羟基积雪草苷对离体动脉条的舒张作用及其机制

目的 探讨羟基积雪草苷(madecassoside,MC)的舒张血管作用及其机制.方法 采用离体大鼠胸主动脉张力实验观察MC的舒张血管作用.结果 MC使去甲肾上腺素(NE)和氯化钾(KCl)收缩动脉条的量效曲线右移,最大收缩力降低;并对NE诱导的细胞内Ca2+释放所引起的收缩有明显的抑制作用;但去除血管内皮细胞后MC反而使动脉条收缩进一步增强;在有一氧化氮合酶(NOS)抑制剂存在的情况下,其抑制NE收缩的效应消失;对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)收缩动脉条的量效曲线无明显影响.结论 MC有明显的舒张血管作用,表现为钙拮抗活性,以抑制细胞内Ca2+释放为主;且通过内皮细胞发挥作用,并与一氧化氮(NO)合成通路有密切的关系.     

新型雌激素受体β信号通路调节因子的分离及鉴定

目的：利用酵母双杂交技术筛选与ERβ相互作用的蛋白，为进一步研究ERβ的功能奠定基础。方法：从乳腺cDNA文库中钓取ERβ-AF1 cDNA，构建诱饵蛋白载体pAS2-1-ERβ—AF1，利用酵母双杂交筛选技术，在乳腺cDNA文库中筛选与ERβ-AF1相互作用的蛋白。将含有pACT2-候选基因的酵母菌与含有pAS2—1-ERp—AF1的酵母菌进行交配实验，利用LacZ报告基因检测ERβ—AF1与候选蛋白之间是否存在相互作用。然后将ERp—AF1和候选蛋白分别构建到pGEx-KG和pET-28a上，并纯化GST-ERβ-AF1和His-侯选蛋白融合蛋白，利用GST沉淀实验进一步验证ERβ-AF1和候选蛋白的体外相互作用。结果：所获取的候选蛋白为CTGF，是CCN多肽家族成员。交配实验表明，CTGF与ERβ-AF1特异相互作用，而不与空载体或BRCT1对照相互作用。GST沉淀实验进一步验证，CTGF与ERβ、ERα均存在相互作用，但与CTGF同源性较高的NOV蛋白却不与ERβ、ERa结合。结论：CTGF和ERβ存在特异的相互作用。     

分子靶标与癌症治疗的进展

2003年在波士顿召开的分子靶标与癌症治疗的专题讨论年会主要集中在癌症相关分子靶标及选择性癌症治疗药物的发现和开发等领域。     

抗心肌缺血药物的作用靶点

缺血性心脏病严重危害人类健康,一直是医学界研究的热点.本文主要介绍与心肌缺血相关的几个药物的作用靶点:离子通道相关靶点、内皮素受体、转录调节因子、L-精氨酸一氧化氮途径以及肾素-血管紧张素系统等.     

抗心肌缺血药物的作用靶点

缺血性心脏病严重危害人类健康,一直是医学界研究的热点。本文主要介绍与心肌缺血相关的几个药物的作用靶点:离子通道相关靶点、内皮素受体、转录调节因子、L-精氨酸一氧化氮途径以及肾素-血管紧张素系统等。     

FHL2抗体的制备及其在癌细胞和组织中表达的检测

目的:制备FHL2特异性的多克隆抗体,并检测FHL2在癌细胞和组织中的表达。方法:在大肠杆菌中融合表达GST-FHL2蛋白,纯化后免疫小鼠,制备多克隆抗体。采用Western blot检测抗体的特异性,并检测FHL2在乳腺癌细胞、肝癌细胞和小鼠组织中的表达。结果:获得了可特异识别FHL2,而不识别FHL家族其他成员的多克隆抗体;FHL2蛋白在乳腺癌和肝癌细胞株中表达;FHL2在心脏、肌组织、乳腺、前列腺和肝脏组织中都有表达。结论:成功地得到可特异识别FHL2的多克隆抗体,且发现FHL2在癌细胞和更广泛地正常组织中都有表达,为进一步研究FHL2在凋亡、癌变、分化等生命过程中的功能奠定了基础。     

一种含多个CCP结构域的新型基因的克隆及生物学特性初探

目的克隆并分析新型基因CCP22，研究其结构及初探生物学特性。方法常规分子克隆、生物信息学分析、Western blot、RT—PCR。结果利用酵母双杂交技术从人乳腺文库中分离到一种含有22个补体调控蛋白（complement control protein，CCP）序列元件的新基因，命名为CCP22。生物信息学分析发现，该基因定位于人染色体9q31．2-32，共15个外显子，基因编码序列全长4494bp，编码1497个氨基酸。将CCP22基因全长编码序列克隆于真核载体中，该表达载体转染人胚肾细胞293T后获得的表达产物经Western blot证实CCP22属于分泌蛋白。将CCP22与绿色荧光蛋白（EGFP）标签融合后证实CCP22主要分布在细胞核外。Northern blot证实，内源性CCP22 mRNA转录本全长约6kb。RT-PCR检测表明，CCP22在正常乳腺细胞株中高表达，而在多种乳腺肿瘤细胞株中不表达或低表达。结论CCP22在乳腺肿瘤发生发展中可能发挥重要作用。     

药物筛选技术的研究进展

药物筛选是药物发现的主要手段之一，近年来在药物筛选的技术方面发展迅速。本文综述了药物筛选中药靶的发现、化合物样品的选择、超高通量药物筛选技术、高信息量筛选、药代动力学和毒性的高通量筛选、数据分析等方面的进展。     

二咖啡酰奎宁酸对大鼠肝原代细胞保护作用的研究

目的　采用肝原代细胞培养及四氯化碳损伤法 ,观察 1 ,5 二 O 二咖啡酰奎宁酸对肝细胞的保护作用 ,并通过体外实验初步探讨二咖啡酰奎宁酸保护肝细胞的作用机制。方法　采用肝细胞消化酶两步灌注法 ,肝细胞消化液消化肝细胞 ,梯度离心分离肝细胞 ,细胞获得量为 (1 - 1 0 )× 1 0 7·ml-1 ,肝细胞活力在 90 %以上 ,以此为靶细胞。并利用四氯化碳损伤方法制造肝细胞损伤模型。分别采用3 H -胸腺嘧啶 (3 H -TdR) ,3 H -脯氨酸 (3 H -Pro)掺入 ,流式细胞术等方法 ,观察二咖啡酰奎宁酸对肝细胞的增殖、活力、凋亡及细胞周期等的影响 ,并测定天门冬氨酸转移酶活性。结果　二咖啡酰奎宁酸在 7.8～ 2 5 0mg·L-1浓度对肝细胞无明显毒性作用 ,能促进正常及四氯化碳损伤的肝细胞增殖及增强细胞活力 ,降低细胞上清的天门冬氨酸转移酶 (AST)活性 ,抑制四氯化碳引起的肝细胞凋亡以及改变受损细胞周期。结论　二咖啡酰奎宁酸具有显著的肝细胞保护作用 ,其作用机制为促进肝细胞的增殖及活力 ,抑制受损肝细胞的凋亡 ,并可明显降低天门冬氨酸转移酶水平     

衰老的免疫机理研究进展

在众多衰老发生机理的学说中,衰老的免疫学理论占据重要位置。免疫系统的衰退比较典型地反映了大多数哺乳动物(包括人类)的老化过程。本文从细胞、分子水平介绍了近年衰老免疫学的研究进展。