稳定高表达RORα基因的人胃癌MGC803细胞系的构建与鉴定

目的 构建维甲酸相关孤核受体α(RORα)基因的真核表达载体,并建立稳定高表达RORα的人胃癌MGC803细胞,为研究RORα的功能奠定基础。方法根据RORα基因的cDNA全序列,设计一对带有限制性酶切位点的引物。从人胃癌MGC803细胞中提取mRNA作为模板合成RORα cDNA第一链,并用上述引物扩增目的基因全序列,然后经双酶切插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),转化大肠杆菌DH5α;用氨苄青霉素筛选pcDNA3.1(+)-RORα的阳性菌株,双酶切和测序进行鉴定。用经鉴定的重组质粒pcDNA3.1(+)-RORα转染MGC803细胞,G418筛选获得RORα/MGC803细胞株;Real-time PCR和Western blot检测该细胞株RORα的表达情况。结果经双酶切鉴定,构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)-RORα包含有大约1 640 bp的插入片段,与预期大小一致;表达载体经测序鉴定,其插入片段碱基序列与RORα基因的cDNA序列完全一致。用构建的真核表达载体pcDNA3.1(+)-RORα转染MGC803细胞后,筛选到可稳定传代的RORα/MGC803细胞株。Real-time PCR与Western blot检测显示,RORα/MGC803细胞RORα mRNA和蛋白表达增高。结论成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-RORα和建立高表达RORα基因的RORα/MGC803细胞。     

甲状腺滤泡性腺瘤与滤泡性腺癌形态定量分析

利用 PIPS-2 0 2 0型超清晰图象分析系统对 2 7例甲状腺滤泡性腺瘤和 2 4例甲状腺滤泡性腺癌进行胞核形态定量研究。结果显示 ,甲状腺滤泡性腺瘤与甲状腺滤泡性腺癌 8项胞核形态定量参数经统计学处理比较 ,核面积、核周长、核等效直径、核面积体积、核长径、核短径、核长短比、核形状因子等 8项指标均有高度显著性差异 ( P<0 .0 1) ,提示上述形态定量参数可作为鉴别甲状腺滤泡性良恶性肿瘤的参考指标。     

Cdc25C cyclin B1在二烯丙基二硫化物诱导人胃癌BGC823细胞G2/M期阻滞中的作用

目的：研究二烯丙基二硫化物（DADS）对人胃癌BGC823细胞的增殖及细胞周期的影响以及Cdc25C、cyclin B1的作用。方法：采用MTT法检测BGC823细胞的生长活性；流式细胞术分析DADS对细胞周期分布的影响；Western blot观察DADS对Cdc25C蛋白、cyclin B1蛋白表达的影响。结果：MTT比色实验结果显示，DADS对人胃癌细胞具有明显的生长抑制作用，且呈显著的剂量-效应依赖关系（P〈0．05）。流式细胞分析发现，DADS作用12h时，G2/M期细胞增加到30．1％；24h时增加到58．1％；36h达50．2％（P〈0．05）。Westernblot结果表明，DADS呈时间依赖性抑制人胃癌BGC823细胞周期Cdc25C磷酸酶的表达，cyclin B1表达在DADS处理24h后开始下降（P〈0．05）。结论：DADS可抑制人胃癌BGC823细胞增殖，其增殖抑制与细胞周期G2/M期阻滞有关；DADS可能是通过抑制Cdc25C、cyclin B1表达使部分BGC823细胞停滞在G2／M期。     

