二烯丙基二硫对人结肠癌SW480细胞周期的阻滞作用

背景与目的:前期研究表明,二烯丙基二硫(diallyl disulfide.DADS)能有效在体内外抑制人结肠癌细胞增殖,并将细胞阻滞于G2/M期.本实验旨在进一步探讨DADS对人结肠癌SW480细胞周期阻滞作用的可能机制.方法:采用MTT、细胞计数法检测DADS对SW480细胞增殖的抑制作用;流式细胞术检测DADS对SW480细胞周期的影响;免疫细胞化学法检测DADS作用后PCNA、P53表达情况,蛋白印迹法分析P21WAF1、细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)表达的改变.结果:不同浓度DADS作用SW480细胞24、48、72 h后.对细胞增殖的抑制作用及细胞群体倍增时间呈浓度、时间依赖性增加.流式细胞仪分析结果显示,DADS作用SW480细胞后,G0/G1期细胞含量降低.S期细胞比例变化不大,而G2/M期细胞比例则明显增加,且随着处理浓度的增加和处理时间的延长,其G2/M期细胞含量逐渐增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).DADS作用后.免疫细胞化学检测显示,PCNA、P53蛋白表达明显下降.蛋白印迹分析显示,DADS作用SW480细胞后,Cyclin BI蛋白表达明显下降,P21WAF1蛋白的表达明显升高,均呈时间效应关系.结论:DADS可能通过下调PCNA、P53、Cyclin B1蛋白表达.上调P21WAF1蛋白表达引起SW480细胞G2/M期阻滞.     

二烯丙基二硫对人鼻咽癌CNE2细胞周期的阻滞作用

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)对人鼻咽癌CNE2细胞周期的阻滞作用及分子机制.方法 体外培养CNE2细胞,采用MTT比色实验、细胞计数法、细胞形态学观察、流式细胞仪和Western blotting方法分析DADS对CNE2细胞的增殖抑制作用、细胞周期分布的影响及细胞周期相关蛋白p21WAF1的表达.结果 MTT法显示,不同浓度DADS(90、140、240、400 μmol/L)处理CNE2细胞48小时后,生长抑制率分别为3.3%、12.9%、28.3%、56.9%;细胞计数法表明,常规培养CNE2细胞群体倍增时间为24.5小时,DADS的浓度由90 μmol/L增加到400 μmol/L时,其细胞群体倍增时间由27.6小时延长到93.1小时;HE染色结果显示,不同浓度DADS处理CNE2细胞48小时后细胞异型性明显减少,核浆比例明显减少;流式细胞仪分析显示DADS呈浓度依赖性将CNE2细胞阻滞在G0/G1期;Western blotting分析表明,在细胞周期阻滞的同时有p21WAF1蛋白表达上调.结论 DADS对CNE2细胞的抑制增殖作用与G0/G1期阻滞有关,其分子机制可能与调节p21WAF1表达有关.     

二烯丙基二硫对K562细胞增殖和细胞周期的影响

目的 探讨二烯丙基二硫( DADS)对人白血病K562细胞增殖和细胞周期的影响.方法 采用台盼蓝计数法、形态学观察、MTT分析法、流式细胞术、免疫组化法探讨DADS对K562细胞的作用及机制.结果 DADS能抑制K562细胞增殖;DADS处理后的K562细胞主要停滞在G2/M期;DADS处理后的K562细胞P21表达增加.结论 DADS有抑制K562细胞增殖作用,并使K562细胞生长阻滞在G2/M期.其作用机制可能与细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂P21参与其中有关.     

