人胎肝细胞的低温保存和临床应用

本文介绍了我们1985～1989年间深低温(-196℃)保存102例人胎肝细胞研究和临床应用的结果。选用因母体情况而不宜继续妊娠的水囊引产中龄胎儿,在无菌条件下取出肝脏,制备成单细胞悬液。用10％二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻保护剂。以1℃/min的速率降温到-30℃,然后5℃/min冷冻到-80℃,冰好的细胞悬液置入液氮(-196℃)中贮存,需要时在38～40℃恒温水浴以快速解冻的程序进行解冻。     

TECA-I型生物人工肝脏支持系统治疗肝脏大部切除急性肝衰犬的研究

目的 :在引进和发展ＴＥＣＡ -Ｉ型生物人工肝脏支持系统 (ＢＡＬＳＳ) ,安全有效地治疗药物诱发急性肝衰犬的基础上 ,进一步了解ＢＡＬＳＳ替代肝脏大部切除急性肝衰犬肝功能的效应 ,以为急性肝衰者提供肝组织再生修复的机会。方法 :研究采用肝脏切除 75%～ 80 %的方法建立急性肝衰模型犬 :将酶消化获得的中国实验用小型猪肝细胞培养于ＴＥＣＡ -Ｉ型ＢＡＬＳＳ的生物反应器中 ,通过中空纤维管膜与肝衰犬的血液进行物质交换 6ｈ ;并以药物治疗组和无肝细胞透析组作为对照。结果 :肝脏大部切除术后 2 4ｈ开始 ,犬血ＮＨ3、ＧＰＴ、ＧＯＴ、…     

人胎肝冻存后细胞成份的观察

有关新鲜胎肝细胞成份的研究,国内已有报导,但冻存后人胎肝细胞的分类,目前尚未见报导。为了解冻存对人胎肝细胞成份的影响,我们观察了5例人胎肝细胞冻存前、后分类的变化。一、材料与方法: 选用5例非病理性水囊引产的3～5个月胎儿。在无菌条件下取出肝脏,用TC-199液制备成单细胞悬液,涂片做瑞氏染色,为冻前组。胎肝细胞在液氮中(-196℃)冻存4～94天,取出立即放入40℃恒温水浴中快速解冻,取标本加入适量的RPMI1640培养液,打匀离心后弃上清,涂片瑞氏染色,     

TECA型生物人工肝脏治疗少肝急性肝衰犬的效应

目的 :观察TECA型生物人工肝支持系统 (BALSS)治疗少肝急性肝衰 (ALF)犬的安全有效性。方法 :以肝脏切除 80 %诱发犬ALF。采用含中国实验用小型猪肝细胞的BALSS对ALF犬血进行 6h交叉灌流 (肝细胞组 ) ;以无肝细胞组及药物组作为对照治疗 ;测定治疗前、后ALF犬血生化、免疫学指标 ,观察犬脏器组织学变化。结果 :BALSS治疗后 ,肝细胞组 10只ALF犬的血NH3、BIL、ALT、AST明显下降 (P <0 0 1) ,PT、PA明显改善 (P <0 0 5 ) ;犬平均生存期为 (10 8 0± 12 0 )h ,其中 3只犬存活 >30d ;其免疫学指标无明显改变。而不含肝细胞的透析及常规药物治疗不能改善ALF犬的上述生化指标 ;其治疗后的平均生存期分别为 (2 4 0± 6 0 )h、(2 0 4± 6 4)h。结论 :含猪肝细胞的TECA型BALSS能安全有效地替代少肝ALF犬的肝脏功能     

胎肝造血细胞连续多次输注治愈重症再生障碍性贫血一例报告

1982年4月我们用胎肝造血细胞连续多次静脉输注,治愈1例重症再生障碍性贫血(以下简称再障),现报告如下。患者女,46岁。病前无明确诱因的乏力、进行性颜面苍白及皮肤粘膜出血倾向伴全血细胞减少一个月,于1981年8月10日入院。     

一种简便的外周血干细胞冷冻保存法

为了简化传统的细胞冷冻方法。即用10%二甲基亚砜（DMSO）作为冷冻保护剂并用程控降温仪-196℃液氮保存,研究了用5%DMSO,3%羟乙基淀粉（HES）和4%人血白蛋白（HSA）作为冷冻保护剂,而不用程控降温仪直接-80℃冰箱冷冻细胞的方法。对比了不同方法冷冻保存外周血干细胞（PBSCs)的细胞活性,单个核细胞数,CFU-GM和CD34^ 细胞回收率。结果发现,简便冷冻法可获得更高的单个核细胞（MNC）和CFU-GM回收率,无凝集现象;并且经长达24个月冷冻保存后仍可获得满意的CFU-GM和CD34^ 细胞回收率,37℃融冻和20℃室温融冻法之间各项指标无明显差别。细胞融冻后在室温下暴露于5%DMSO中1小时,CFU-GM回收率并不降低。而细胞活性从93.2%降至84.5%,所以,这种简便的细胞冷冻保存法简便易行。可替代传统的液氮保存法,对于没有程控降温仪的单位具有实用价值。而且还可减少病人DMSO输入量第一线决策。     

