新型雌激素受体β信号通路调节因子的分离及鉴定

目的：利用酵母双杂交技术筛选与ERβ相互作用的蛋白，为进一步研究ERβ的功能奠定基础。方法：从乳腺cDNA文库中钓取ERβ-AF1 cDNA，构建诱饵蛋白载体pAS2-1-ERβ—AF1，利用酵母双杂交筛选技术，在乳腺cDNA文库中筛选与ERβ-AF1相互作用的蛋白。将含有pACT2-候选基因的酵母菌与含有pAS2—1-ERp—AF1的酵母菌进行交配实验，利用LacZ报告基因检测ERβ—AF1与候选蛋白之间是否存在相互作用。然后将ERp—AF1和候选蛋白分别构建到pGEx-KG和pET-28a上，并纯化GST-ERβ-AF1和His-侯选蛋白融合蛋白，利用GST沉淀实验进一步验证ERβ-AF1和候选蛋白的体外相互作用。结果：所获取的候选蛋白为CTGF，是CCN多肽家族成员。交配实验表明，CTGF与ERβ-AF1特异相互作用，而不与空载体或BRCT1对照相互作用。GST沉淀实验进一步验证，CTGF与ERβ、ERα均存在相互作用，但与CTGF同源性较高的NOV蛋白却不与ERβ、ERa结合。结论：CTGF和ERβ存在特异的相互作用。     

聚合酶链反应检测患儿尿标本中的巨细胞病毒DNA

本文建立了聚合酶链反应(PCR)检测人巨细胞病毒(HCMV)方法,探讨了该方法的某些实验条件。用PCR检测24例临床患儿尿标本。证明PCR方法特异、敏感、简便而快速。同科不同属病毒如HSV、EBV等以及人源正常细胞均无假阳性结果:最小检出量可达0.1fg DNA,相当于6个基因拷贝;用水浴箱手控时间即可进行PCR循环,30次循环仅需97min30s;PCR和DNA杂交检测尿标本中HCMV阳性例数分别为20和14例。该结果证明HCMV感染儿童的广泛性和严重性,初步表明儿童肾病综合症与HCMV有关。     

霍乱毒素B亚基融合蛋白表达载体的构建

霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴ－Ｂ）具有很强的免疫原性。口服时，在宿主小肠内ＣＴ—Ｂ与神经节苷脂ＧＭ１结合，能够激发机体产生粘膜免疫球蛋白Ａ（ＳＩｇＡ）和全身免疫球蛋白Ｇ（ＩｇＧ）。近几年的研究表明，ＣＴ－Ｂ还能辅佐其他抗原刺激机体产生ＳＩｇＡ，具有免疫佐剂作用。ＣＴ－Ｂ亚基被认为是亚单位疫苗和肽苗的良好载体。在研制预防霍乱和大肠杆菌腹泻的新型口服多价疫苗中，已经注意利用ＣＴ－Ｂ的Ｌ述特性。本研究通过ＰＣＲ技术定点突变，在ＣＴ－Ｂ基因３’端终止密码子处进行两个碱基的突变，消除了转译终止密码子并引入了限制性…     

rBS-WC霍乱疫苗的动物免疫研究

rBS与WC联合免疫比单纯免疫效果好;小鼠或家兔的免疫间隔适当缩短未见影响免疫保护力;小鼠一次大剂量口服疫苗后可获良好保护.rBS-WC抗原、吸附霍乱类毒素疫苗(上海苗)和吸附霍乱疫苗(武汉苗)经家兔肌肉免疫,武汉苗未见抗CT反应,对cT攻击无保护,对Eltor(小川)活菌攻击保护较弱;上海苗抗CT反应比rBS-WC低.家兔口服rBS-WC半年后,抗CT及杀弧菌抗体维持较高水平,显示其动物免疫的持久性.     

逆向疫苗学及其研究进展

基于基因组的疫苗研发途径被称为逆向疫苗学，它不仅省时、经济，而且可为传统方法难于或根本无法开展的疫苗研究提供新的解决方法。逆向疫苗学的研究过程始于硅片，用计算机预测疫苗的所有抗原。不依赖于抗原是否丰富，也不需要微生物是否能够体外培养。本文介绍逆向疫苗学的概况。特别是近年来在研制某些病原茵新疫苗方面的进展。     

以成纤维细胞作为饲养层供角朊细胞生长

体外角朊细胞培养已有多年的历史，随着人们对角朊细胞(Keratinocyte，KC)生长状况、结构功能及生物学特性的不断了解，培养技术日趋完善。比较成熟的是以NIH3T3细胞作为饲养层，有血清培养法和无血清培养法，前者可以培养出整张细胞膜片用于临床；后者用于对KC特性的实验研究，但3T3细胞作为异种细胞，存在伦理学问题及潜在的危害，因此本研究用成纤维细胞作为饲养层培养KC，旨在观察其促贴壁、生长和分化作用，为临床提供理论依据。     

医院内感染及其控制的研究进展

日趋严重的医院内感染,已成为全球性公共卫生中的一个重要问题。目前许多国家发生医院内感染的病例占入院病人的2～5%。在内科,约有四分之一的死亡病例与院内感染有关,在外科和重症监护病房,约有一半的死亡病例与医院内感染有关。由于医院内感染所造成的经济损失,美国每年大约是10亿美元(还不包括由     

提高尿激酶原治疗急性心肌梗死疗效研究

尿激酶原是新一代特异性溶栓药。为进一步提高该药的安全性和有效性,本文从使用剂量、给药方案、与其他溶栓药伍用,及给药途径等方面提出了意见,供临床医生使用中参考。     

用噬菌体表面展示技术筛选与肝癌细胞系结合的抗体模拟肽

目的:从噬菌体展示肽库中,筛选可与肝癌细胞特异性结合的抗体模拟肽。方法:通过生物淘选使噬菌体富集。利用ELISA法,鉴定噬菌体单克隆原种的亲和性,并进行统计学分析。通过竞争ELISA,分析筛选所得抗体模拟肽的结合位点,并进一步分析抗体模拟肽的序列组成。结果:随着淘选次数的增加,出现噬菌体的富集。ELISA的结果显示,相对于正常肝细胞,筛选所得环状7肽对肝癌细胞系SMMC7721和BEL7402均有良好的结合活性(P<0.05),且与SMMC7721细胞的结合活性明显优于与BEL7402细胞的亲和性(P<0.05)。在α=0.01的水平上,7肽单克隆噬菌体原种可明显与scFv竞争结合SMMC7721细胞(0.005相似文献   

MBL基因不同单倍体型启动活性的差异研究

甘露糖结合凝集素（mannose-binding lectin，MBL）是Ca^2＋依赖型（C型）凝集素家族一员，是固有免疫系统的重要成员。血清MBL水平低下导致调理吞噬缺损，使机体易患感染性疾病，还可明显加重疾病的症状，影响病程和转归。