAT3(Y705)的表达无显著性差异(P0.05)。正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜中,STAT3在mRNA和蛋白表达水平差异均无显著性(P0.05)。VEGF主要表达在腺上皮细胞中,子宫腺肌症在位内膜蛋白表达高于正常子宫内膜(P0.05),正常子宫内膜和子宫腺肌症在位内膜相应的增殖期和分泌期VEGF的表达差异无显著性(P0.05)。结论 p-STAT3(Y705)促进血管生成对子宫腺肌症的发生发展有一定的作用。     

抗卵巢抗体对体外受精-胚胎移植过程及结局的影响

目的 :研究抗卵巢抗体对体外受精 胚胎移植 (IVF ET)的影响。方法 :接受IVF ET治疗的患者 80例 ,在施行IVF治疗前抽取静脉血 3ml ,测定血清中抗卵巢抗体(AOAb)阳性率 ,并分别计算阳性组和阴性组患者的取卵数、受精率、卵裂率、优质胚胎率、冷冻胚胎率、临床妊娠率及胚胎种植率。结果 :AOAb的阳性率为 2 8.8% (2 3/ 80 )。AOAb阳性患者中平均取卵数、胚胎种植率和临床妊娠率均低于抗体阴性组。结论 :抗卵巢抗体的存在影响了IVF ET的诸过程 ,降低了临床妊娠率。     

干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19在小鼠围着床期子宫内膜中的表达及其作用

目的 探讨干扰素/维甲酸联合应用诱导细胞凋亡相关基因-19（GRIM-19）在小鼠围着床期子宫内膜中的表达及其与胚胎着床的关系。方法 收集早期妊娠第1~6天小鼠子宫组织,采用免疫组织化学法检测GRIM-19蛋白在子宫内膜上皮细胞中的表达及定位情况;收集早期妊娠、假孕和雌孕激素处理小鼠子宫组织,采用Western blotting 和Real-time PCR检测GRIM-19蛋白和mRNA水平;TUNEL方法检测早期妊娠第1~6天小鼠子宫组织细胞凋亡情况;采用pEGFP GRIM-19质粒GRIM-19-siRNA 转染技术使RL95-2细胞系过表达或低表达GRIM-19,检测其对RL95-2-BeWo 共培养体外着床模型球状体黏附率的影响,AnnexinV/PI双染色法检测细胞凋亡,线粒膜电位检测试剂盒（JC-1）检测线粒体跨膜电位;采用Western blotting 和Real-time PCR检测转染后信号转导子和转录激活因子3（STAT3）、肿瘤坏死因子（TNF)-α及白细胞介素（IL)-11蛋白和mRNA水平。结果 GRIM-19在早期妊娠第1~6天小鼠子宫腔上皮和腺上皮均有表达,妊娠第4天GRIM-19蛋白和mRNA水平减低,细胞凋亡减少;假孕第1~6天小鼠子宫内膜GRIM-19表达无明显差异;雌激素处理组小鼠子宫内膜GRIM-19表达减弱;过表达GRIM-19后,RL95-2-BeWo 共培养球状体黏附率降低,细胞凋亡增加,线粒体膜电位减低,RL95-2细胞系中STAT3及IL-11蛋白和mRNA水平减低,TNF-α蛋白和mRNA水平升高。 结论 GRIM-19在胚胎着床中发挥重要作用,可能是通过调节细胞凋亡和免疫耐受为胚胎着床提供保障。