TECA生物型人工肝支持系统替代衰竭肝脏功能机制的实验研究

分析中国实验用小型猪肝细胞型生物人工肝支持系统（ＢＡＬＳＳ）替代衰竭肝功能的可能机制。使少肝急性肝衰（ＡＬＦ）犬血液或１６４０培养液循环流经ＢＡＬＳＳ中空纤维管的内腔,与培养于中空纤维管外腔中的猪肝细胞营养液进行物质交换。测定１６４０液中利多卡因浓度、白蛋白和尿素浓度的变化;用蛋白电泳法测定１６４０液和猪肝细胞营养液中蛋白成分的变化;用透射电镜观察治疗ＡＬＦ犬时ＢＡＬＳＳ中猪肝细胞超微结构的变化。结果显示ＢＡＬＳＳ循环６ｈ时,１６４０液中利多卡因浓度明显降低;白蛋白和尿素浓度明显升高;分子量小于１００ｋＤ的蛋白质成分明显增多。ＢＡＬＳＳ治疗ＡＬＦ犬６ｈ时,猪肝细胞的超微结构出现明显的损伤。提示此型ＢＡＬＳＳ的猪肝细胞通过透析膜可较好地发挥肝细胞的生物转化及合成代谢等功能,以此达到暂时替代衰竭肝脏功能的效应。     

胎肝细胞悬液短期内多次输注治疗再生障碍性贫血(附15例报告)

再障的发病机理目前尚未完全阐明,用同种骨髓移植能重建患者的造血功能提示了造血干细胞的受损可能是本病的主要发病机制之一,但骨髓移植由于受多种条件的限制,目前在国内尚难广泛开展。近年来国内外相继用胎肝细胞输注(FLT)治疗再障,并取得一定疗效。我们在1982年曾用胎肝细胞悬液短期内多次输注治愈1例重症再障,从中得到启发,自1981年3月至1983年7月,我们连续治疗再障15例共63次,取得较好     

冷冻猪肝细胞在生物型人工肝系统中的生存状态研究

目的研究冷冻复温后猪肝细胞在生物型人工肝支持系统(BALSS)中的生存状态.方法用酶法从中国实验用小型猪肝脏分离出猪肝细胞;将1×1010猪肝细胞冷冻保存在-196 ℃液氮中;1个月后复温,将等量的冷冻和新鲜猪肝细胞分别培养在BALSS中,比较其形态、存活率和白蛋白、尿素、葡萄糖合成功能及对利多卡因的转化功能.结果冷冻保存的猪肝细胞,复温后其存活率较高;在培养于BALSS时其生化功能、利多卡因转化功能及超微结构与新鲜肝细胞类似.结论用该冻存方法保存的猪肝细胞可试用于BALSS系统.     

TECA-Ⅰ组合型人工肝治疗2例急性肝衰患者

目的观察碳罐吸附加含猪肝细胞的生物型人工肝(BALSS)组成的组合型人工肝支持系统治疗急性肝衰患者的效应.方法病例1为原发性肝癌和肝硬变,行肝动脉栓塞化疗后,出现肝功能不全及肝性脑病.病例2为梗阻性黄疸、肝门部胆管癌并肝左叶转移,行肝门部胆管癌切除和肝左叶切除术后,出现急性肝肾综合征及肝性脑病.给患者建立股静脉循环;全血或血浆先流经含碳罐的血液净化机,再流经TECA-型生物人工肝机的中空纤维管内管腔.1.5×1010个活率为80%的猪肝细胞循环流经BALSS的中空纤维管外管腔.结果病例1经全血活性碳吸附加BALSS治疗2h时,血从129μmol/L降至93μmol/L;GPT从216.8U/L降至.3U/LGOT从377.5U/L降至307.2U/L,TB从.8μmol/L降至172.5μmol/L;DB从72.0μmol/L降至57.6μmol/L;凝血功能亦有改善(PT从19.5到16.从60%到65%从486mg/dL到512mg/dL).患者神智由嗜睡转为清醒.但2.5h时血液循环管道内出现凝血,中止治疗.病例2经血浆活性碳吸附2h,血NH3从134μmol/L降至98μmol/L.随即行血浆BALSS治疗2h时,血氨明显降低(从98μmol/L降至57μmol/L,GPT,GOT,TB,DB,BUN,Cr等亦降低;患者神智由嗜睡转为清醒.BALSS治疗4h时,血氨从57μmol/L降至30μmol/L,GPT从69.0U/L降至26.9UGOT从64.4U降至29.6U/L;TB从495.8μmol/L降至.6μmol/L;DB从240.9μmol/L降至198.0从40.9mmol/L降至36.6mmol/L;Cr651.7mmol/L降至.9mmol/L.BALSS治疗期间,患者血压、心率、呼吸平稳,安返病房.治疗后d3患者神智清楚,血氨在正常水平,但仍少尿.结论组合型人工肝具有良好地暂时替代衰竭肝脏功能的效应,特别是能迅速降低血氨、逆转肝性脑病.