二烯丙基二硫对人结肠癌HT-29细胞周期的阻滞作用

[目的]探讨二烯丙基二硫(DADS)对人结肠癌HT-29细胞周期的阻滞作用及其分子机制.[方法]应用MTF法及细胞计数法测量HT-29细胞生长抑制,流式细胞术检测细胞时相分布,免疫细胞法测定p21、C-myc、Cyclin E表达.[结果]MTT法显示,不同浓度DADS作用HT-29细胞12、24、48h后,细胞生长抑制率及细胞群体倍增时间呈浓度、时间依赖性增加.流式细胞仪分析,30、60pmol/LL DADS阻滞HT29细胞在G1期,与对照组相比,可使G1期细胞增加约2倍,而90、120μmol/L DADS显著地将细胞阻滞在G2/M期.免疫细胞化学分析表明在细胞周期阻滞的同时有p21wafl蛋白表达上调,Cyclin E、C-myc蛋白表达下降.[结论]DADS对HT-29细胞的抑制增殖作用可能与细胞周期阻滞有关,DADS对HT-29细胞周期阻滞的分子机制可能与调节p21wafl、Cyclin E、C-myc表达相关.     

CD5和CD43在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及与预后的关系

目的：探讨CD5和CD43与弥漫大B细胞淋巴瘤（ DLBCL）（非特指）临床病理特征及预后的关系。方法收集DLBCL（非特指）病例81例,应用免疫组化染色方法检测CD20、CD3、CD5、CD43、CD10、Bcl－6、Mum－1和Ki－67在该组淋巴瘤中的表达,同时分析CD5和CD43表达与DLBCL临床病理特征及预后的关系。结果本组81例DLBCL病例中,CD5阳性表达7例（8.64％）,CD43阳性表达26例（32.01％）,CD5和CD43同时阳性表达6例（7.41％）,CD5和CD43均为阴性54例（66.67％）,两者表达呈正相关（r＝0.353,P＜0.05）。 CD5表达与年龄、性别、临床分期、B症状、免疫表型分型（ Hans分型）、部位和是否乙型肝炎病毒（ HBV）感染无关;CD43表达与免疫表型分型和HBV感染相关,而与年龄、性别、临床分期、B症状和部位无关。 CD5阳性DLBCL患者的EFS和OS显著低于CD5阴性者;CD43阳性DLBCL患者的EFS和OS显著低于CD43阴性者。 Cox回归分析结果显示,除临分期外,年龄、性别、部位、B症状、免疫表型分型和HBV感染情况对患者生存期均无影响。结论 CD5、CD43和临床分期与DLBCL预后有关。     

hs －CRP、cystatin C、NT －proBNP 在慢性心力衰竭发展过程中的意义

目的：探讨血浆超敏C反应蛋白（hs－CRP）、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C（简称胱抑素C,cystatin C）、氨基末端脑钠肽前体（ NT－proBNP）与慢性心力衰竭（心衰）的关系,总结三者在慢性心衰发展过程中的临床意义。方法选择慢性心衰患者119例,根据纽约心脏病协会（ NYHA）心功能分级分为NYHAⅡ组（ n＝49）、NYHAⅢ组（n＝47）和NYHAⅣ组（n＝23）,其中109例行二维超声心动图检查,测量各房室腔内径、室间隔及左室后壁厚度,左室射血分数（LVEF）值,并根据LVEF分为LVEF＜50％组（n＝61）和LVEF≥50％组（n＝58）。选取心内科无慢性心衰症状的同期住院患者作为对照组（n＝20）。测定血浆hs－CRP、cystatin C、NT－proBNP 水平。结果NYHAⅢ、NYHAⅣ组hs－CRP、cystatin C、lgNT－proBNP水平较NYHA Ⅱ组明显升高（ P＜0.01）, NYHA Ⅲ、NYHAⅣ组LVEF明显低于NYHAⅡ组（P＜0.01）。 LVEF＜50％组hs－CRP、cystatin C、lgNT－proBNP明显高于LVEF≥50％组和对照组（P＜0.01）。 cystatin C、hs－CRP、lgNT－proBNP均与LVEF呈负相关（r＝－0.28、－0.22、－0.48,P＜0.05）。 LVEF≥50％组hs－CRP、lgNT－proBNP明显高于对照组,但cystatin C水平在两组间差异无统计学意义（P＞0.05）。血浆cystatin C、hs－CRP 均与lgNT－proBNP呈正相关（r＝0.407、0.283,P＜0.01）,hs－CRP与cystatin C 呈正相关（r＝0.261,P＜0.01）。结论慢性心衰随着NYHA 分级增高和LVEF降低,血浆hs－CRP、cystatin C、lgNT－proBNP值升高,三者结合更有利于评价慢性心衰患者的临床严重程度。     

