阻断交感神经及加味逍遥丸对心理应激小鼠免疫功能的影响

目的探讨交感-肾上腺髓质轴阻断对心理应激小鼠免疫器官结构和细胞免疫功能的影响及加味逍遥丸调节心理应激损伤的作用机理。方法利用电刺激心理应激箱诱发心理应激模型、六羟多巴胺阻断外周交感神经、加味逍遥丸为平行对照研究中药;检测脏器指数、胸腺细胞凋亡率、NK细胞活性、淋巴细胞转化率、胸腺病理等免疫学指标。结果单纯应激组较单纯对照组小鼠胸腺指数下降、脾指数下降[(0.41±0.13)vs(0.53±0.15);P<0.05]、胸腺细胞凋亡率升高[(33.21±5.54)%vs(17.79±5.18)%;P<0.01]、NK细胞活性下降[(22.1±14.1)%vs(35.5±10.3)%;P<0.01]、淋巴细胞转化率下降(P<0.01);六羟多巴胺阻断后应激组较单纯应激组NK细胞活性增大[(31.9±14.7)vs(22.1±14.1);P<0.05]、淋巴细胞转化率升高[(6985±580)cpm vs(4810±598)cpm,ConA(0.5ug/ml);P<0.01];灌胃加味逍遥丸后应激组较单纯应激组脏器指数升高、胸腺细胞凋亡率下降[(20.37±4.56)%vs(33.21±5.54)%;P<0.01];二者均能显著降低血糖皮质激素水平(P<0.05)。结论阻断外周交感神经明显保护心理应激小鼠的细胞免疫功能;加味逍遥丸通过减少胸腺细胞凋亡、防止胸腺和脾脏萎缩、降低血糖皮质激素等方面发挥抗应激损伤作用,其发挥作用的途径可能不是通过阻断外周交感神经实现的。     

清肝方在ConA诱导的肝损伤中免疫调节作用的研究

目的:研究以清热利湿、琉肝解郁、柔肝缓急立法的清肝方对ConA诱导的免疫性肝损伤小鼠肝、脾、胸腺指数、转氨酶及病理改变的影响.方法:46只ICR雄性小鼠随机分成A(清肝方组)、B(清肝方加猪苓多糖腹腔注射组)、C(模型组)、D(正常对照组)四组.造模前,各组分别预治疗,其中,A组给予清肝方灌胃,B组予清肝方灌胃加腹腔注射猪苓多糖溶液,C、D组予蒸馏水灌胃,每日两次,共计5次,于末次给药后1h,采用0.2%的ConA溶液予小鼠尾静脉注射造模,分别于2h检测血清TNF-a,8h检测血清IFN-r、IL-4,10h应用改良赖氏法检测血清中转氮酶的水平,并观察肝,脾病理变化情况.结果:A、B两组造模2h后,TNF-a水平明显降低:8h后血清IFN-r升高、IL-4水平降低;10h后,可明显降低肝、脾指数及血清转氨酶水平.组织结构分析表明清肝方及清肝方加猪苓多糖腹腔注射组,可明显减轻肝脏及脾脏的病理损伤.结论:清肝方通过激活细胞免疫,增强清除病毒的能力,发挥扶正祛邪之功效,同时,通过减少TNF-a,抑制NF-kB信号转导途径,减少后续炎症因子的释放,减轻ConA诱导的肝的免疫性损伤.     

消喘膏穴位贴敷对卵蛋白诱发哮喘大鼠Th1/Th2的调节作用

目的 探讨消喘膏穴位贴敷防治哮喘的作用机制.方法 以卵蛋白诱发哮喘大鼠为研究对象,消喘膏贴敷在大鼠双肺俞、心俞、膈俞上,观察大鼠血清及肺泡灌洗液(BALF)中Th1/Th2细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)、白介素4(IL-4)的改变,并对大鼠肺病理进行分析.结果 与模型组比较,消喘膏穴位贴敷后血清及肺泡灌洗液中Th1细...     

丹参酚酸B调节miR-210保护HUVEC过氧化损伤机制研究

目的:研究丹参酚酸调节miR-210对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)过氧损伤的保护作用机制。方法:采用H-DMEM完全培养基培养HUVEC细胞株,3次传代后分为对照组(正常培养)、模型组(过氧化损伤)、中药组(丹参酚酸B干预)和沉默组(miR-210基因沉默+中药干预组)。采用过氧化氢诱导细胞过氧化损伤模型,LipofectamineRNAi MAX脂质体法转染miR-210-3P inhibitor诱导miR-210基因沉默,丹参酚酸B给药浓度是10-5mol/L。qRT-PCR法检测细胞miR-210、血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平,荧光标记免疫组化法检测CD31分子的表达,ELISA法检测细胞液中内皮型一氧化氮合酶(eNOs)和内皮素-1(ET-1)的含量。结果:与对照组比较,模型组miR-210、VEGF和CD31分子的表达水平显著降低,细胞液中eNOs含量降低、ET-1的含量明显升高(P0.01或P0.001)。与模型组比较,中药组miR-210、VEGF和CD31分子的表达水平均显著升高,细胞液中eNOs含量升高、ET-1的含量明显降低(P0.001)。与中药组比较,沉默组miR-210、VEGF和CD31分子的表达水平均显著降低,但细胞液中eNOs和ET-1的含量差异无显著性(P0.001)。结论:丹参酚酸B能维持过氧化损伤HUVEC的血管新生功能和内皮收缩稳态,其促进血管新生作用被miR-210基因沉默阻断,维持收缩功能不被miR-210基因沉默所阻断,说明丹参酚酸B具有多靶点保护作用,miR-210是其作用靶点之一。     