二烯丙基二硫阻滞人胃癌细胞周期的作用及机制

 目的观察二烯丙基二硫(DADS)对人胃癌MGC803细胞周期的影响及其机制。方法应用流式细胞术分析人胃癌MGC803细胞在DADS处理前后细胞周期分布的变化。采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白过氧化酶方法(SP)检测DADS处理前后p21WAF1、Rb、p53、p21ras、Cmyc基因的表达。结果20、25、30、35μ·ml-1DADS的不同浓度处理的MGC803细胞G1期细胞所占比例无影响,S期细胞数减少,而G2期细胞则明显增加,与未处理组比较有显著性差异(P<0.05)。DADS作用后的MGC803细胞,p21WAF1表达明显增加,而Rb表达呈弱阳性,p53、p21ras、Cmyc表达阴性。DMSO处理的MGC803细胞亦呈现同样改变。结论DADS可以阻滞MGC803细胞于G2/M期。其作用机制可能与上调p21WAF1、Rb基因表达,下调p53、ras、Cmyc基因表达有关。     

p38通路在二烯丙基二硫诱导人胃癌MGC803细胞G2/M期阻滞中的作用

背景与目的:研究表明p38通路参与了细胞G2/M期阻滞过程的调控,但对其调控机制研究很少.本研究旨在探讨p38通路在二烯丙基二硫(diallyldisulfide,DADS)诱导人胃癌MGC803细胞G2/M期阻滞中的作用及其机制.方法:采用MTT法检测MGC803细胞的生长活性;流式细胞仪检测药物对细胞周期分布的影响;Western blot法检测药物对P38蛋白、磷酸化P38蛋白、Cdc25C蛋白的表达.结果:MTT法检测结果显示,P38特异性抑制剂SB203580可拮抗DADS对MGC803细胞的抑制增殖作用.流式细胞仪分析表明,30 mg/L的DADS处理MGC803细胞24 h后,G2/M期的比率为39.4%,高于对照组的9.3%(P＜0.05);但用SB203580抑制P38的活性后,DADS诱导的G2/M期比率从39.4%降到21.2%(P＜0.05).Western blot结果表明,DADS处理MGC803细胞后,p38通路快速激活,磷酸化P38的表达与对照组相比,在20 min内升高3.52倍,而P38总蛋白量没有发生明显改变;DADS作用24 h后,Cdc25C磷酸酶表达降低了62%,而用SB203580抑制剂后,DADS对Cdc25C的抑制作用可以部分逆转(P＜0.05).结论:DADS可能通过激活p38通路使部分MGC803细胞停滞在G2/M期,p38通路调节Cdc25C磷酸酶的表达在DADS诱导MGC803细胞G2/M期阻滞中起着重要作用.     

双糖链蛋白聚糖对大肠癌细胞增殖抑制作用及其机制研究

[目的]探讨双糖链蛋白聚糖Biglycan对大肠癌细胞HT-29和SW480增殖抑制作用及其机制[方法]采用Brd U法和细胞克隆形成实验检测Biglycan对大肠癌细胞HT-29和SW480的增殖能力影响;Hoechst染色检测细胞凋亡情况;Western Blot法检测加药处理前后细胞内细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CyclinA、p21和p27表达变化.[结果]Biglycan呈剂量依赖性的抑制大肠癌细胞HT-29和SW480生长,100nmol/L Biglycan和50 nmol/L Biglycan浓度作用即可诱导HT-29 、SW480细胞凋亡. 经Biglycan处理后,细胞内CyclinD1和CyclinA表达出现下调趋势,p21和p27表达有所增加.[结论]Biglycan 可能抑制大肠癌细胞HT-29和SW480增殖,诱导细胞凋亡、下调CyclinDl和CyclinA表达和上调p21和p27表达.     