二烯丙基二硫启动人白血病HL-60细胞凋亡模型的建立

目的寻找二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点,建立DADS启动HL-60细胞凋亡模型。方法实验设未处理组、处理组和撤药组,分别采用细胞计数、流式细胞术、DNA凝胶电泳、Western blot等方法,绘制生长曲线,检测凋亡率、活化的caspase-3表达率以及DNALadder、凋亡相关蛋白的检测。结果3.6mg.L-1DADS作用HL-60细胞1d,与对照组相比,细胞数没有明显变化,而作用2～6d,细胞数分别减少24.1%、36.5%、44.2%、52%、53.6%。DADS作用1、2d,凋亡率分别为3.1%、4.3%,与未处理组(3.0%)差异无显著性,而作用3～5d的凋亡率分别达到8.5%,15.2%,27.4%,均高于未处理组(P<0.05)。DADS作用2～5d撤药后再培养至d6,凋亡率分别为7.9%,12.4%,16.5%,18.8%,高于未处理组的3.3%(P<0.05)。处理2～5d后,活化的caspase-3的表达率分别为10.0%、10.4%、14.9%、17.3%,均高于未处理组5.4%(P<0.05)。处理组中DADS处理4d后DNA凝胶电泳出现梯状条带,而DADS作用2～5d撤药后再培养至d6均出现明显梯状条带。Westernblot结果表明,从作用2d起,caspase-3表达开始上调,而Bcl-2表达开始下调。结论3.6mg.L-1DADS诱导人白血病HL-60细胞凋亡的启动点为处理2d。     

Olympus电子内窥镜系统冷光源出现气压不足现象分析

本文主要围绕奥林巴斯电子内窥镜,介绍其CLV—U40型冷光源出现气压不足现象时的故障分析及解决办法。     

鼻咽癌血清EB病毒IgA检测的临床分析

目的 探讨血清EB病毒衣壳抗原IgA(EBV-VCA-IgA)检测对鼻咽癌的临床价 值.方法 使用酶联免疫吸附(ELISA)方法对共计1335例健康人群、鼻咽癌、脑胶质瘤、胃癌、结直肠癌患者血清EBV-VCA-IgA)进行检测.结果 采用SPSS13.0软件进行统计分析.结果 鼻咽癌患者血清EBV-VCA-IgA阳性率为64.9%,健康人群为12.8%、脑胶质瘤为13.2%、胃癌为9.7%、结直肠癌为9.3%,鼻咽癌患者血清EBV-VCA-IgA阳性率较健康人群、脑胶质瘤、胃癌、结直肠癌患者明显升高(P=0.000);男性鼻咽癌患者阳性率为67.6%.女性为58.3%,但差异尚无显著性(P=0.074);随着鼻咽癌患者年龄增大,血清EBV-VCA-IgA阳性率有增高趋势,但差异无显著性(P=0.517);治疗后鼻咽癌患者血清KBV-VCA-IgA较治疗前阳性率有显著下降(P=0.018),滴度也明显下降.结论 血清EBV-VCA-IgA抗体检测可以作为鼻咽癌筛查和诊断的辅助方法,并可以作为监测鼻咽癌疗效的潜在观察指标.     

尿沉渣有形成分分析系统sysmexUF-1000i半导体激光系统故障排除

本文主要简述sysmexUF—1000i尿沉渣分析系统的基本原理,讲解在维修实际工作中遇到的仪器较为特殊的故障分析和排除过程。     

常见甲状腺良恶性肿瘤的形态定量分析

目的　探讨形态定量指标在常见甲状腺良恶性肿瘤鉴别诊断中的价值并建立数据库 ,为计算机协助诊断疾病打下基础。方法　利用PIPS -2 0 2 0型超清晰图象分析系统对 3 2例甲状腺良性乳头状增生病变 (TBPL)、3 2甲状腺乳头状腺癌 (TPAC)、2 7例甲状腺滤泡性腺瘤 (TFA)、2 4例甲状腺滤泡性腺癌 (TFAC)进行胞核形态定量研究。结果　TBPL与TPAC、TFA与TFAC、TBPL与TFA、TPAC与TFAC八项胞核形态定量参数经统计学处理比较 ,TBPL与TPAC的七项指标有非常显著性差异 (P <0 0 1)、TFA与TFAC的八项指标均有非常显著性差异 (P <0 0 1)、TBPL与TFA的 7项指标有非常显著性差异 (P <0 0 1) ;TPAC与TFAC的八项指标均无非常显著性差异 (P >0 0 1)。结论　形态定量参数可作为鉴别甲状腺常见良恶性肿瘤的参考指标。