二烯丙基二硫启动人白血病HL-60细胞凋亡模型的建立

目的寻找二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点,建立DADS启动HL-60细胞凋亡模型。方法实验设未处理组、处理组和撤药组,分别采用细胞计数、流式细胞术、DNA凝胶电泳、Western blot等方法,绘制生长曲线,检测凋亡率、活化的caspase-3表达率以及DNALadder、凋亡相关蛋白的检测。结果3.6mg.L-1DADS作用HL-60细胞1d,与对照组相比,细胞数没有明显变化,而作用2～6d,细胞数分别减少24.1%、36.5%、44.2%、52%、53.6%。DADS作用1、2d,凋亡率分别为3.1%、4.3%,与未处理组(3.0%)差异无显著性,而作用3～5d的凋亡率分别达到8.5%,15.2%,27.4%,均高于未处理组(P<0.05)。DADS作用2～5d撤药后再培养至d6,凋亡率分别为7.9%,12.4%,16.5%,18.8%,高于未处理组的3.3%(P<0.05)。处理2～5d后,活化的caspase-3的表达率分别为10.0%、10.4%、14.9%、17.3%,均高于未处理组5.4%(P<0.05)。处理组中DADS处理4d后DNA凝胶电泳出现梯状条带,而DADS作用2～5d撤药后再培养至d6均出现明显梯状条带。Westernblot结果表明,从作用2d起,caspase-3表达开始上调,而Bcl-2表达开始下调。结论3.6mg.L-1DADS诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点为处理2d。     

CD56、CD54在甲状腺病变中的表达及意义

目的：检测CD56、CD54在甲状腺病变组织中的表达情况,探讨CD56、CD54的表达在甲状腺病变鉴别诊断中的作用。方法分别收集海南医学院附属医院病理科73例甲状腺乳头状癌、64例良性病变组织蜡块。将137例石蜡标本制做组织芯片。应用免疫组织化学技术检测CD56、CD54蛋白在甲状腺病变组织中的表达情况。结果 CD56在甲状腺乳头状癌组织中大多表达缺失,表达率为14%,在良性甲状腺病变组织中表达率高(92.2%),两者间表达率差异具有显著统计学意义(P<0.01)。CD54在甲状腺乳头状癌及桥本氏甲状腺炎组织中表达增高(69.9%vs 75.0%),呈弥漫阳性表达,这两组间表达差异无统计学意义(P>0.05);在其他良性甲状腺组织包括结节性甲状腺肿和滤泡性腺瘤中,CD54表达较低(3.8%),主要呈散在弱阳性表达,与甲状腺乳头状癌组织相比,其表达差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论 CD56在甲状腺乳头状癌中表达缺失,在甲状腺良性病变组织中表达增高;CD54在甲状腺乳头状癌及桥本氏甲状腺炎中高表达,联合检测CD56、CD54对甲状腺病变的鉴别诊断具有重要作用。     

