一项基于单中心的多发性硬化的临床流行病学回顾性分析

【目的】总结华南地区多发性硬化（MS）诊断和治疗现状,为我国MS诊治提供参考。【方法】选取中山大学附属第三医院2011年至2019年3月出院第一诊断MS患者,按发病年龄分为儿童组（<14岁）及成人组（≥14岁）,从流行病学、症状学、辅助检查及治疗情况进行回顾性分析。【结果】296例患者入组;男女比1∶1.67,发病年龄中位数26岁,复发缓解型占65.9%。首发症状肢体无力130例（43.9%）、感觉障碍118例（39.9%）、视力障碍55例（18.6%）,成人与儿童组感觉障碍（114vs.4,Z=-2.155,P=0.031）与发作性症状（4vs.3,Z=-3.610,P=0.000）有统计学差异;复发症状方面,总复发次数712次,其中肢体无力380次（53.4%）,感觉障碍265次（37.2%）,视力障碍134次（18.8%）,成人组与儿童组在运动、感觉、视力、其它眼部症状及发作性症状方面均有统计学差异;脑脊液寡克隆带（OCB）阳性率45.5%,MOG抗体阳性率16.7%。MRI显示脑室旁T2病灶≥9患者57.4%,皮质与近皮质病灶28.1%,幕下病灶0.3%,视神经病灶63.2%,两组无统计学差异。既往治疗药物包括糖皮质激素（使用率79.7%）,β干扰素（15.9%）,硫唑嘌呤（13.9%）;目前正在使用治疗药物包括糖皮质激素（15.5%）,利妥昔单抗（9.1%）,硫唑嘌呤（8.1%）,特立氟胺（8.1%）。【结论】MS的发病年龄、性别、临床症状、影像学等信息与亚洲既往文献报道相似。治疗方面,新型疾病修饰治疗（DMT）药物使用呈上升趋势。     

构建大肠癌细胞相关基因Nrf3融合蛋白真核表达载体及其体外转染的初步功能分析

目的：应用基因芯片生物信息学分析思路筛查大肠癌细胞相关基因Nrf3，构建融合蛋白真核表达载体，检测其对体外转染癌细胞周期与凋亡的影响。方法：实验于2004—01／2006—07在南方医科大学病理解剖教研室及肿瘤研究所与中国农业大学农业生物技术国家重点实验室完成。①实验材料：大肠癌细胞组织及其配对的正常大肠黏膜各3例，由解放军总医院病理科提供：大肠癌LoVo细胞系由南方医科大学肿瘤研究所提供；肝癌SMMC7721细胞系由解放军军事医学科学院放射医学研究所提供；真核表达载体pEGFP-N1（Clontech公司）。②实验方法：分别应用Excel表、Affymetrix Microarray Suite Software5．0分析软件和STATA7．0分析软件，对基因芯片表达谱数据行交集补集分析、秩和检验及T检验，筛选“最重要的大肠癌细胞差异表达基因＆ESTs”，差异表达P〈0．05，差异倍数〉2。应用文献轮廓法进一步分析确定首选研究基因为Nrf3，提取组织样品总RNA，cDNA合成，PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳分离后回收纯化，插入T载体中，SalⅠ和BamHⅠ双酶切后连接到pEGFP-N1载体．获得重组pEGFP-N1-Nrf3质粒。LoVo细胞在体外加入含体积分数为0．1小牛血清、100u／mL青链霉素的RPMI-1640培养基，置于37℃、体积分数为0．05的CO2饱和湿度培养箱中，待转染质粒pEGFP-N1-Nrf3与阴性对照质粒pEGFP-N1转染36h后，荧光显微镜观察候选基因亚细胞定位，FCM分选术观察其在体外对LoVo细胞周期和凋亡的影响。同法观察重组pEGFP-N1-Nrf3质粒体外转染对SMMC7721细胞周期和凋亡的影响。结果：①首选研究大肠癌细胞相关基因的确认：多种统计学方法分析获得最重要的大肠癌细胞相关基因17个，文献轮廓法进一步确认Nrf3为首选研究基因。②Nrf3基因表达：RT-PCR法检测Nrf3在3例大肠癌细胞组织均有表达，而在与其相配对的正常黏膜中表达较弱或不表达，与芯片检测结果基本一致；Nrf3在LoVo细胞中有表达。③Nrf3亚细胞定位：重组pEGFP-N1-Nrf3质粒转染的LoVo细胞其绿色荧光主要分布于细胞核内，提示Nrf3可能定位于细胞核内。（少Nrf3在体外对癌细胞周期与凋亡的影响：体外培养36h后与未转染LoVo细胞的空白对照比较，重组pEGFP-N1-Nrf3质粒转染的LoVo细胞S＋G2／M期所占比例明显减低，G2／M期下降尤为显著，G—G，期细胞所占比例明显增加。Nrf3转染作用于LoVo细胞后，未观察到明显“亚G1”峰（即凋亡峰）的出现。Nrf3体外转染的SMMC7721细胞周期及凋亡情况与LoVo细胞基本相似。结论：大肠癌细胞相关基因Nrf3在体外能够抑制LoVo细胞、SMMC7721细胞的DNA合成和有丝分裂，促使癌细胞阻滞于G0/G，期，抑制其生长增殖的同时不影响细胞凋亡，可作为大肠癌细胞候选分子标志物。     