丙戊酸钠调节组蛋白乙酰化抑制胃癌细胞增殖的实验研究

目的:探讨应用组蛋白脱乙酰酶抑制剂丙戊酸钠(VPA)逆转染色体组蛋白低乙酰化水平对胃癌细胞增殖的影响及其分子机制.方法:应用0 75 ~4 0 mmol/L VPA作用于胃癌细胞系BGC-823细胞后,MTT法检测细胞生长抑制,PI标记流式细胞术检测细胞周期,间接免疫荧光法分析Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E和p21Waf/cip1蛋白表达,RT-PCR检测分析Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E和p21Waf/cip1 mRNA表达.结果:经0 75~4 0 mmol/L VPA作用24、48、72和96 h,各实验组均出现了时间、剂量依赖趋势的生长抑制,生长抑制率为9%~66%,差异有统计学意义,P<0 001;对照组细胞增殖G1期所占比例为57 8%~60 9%;而实验组则随药物浓度、作用时间的不同而出现不同程度的细胞周期G1期阻滞,G1期比例为58 2%~79 4%,与对照组比较差异有统计学意义,P<0 001.VPA干预BGC-823细胞后, Cyclin A、Cyclin D1蛋白和mRNA表达明显下调而p21Waf/cip1蛋白和mRNA表达明显上调,与对照组比较差异均有统计学意义,P<0 001;Cyclin E蛋白和mRNA表达变化未见明显差异,P>0 05.结论:组蛋白特异性脱乙酰酶抑制剂VPA可明显抑制胃癌细胞增殖、阻滞细胞增殖周期于G1期;其阻滞胃癌细胞增殖的作用通过上调p21Waf/cip1 mRNA、蛋白表达,下调Cyclin D1、Cyclin A mRNA和蛋白表达分别和(或)协同实现.     

1α,25-二羟基维生素D3通过表皮生长因子受体和细胞周期调节卵巢癌细胞的生长

目的:研究1α,25-二羟基维生素D3(1,25VD3)通过对表皮生长因子受体和细胞周期的调控调节人卵巢癌细胞的生长.方法:用1,25VD3处理人卵巢癌细胞株OVCAR3后,MTT法测定细胞生长情况,流式细胞仪分析细胞周期,Western blot检测EGFR表达.用pcDNA3-EGFRvIII质粒转染 OVCAR3 细胞,筛选出稳定过表达EGFR的克隆株EGFR-OVCAR3.用1,25VD3及EGFR抑制剂分别处理OVCAR3和EGFR-OVCAR3细胞,Western blot检测p27、Cyclin E和GADD45蛋白表达.结果:1,25VD3下调OVCAR3细胞EGFR蛋白表达,对细胞生长有明显抑制作用,使其G0/G1和G2/M期增多,S期明显减少,而对EGFR-OVCAR3细胞无明显作用.Western blot显示,1,25VD3上调OVCAR3细胞p27和GADD45蛋白表达,下调Cyclin E蛋白表达 ,而对EGFR-OVCAR3 细胞三种蛋白表达无调节作用,用EGFR抑制剂处理EGFR-OVCAR3细胞后,又能调节p27和cyclin E蛋白的表达.结论:1,25VD3可以调节EGFR蛋白表达,并进而调节下游分子,包括p27和GADD45,最后调控细胞周期,抑制细胞G1/S期转换和G2/M期转换,从而抑制卵巢癌细胞的生长.     

DADS对人结肠癌SW480细胞裸鼠致瘤的影响

目的探讨二烯丙基二硫（DADS）对人结肠癌SW480细胞裸鼠致瘤的影响。方法建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型。15只实验裸鼠分为3组,每组5只。观察DADS对裸鼠致瘤的影响,并记录各组裸鼠及其皮下移植瘤的生长情况,绘制肿瘤生长曲线,计算肿瘤体积和肿瘤生长抑制率。光镜下观察移植瘤组织形态学改变,采用免疫组织化学法检测瘤组织内增殖细胞核抗原（PCNA）、p21WAF1蛋白表达情况,应用流式细胞术检测移植瘤细胞周期分布。结果 DADS能明显降低人结肠癌SW480细胞致瘤性,抑制移植瘤生长,降低肿瘤组织异型性,引起细胞周期G2/M阻滞,抑制PCNA蛋白表达,增强p21WAF1蛋白表达。结论 DADS可明显降低人结肠癌SW480细胞的致瘤性,抑制SW480细胞增殖,引起G2/M期阻滞,其可能与抑制PCNA蛋白表达、增强p21WAF1蛋白表达有关。     