MicroRNA-29c表达与胃癌临床病理特征的关系研究

目的：探讨miR-29c的表达与胃癌临床病理特征之间的关系，预测miR-29c靶基因生物学功能。方法：从癌症基因组图谱（TCGA）数据库下载胃癌微小RNA表达及临床数据，分析miR-29c在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达情况。收集胃癌及正常组织石蜡标本，制作成组织芯片，使用miRNAscope技术检测miR-29c在胃癌及正常组织中的表达情况，通过卡方检验分析miR-29c表达与胃癌临床病理特征的关系。TargetScan、Pictar、miRTarbase和Starbase数据库预测miR-29c的靶基因，并对潜在靶基因进行富集分析。结果：TCGA数据分析显示，与正常组织相比（n=41）,miR-29c在胃癌组织（n=434）中表达显著下调（P<0.001）。miRNAscope检测结果显示，与正常组织相比，miR-29c在胃癌组织中表达下调（P<0.001），其表达水平与胃癌患者TNM分期、淋巴结转移、组织学分型显著相关（P<0.05）。数据库预测得到18个潜在靶基因，主要富集在DNA甲基化转移酶活性等生物学功能，以及癌症相关miRNAs等信号通路。结论：miR-2...     

基质金属蛋白酶－9基因多态性与河南汉族人群慢性心力衰竭的相关性

目的：探讨基质金属蛋白酶－9（MMP－9）基因多态性与河南汉族人群慢性心力衰竭（CHF）发病的相关性。方法采用限制性扩增片段长度多态性的方法检测116例CHF患者（ CHF组）和100例健康体检者（对照组）MMP－9基因－1562C＞T（rs3918242）、R279Q（rs17576）、P574R（rs2250889）多态性,根据酶切后的片段数目和大小判读等位基因和基因型;病例对照分析并运用SHEsis软件分析实验数据,判断MMP－9基因上3个SNPs是否与CHF有关。结果 MMP－9基因－1562C＞T位点的等位基因频率两组间差异无统计学意义（ P＞0．05）,携带T等位基因个体患CHF的风险是C等位基因的1．25倍（OR＝1．254）;CHF组MMP－9基因 R279Q的AG基因型频率增加（P＜0．05）。 MMP－9基因P574R位点等位基因及基因型频率在两组间差异无统计学意义（P＞0．05）;MMP－9基因3个SNPs组成的单体型共推断出7种,其中单体型ACT和GCT 频率在CHF组和对照组中差异有统计学意义（P＜0．05）,CHF组和对照组比较,单体型ACT OR＝2．823（95％CI 1．062～7．501）＞1,说明单体型ACT更易增加CHF患病风险。结论在河南汉族人群中,MMP－9基因－1562C＞T位点的等位基因T和R279Q位点AG基因型以及3个SNPs组成的单体型ACT、GCT可能增加CHF患病的风险性,而P574R位点可能与CHF的易感性无关。     

二烯丙基二硫对人结肠癌HT-29细胞G_1期的阻滞作用

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人结肠癌HT-29细胞G1期的阻滞作用及分子机制。方法采用MTT、细胞计数法、流式细胞术和免疫细胞化学方法分析DADS对体外培养的HT-29细胞增殖抑制作用、细胞周期分布及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果MTT法显示,60、120μmol.L-1DADS作用HT-29细胞24 h后,生长抑制率分别达23.1%、45.6%。细胞计数法表明,常规培养HT-29细胞群体倍增时间为22.58 h,60μmol.L-1DADS作用HT-29细胞后,其细胞群体倍增时间延长到31.20 h。流式细胞仪分析结果显示,60μmol.L-1DADS阻滞HT-29细胞在G1期,与对照组相比,可使G1期细胞增加约2倍,而120μmol.L-1DADS显著地将细胞阻滞在G2/M期。免疫细胞化学分析表明在G1期阻滞同时有p21W af1蛋白表达上调,Cyc lin E、C-myc蛋白表达下降。结论低剂量DADS对HT-29细胞的抑制增殖作用可能与G1期阻滞有关,DADS对HT-29细胞G1期阻滞的分子机制可能与调节p21W af1、Cyc lin E、C-myc表达相关。