阿托伐他汀抑制心肌细胞肥大并增强过氧化体增殖物激活型受体β/δ的表达

目的探讨阿托伐他汀在体外对血管紧张素Ⅱ介导的肥大心肌细胞的作用，分析过氧化物酶体增殖物激活型受体β／δ在其中的可能作用。方法采用体外原代培养新生大鼠的心室肌细胞方法，用血管紧张素Ⅱ诱导建立心肌肥厚模型，在模型中加入不同浓度的阿托伐他汀，通过数码相机摄影扫描，以测量软件NIH Image J测定分析心肌细胞表面积，利用氚标亮氨酸掺入方法检测心肌细胞蛋白合成速率及使用逆转录聚合酶链反应半定量测定心房钠尿肽、脑钠尿肽和过氧化体增殖物激活型受体β／δ mRNA的表达变化。结果血管紧张素Ⅱ可使体外培养的心肌细胞表面积（P〈0．01）和氚标亮氨酸的掺入增加（P〈0．01），升高心房钠尿肽和脑钠尿肽（均为P〈0．01）的表达．过氧化体增殖物激活型受体β／δ（P〈0．01）表达下降；阿托伐他汀可逆转上述变化并呈剂量依赖性（P〈0．05）。而作为溶剂的二甲亚砜对心肌肥厚无影响（P〉0．05）。结论阿托伐他汀具有抑制血管紧张素Ⅱ介导的体外心肌细胞肥大的作用，过氧化体增殖物激活型受体β／δ很可能参与该过程。     

Nrf3基因对大肠癌LoVo细胞系生长的影响

目的:在体外检测Nrf3基因对大肠癌LoVo的生长影响作用。方法:构建其融合蛋白真核表达载体,脂质体介导该真核表达载体转染大肠癌LoVo细胞系,FCM观察其在体外对大肠癌LoVo细胞系细胞周期和凋亡的影响;荧光显微镜观察候选基因亚细胞定位。结果:构建融合蛋白真核表达载体pEGFP-N1-Nrf3。RT-PCR方法检测Nrf3的表达,与芯片检测结果基本一致。荧光显微镜下观察Nrf3定位于细胞核内。FCM分析显示Nrf3影响下LoVo G2/M S期细胞所占比例较对照组明显减少,G0/G1细胞所占比例明显增加。证实Nrf3可抑制大肠癌LoVo细胞的DNA合成和有丝分裂,促使细胞阻滞于G0/G1期,抑制大肠癌LoVo细胞的体外生长。FCM分析显示Nrf3在体外对大肠癌LoVo细胞的凋亡无影响。结论:Nrf3在体外具有抑制大肠癌增殖的功能,对大肠癌的细胞凋亡无影响,为肿瘤抑制基因。     

Nrf3基因对肝癌SMMC7721细胞系的体外研究

目的在体外检测Nrf3基因对肝癌SMMC7721的生长影响作用。方法构建其融合蛋白真核表达载体,脂质体介导该真核表达载体转染肝癌SMMC7721细胞系,FCM观察其在体外对肝癌SMMC7721细胞系细胞周期和凋亡的影响;荧光显微镜观察候选基因亚细胞定位。结果Nrf3在肝癌SMMC7721细胞中表达,荧光显微镜下观察Nrf3定位于细胞核内。FCM分析显示Nrf3影响下肝癌SMMC7721G2/M＋S期细胞所占比例较对照组明显减少,G0/G1细胞所占比例明显增加。证实Nrf3可抑制肝癌SMMC7721的DNA合成和有丝分裂,促使细胞阻滞于G0/G1期,抑制肝癌SMMC7721细胞的体外生长。FCM分析,未观察到明显的＂亚G1＂峰（即凋亡峰）,提示Nrf3在体外对肝癌SMMC7721细胞的凋亡无影响。结论Nrf3在体外具有抑制肝癌细胞增殖的功能,对肝癌细胞的凋亡无影响,为肿瘤抑制基因。