RU486对前列腺癌细胞增殖相关基因表达的影响

目的:探讨米非司酮(RU486)对人前列腺癌PC-3和LNCap细胞增殖及相关基因Cyclin E、CDK2、p21和p27表达的影响.方法:体外培养前列腺癌PC-3和LNCap细胞,用RU486处理PC-3和LNCap细胞,CCK-8检测对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测对细胞周期的影响;RT-PCR法检测细胞增殖相关基因Cyclin E、CDK2,p21和p27mRNA的表达,蛋白质印迹法检测细胞增殖相关蛋白CDK2、pCDK2的表达.结果:RU486对PC-3和LNCap细胞体外增殖均有明显的抑制作用,且呈时间-剂量依赖性;25 μmol/L RU486处理PC-3和LNCap细胞24 h后,2种细胞均被阻滞在G1/S期;不同浓度的RU486处理PC-3和LNCap细胞24 h后,随着RU486浓度的增加,Cyclin E mRNA表达下降,p21和p27 mRNA表达增加,CDK2 mRNA表达无明显变化,但pCDK2表达呈下降趋势.结论:RU486能使前列腺癌LNCap和PC-3细胞周期阻滞在G1/S期,并能通过上调p21和p27 mRNA的表达,下调Cyclin E mRNA及磷酸化的CDK2蛋白而抑制细胞增殖.     

Inhibition of Glioma Cell Proliferation by Neural Stem Cell Factor

Summary Neural stem cells (NSC) have unique differentiation-, proliferation-, and motility properties. To investigate whether they secrete factors that interfere with the proliferation of glioma cells, we grew glioma cells in conditioned medium (CM) obtained from cultures of neurospheres including neural stem / progenitor cells (NSPC) isolated from embryonic (E14)- or adult mouse brain or fetal human brain. 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and BrdU-labeling assays showed that CM from NSPC (NSPC/CM) contained factor(s) that inhibited the proliferation of glioma cells by 28–87%. Filter-fractionation of NSPC/CM revealed that the 50,000–100,000 nominal molecular weight limit (NMWL) fraction contained the inhibitory activity. On the basis of these observations we transplanted 203G glioma cells and/or NSPC into the intrathecal space of the cisterna magna of mice to investigate whether NSPC interfere with the proliferation of glioma cells in vivo. Mice transplanted with both 203G and NSPC survived significantly longer than did mice transplanted only with 203G. We concluded that NSPC secrete factor(s) that may control glioma cell proliferation.     

Cell Size Following Irradiation in Relation to Cell Cycle

The cell volume of Ehrlich ascites tumour cells was studied following a radiation dose of 5.0 Gy. The cell volume increased 12 to 30 hours after irradiation by about 20 per cent, was normal at about 50 hours, and increased again at 72 hours. In order to explain these changes the composition of the cells in cell cycle was studied. In addition, the cell volume of irradiated cells from the various parts of the cell cycle, separated by centrifugal elutriation, was measured. The changes in the mean cell volume of unseparated cells could be explained by variations in the cell cycle composition of the cell population. Irradiated cells from the various parts of the cell cycle did not deviate from the volume of non-irradiated cells. The cell volume doubled during the cell cycle. This increase was, however, not linear.     

Clonal T Cell Proliferation in Patients with Pure Red Cell Aplasia

Among the patients with idiopathic pure red cell aplasia (PRCA) who do not meet the diagnostic criteria of chronic lymphocytic leukemia, there are some cases which suggest an association with clonal T lymphocytic proliferation. The morphological characteristics and responses to treatment revealed two distinct groups among the present 13 patients. The lymphocytes in one group were typical granular lymphocytes of T cell phenotype which were treated effectively with cyclophosphamide rather than cyclosporine. The response to therapy in this group occurred after a perceptible reduction in lymphocyte mass, which took at least 8 weekds.

The lymphocytes in the second group consisted mainly of non-granulated lymphocytes or some granulated lymphocytes with fine and indistinct granules and responded well to cyclosporine therapy. A reduction in lymphocytes mass was not a prerequisite for the development of the remission of red cell aplasia in this group, and responses occurred within 4 weeks. Clonal T cell proliferation was detected in some patients, which raised the possibility of idiopathic PRCA being associated with a clonal proliferation of T cells. Distinguishing lymphocytes in patients with PRCA could potentially be used to plan treatment strategy and assess prognosis.     