丹参酚酸B调节缺氧损伤乳鼠心肌细胞TLR4-NFκB-TNFα炎性反应通路的量效时效关系研究

目的:探讨丹参酚酸B不同给药浓度和不同给药时间窗对缺氧损伤乳鼠心肌细胞TLR4-NFκB-TNFα炎性反应通路的调节作用。方法:分离纯化出生1~3 d Wistar乳鼠心肌细胞、建立体外缺氧细胞模型。丹参酚酸B(Sal B)大、中、小剂量浓度分别为10~(-5)mol/L、10~(-6)mol/L和10~(-7)mol/L并按照缺氧前6 h、缺氧同时和缺氧后6 h 3种给药方式进行干预。qRT-PCR法检测心肌细胞tool样受体4 (TLR4)和核因子κB(NFκB) mRNA的表达,细胞爬片免疫组化法检测TLR4和NFκB蛋白的表达,ELISA法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子α(TNFα)的浓度。结果:与正常组比较,缺氧模型组TLR4和NFκB mRNA和蛋白的表达量、细胞上清液中TNFα浓度均显著升高(P 0. 05或P 0. 01)。和缺氧模型组比较,丹参酚酸B预防给药和同时给药大、中剂量组TLR4和NFκB mRNA和蛋白的表达量、细胞上清液中TNFα的浓度均显著下降(P 0. 05或P 0. 01)。预防给药大剂量组下降最显著(P 0. 01)。结论:TLR4-NFκB-TNFα炎性反应通路在缺氧损伤6h即明显激活。SalB预防或同时干预对缺氧损伤的心肌细胞有明显的保护作用,该作用与抑制TLR4-NFκB-TNFα炎性反应损伤通路相关。SalB具有量效和时效性,以大剂量预防给药效果最佳。     

桂枝茯苓丸加味对子宫肌瘤模型大鼠的影响

目的研究桂枝茯苓丸加味对雌孕激素负荷法建立的子宫肌瘤大鼠模型的作用机制。方法将大鼠随机分为正常对照组、模型组、西药组、中药大剂量组、中药小剂量组及中药预防给药组。采用雌孕激素负荷法建立子宫肌瘤大鼠模型,观察桂枝茯苓丸加味对模型大鼠子宫组织形态学、血清及子宫雌激素受体(estrogen receptor,ER)和孕激素受体(progesterone receptor,PR)表达的影响,从而探讨桂枝茯苓丸加味治疗子宫肌瘤的作用机制。结果光镜下模型组大鼠子宫组织呈增生象改变。与模型组相比,中药大剂量组、中药小剂量组、中药预防给药组、西药组子宫湿重、子宫分角下直径均明显减小(P0.05);中药小剂量组、中药预防给药组分角最大横径也明显减小(P0.05)。中药小剂量组、中药预防给药组血清ER水平明显下降(P0.05);中药大剂量组、中药小剂量组、中药预防给药组子宫组织ER表达均显著下降(P0.05);中药小剂量组、中药预防给药组子宫组织PR表达均显著下降(P0.05)。结论桂枝茯苓丸加味通过减少ER、PR的表达,以降低子宫组织对雌孕激素的敏感性,从而达到拮抗子宫肌瘤增生,治疗子宫肌瘤的目的。     

小站台水环境应激不同时间对小鼠胸腺细胞凋亡的观察

目的探讨小站台水环境应激不同时间对小鼠胸腺细胞的破坏及凋亡的影响。方法利用小站台水环境诱发的应激模型，观察应激12h、24h、48h组和对照组在站台前后体重、胸腺重量、胸腺指数的变化以及胸腺细胞凋亡的状况。结果站台前后小鼠体重改变与对照组相比差异无显著性（P〉0．05），但有降低趋势，应激48h组胸腺重量、胸腺指数改变与对照组相比有极为显著性（P〈O．001），而应激24h组、12h组无显著性（P〉O．05），应激48h、24h、12hAnnexin-v凋亡蛋白增加与照组相比差异极为显著性（P〈O．001），应激12h出现TFAR19蛋白的百分率为96％左右，与对照组相比有极显著性（P〈0．001）．结论小站台水环境应激不同时间都可促进胸腺细胞的凋亡。     