人干扰素对HL60,K562细胞生长及细胞周期的影响

用人干扰素(α和γ)与HL60、K562细胞共同培养后,对细胞生长有不同程度抑制作用。IFN_r对细胞生长抑制作用强于IFN_r,IFN_r和IFN_r联合应用有协同作用,在K562细胞,细胞在细胞周期中的分布也发生改变,G_0/G_1期细胞比例减少,S期细胞比例增高,在HL60细胞则无明显的细胞周期再分布情况。提示细胞在S期的堆积是细胞生长受抑的原因之一。     

晚期非小细胞肺癌患者外周血DC亚型与 NK细胞的关系

 目的 探讨非小细胞肺癌患者外周血树突状细胞亚群（DC1/DC2）和机体NK细胞含量之间的关系及其临床意义。方法 采用流式细胞术检测40例肺癌患者外周血DC亚群（CD11c+DC/DC1和 CD123+ DC／DC2）、NK细胞含量及血浆IL 12的浓度， 并以10例健康受试者作为对照。结果 肺癌患者外周血CD11c+DC百分率为（0.66±0.24）％，比对照组（1.38±0.18）％明显降低（P<0.01），CD123+ DC百分率（0.28±0.17）％与对照组（0.27±0.11）％相比， 差异无统计学意义（P＞0.05）；肺癌患者与健康人比较，NK细胞含量及IL 12的浓度均降低（P<0.05）。NSCLC 患者NK细胞的含量与CD11c+百分数及血浆IL 12 浓度均呈正相关（P<0.05），与CD123+百分数呈负相关（P<0.01）。DC各亚型百分率同患者的卡氏评分、化疗史有关联（P<0.01），NK细胞的含量与年龄相关（P<0.05）。结论 非小细胞肺癌患者DC1功能低下，IL 12分泌能力障碍，从而影响了NK细胞的活性。DC亚型与NK细胞含量之间以及它们与临床生物学行为之间都有一定关系。     

CD248在肾透明细胞癌中的表达及临床意义CSCD

目的探讨内皮唾酸蛋白(CD248)在肾透明细胞癌(ccRCC)组织中的表达及临床意义。方法收集115例ccRCC组织及对应癌旁组织的石蜡标本,同时收集其中17例ccRCC组织及对应癌旁组织的新鲜标本。qRT-PCR检测17例ccRCC组织及对应癌旁组织中CD248 mRNA的表达;免疫组织化学法检测115例ccRCC患者石蜡标本的CD248蛋白水平,分析CD248表达与ccRCC临床病理指标及预后的相关性。结果ccRCC组织中的CD248阳性表达免疫组织化学反应强度显著强于癌旁组织,差异有统计学意义(P=0.0061),且CD248蛋白阳性信号定位于细胞核及细胞质。CD248 mRNA在癌旁组织中的表达水平明显低于ccRCC组织(P=0.0026)。CD248高表达组组间总生存率明显低于CD248低表达组(44.4 vs.57.2月,P=0.017)。结论CD248的表达可能参与ccRCC的发生发展。与癌旁组织比较,CD248在ccRCC组织中高表达;CD248高表达的ccRCC患者术后生存时间较短。     

长春新碱对鼻咽癌细胞增殖和周期的影响

[目的]探讨长春新碱(VCR)对鼻咽癌CNE鄄2Z细胞增殖和周期的影响。[方法]MTT法检测增殖抑制率和IC50,流式细胞术分析细胞周期。[结果]不同浓度的VCR分别处理细胞24h、48h、72h时,抑制率随浓度的增加和时间的延长而增加,其IC50分别为(2.01±0.26)、(1.59±0.23)、(0.92±0.11)μg/ml,各IC50间的差异有非常显著性意义(P<0.01)。0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/mlVCR分别处理细胞6h、12h、24h时,G0/G1期细胞明显下降,G2/M期细胞明显升高,随时间的延长变化更明显(P<0.01)。[结论]VCR对CNE鄄2Z细胞具有增殖抑制作用,该抑制作用具有剂量和时间依赖性;阻滞细胞于G2/M期,此阻滞作用具有时间依赖性;一定剂量的VCR可能通过阻滞CNE鄄2Z于G2/M期而抑制其增殖。