美替拉酮阻断下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴及加味逍遥丸对慢性心理应激小鼠免疫系统的影响

目的探讨美替拉酮阻断下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴(hypothalamic-pituitary-adrenalcortexaxis,HPAA)对慢性心理应激小鼠免疫器官和细胞免疫功能有无保护作用,以及加味逍遥丸调节慢性心理应激损伤的作用是否与下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴相关。方法将小鼠随机分为生理盐水对照组、加味逍遥丸对照组、美替拉酮对照组、美替拉酮合用加味逍遥丸对照组、生理盐水应激组、加味逍遥丸应激组、美替拉酮应激组、美替拉酮合用加味逍遥丸应激组。其中对照组小鼠不予以应激刺激,应激组小鼠采用电刺激条件反射箱诱导建立慢性心理应激模型。检测各组小鼠体质量、血清糖皮质激素水平、胸腺指数、胸腺细胞凋亡率、脾脏自然杀伤细胞活性及淋巴细胞转化率,并观察小鼠胸腺组织病理学改变。结果各应激组与其相对应的非应激对照组比较,其胸腺指数明显下降,自然杀伤细胞活性及淋巴细胞转化率均明显下降;同时,胸腺细胞凋亡率升高,胸腺组织病理损伤加重。美替拉酮及加味逍遥丸应激组与生理盐水应激组比较,其血清糖皮质激素含量明显下降,自然杀伤细胞活性及脂多糖刺激的淋巴细胞转化率明显升高,胸腺组织病理损伤减轻。美替拉酮合用加味逍遥丸应激组与单纯的美替拉酮或加味逍遥丸应激组各项指标比较,均无明显差异。结论阻断HPAA对慢性心理应激小鼠的免疫系统有明显的保护作用。加味逍遥丸对慢性心理应激小鼠的保护作用与美替拉酮阻断HPAA的效应基本一致,两者无叠加、协同效应。推测HPAA是加味逍遥丸抗应激损伤的作用靶点之一。     

电针“次髎”穴对逼尿肌反射亢进大鼠骶髓排尿中枢c-fos表达的影响

目的:探讨电针次髎对逼尿肌反射亢进的效应及作用机制。方法:成年雌性SD大鼠44只,脊髓横断术后纳入37只,分为假手术组5只、模型组16只、电针组16只。电针组于大鼠出现尿失禁后给予电针双侧"次髎",每日1次,每次2h,共治疗14次。于治疗前后进行尿流动力学检测,于末次治疗后用免疫组化染色法观察骶髓排尿中枢原癌基因c-fos表达的情况。结果:逼尿肌反射亢进大鼠的最大膀胱内压较假手术组升高(P0.05),最大膀胱顺应性降低(P0.05),骶髓排尿中枢c-fos表达增多(P0.05)。治疗后,电针组的最大膀胱内压明显降低(P0.05),最大膀胱顺应性明显升高(P0.05),骶髓排尿中枢c-fos表达较模型组减弱(P0.05)。结论:电针"次髎"穴能抑制脊髓横断大鼠的膀胱活动过度状态,可以降低骶髓排尿中枢c-fos的表达,表明C纤维活动减弱,这可能是电针"次髎"治疗逼尿肌反射亢进的机制之一。     

沙棘与疏肝理气及清热利湿方配伍对脂肪肝大鼠的防治作用

目的:探讨沙棘分别与逍遥散及二妙散配伍对实验性脂肪肝大鼠的防治作用.方法:大鼠随机分为5组:正常组(N)、模型组(M)、西药(东宝肝泰)组(D)、沙棘配逍遥丸组(SA)、沙棘配二妙散组(SB),每组10只.正常组基础饲料喂养,其余各组高脂饲料喂养8wk后行药物干预,并继续高脂每日加250mL/L乙醇12mL/kg,ig,1mo后观察进食量、体质量、肝脾指数、用药前后血清总胆固醇(CHO,mmol/L)、三酰甘油(TG,mmol/L)、低密度脂蛋白(LDL, mmol/L)、极低密度脂蛋白(VLDL,mmol/L),高密度脂蛋白(HDL,mmol/L)及肝脏病理改变.结果:高脂喂养2mo和药物干预后.与N组相比,M组大鼠体质量增长加快,CHO,TG,LDL和VLD明显升高,HDL明显下降;与M组相比,SA和SB组大鼠进食量减少、TG和VLDL下降(TG:3.9±0.2,4.0±O.1vs5.4±0.3;VLDL:2.4±0.1,2.7±0.1vs 3.1±0.2,P＜0.05),D组TG下降(3.3±0.5vs5.4±0.3,P＜0.05).肝脏病理方面,M细肝细胞呈广泛的气球样变,SA和SB组均能明显减少病变的肝细胞数和减轻病变程度.结论:沙棘与逍遥散及二妙散配伍对肝脏损伤有保护作用,以沙棘与逍遥散配伍防治作用更好.