菊花脑芳樟醇合酶基因CnTPS1的克隆与原核表达分析＊

目的 克隆菊花脑芳樟醇合酶基因CnTPS1的全长编码序列，利用原核系统表达融合蛋白，为进一步研究该基因在菊花脑萜类合成中的功能提供理论依据。方法 以菊花脑基因组数据为基础，设计特异性引物，PCR扩增CnTPS1的全长编码序列，利用生物信息学分析软件分析序列特征。利用qRT-PCR技术分析CnTPS1基因在不同组织中的基因表达量。构建原核表达载体，体外诱导目的蛋白表达。结果 CnTPS1编码序列全长1749bp，编码582个氨基酸；基因表达模式分析表明该基因在茎和管状花中表达量较高；原核表达系统能诱导出67.58kDa大小的蛋白。结论 首次从菊花脑中克隆得到一个芳樟醇合酶基因CnTPS1，运用生物信息学方法对其编码蛋白的理化性质、结构特征等进行了分析预测，分析了该基因的组织表达模式，并在原核表达系统中成功诱导表达出目标蛋白，这些结果将为菊花脑萜类合酶基因的功能以及萜类物质生物合成途径的解析提供理论依据。     

大花胡麻草环烯醚萜合酶基因的克隆与表达分析

目的克隆大花胡麻草环烯醚萜合酶基因(CgIS),并进行表达分析。方法以大花胡麻草根、茎、叶转录组中唯一的CgIS基因序列为基础,采用RT-PCR技术从大花胡麻草幼叶克隆CgIS基因,并进行组织特异性表达分析。结果大花胡麻草CgIS基因(GenBank登录号MH794270)全长1 185 bp,编码394个氨基酸;CgIS蛋白相对相对分子质量44 670,理论pI为6.17;该蛋白属于孕酮5β-还原酶(P5β-R)家族成员,可能定位于细胞质;该蛋白无信号肽,为亲水稳定蛋白,主要由α-螺旋(40.61%)和无规则卷曲(46.70%)构成;该蛋白具有SDR(短链脱氢酶/还原酶)和P5βR蛋白保守结构域;CgIS蛋白与芝麻SiIS蛋白亲缘关系最近;CgIS基因主要在叶中表达。结论克隆了CgIS基因,并对其进行表达分析,为进一步研究该基因的功能和环烯醚萜类的生物合成途径奠定基础。     

新型冠状病毒肺炎之中医病因病机及预防治疗概述

目的:通过对新型冠状病毒肺炎致病特点、临床症状的分析,试述新型冠状病毒肺炎中医病因、病机及预防治疗,以期对本病的诊疗提供科学思路。方法:通过对《温病学》的复习、历代医家诊治"疫病"经验的分析、国家卫健委发布诊疗方案以及疫区专家文献报道的总结,结合自己的感悟,对本病的病因、病机及预防治疗的要点进行初步论述。结果:新型冠状病毒肺炎具有流行性、传染性、地域性、家庭聚集的特点。本病早期主要有身热不扬、乏力、恶心、呕吐、腹胀、便溏、肢体困重酸痛、舌苔厚腻等湿邪过重的表现,符合"湿毒疫"范畴。患者的首发症状表现为呼吸道症状和消化道症状,和肺、脾胃关系密切。本病的病情进展符合卫气营血传变规律。结论:新型冠状病毒肺炎属于中医"湿毒疫"的范畴,"湿毒"为主要致病病因,肺、脾胃为主要病位。闭肺困脾、壅滞气机、湿毒化热是主要病机,避毒护正是主要预防原则,首重祛邪、重视护正、防传变是治疗的关键。     

人参、白术有效组分群对慢性萎缩性胃炎大鼠口腔、肠道菌群的影响

目的研究人参、白术有效组分群对慢性萎缩性胃炎大鼠口腔、肠道菌群的影响。方法将大鼠随机分为空白组、模型组、给药(人参白术有效组分群)组,用主动免疫法复制慢性萎缩性胃炎模型。HE染色、扫描电子显微技术观察胃黏膜组织显微及超微结构,高通量测序技术检测肠道及口腔菌群,利用SPSS软件进行相关性分析。结果人参、白术有效组分群能改善慢性萎缩性胃炎大鼠胃组织病理形态(P<0.05);增加大鼠肠道、口腔菌群多样性及丰富度(P<0.05);减少肠道、口腔中致病菌群(普雷沃氏菌科_UCG-003、梭杆菌属)的数目(P<0.05)。其中,大鼠病理学评分与其口腔、肠道菌群的丰度、多样性以及门、属水平上的差异菌具有相关性(P<0.05)。结论人参、白术有效组分群对慢性萎缩性胃炎大鼠有良好的保护作用,缓解胃黏膜萎缩,其作用机制可能与改善肠道和口腔菌群有关。     

丹参F3'5'H基因克隆及其序列分析

目的:为了验证丹参类黄酮-3′,5′-羟基化酶(Flavonoid 3′,5′-hydroxylase,F3′5′H)基因与丹参花色表型的相关性,本研究克隆并分析了紫花丹参99-3株系和一些白花丹参中的F3′5′H基因。方法:本研究通过提取紫花丹参和白花丹参中的总RNA,再将其反转录得到cDNA,以此cDNA为模板,利用PCR方法扩增获得F3′5′H基因全长序列。再利用生物信息学分析方法,分析了该基因编码蛋白质的理化性状、结构域、系统进化等特点,并预测了该蛋白质的亚细胞定位、跨膜区等;利用实时定量PCR方法检测了该基因的表达特异性;利用毛状根遗传转化方法获得了该基因的过表达阳性毛状根株系。结果:F3′5′H基因全长1551 bp,编码516个氨基酸,相对分子质量为57.4 kDa。该基因在丹参花中高丰度表达。在42份(紫花25份;白花17份)丹参样品中发现一个单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNP)位点在紫花和白花丹参中呈现与花色相关的稳定变化。系统发育分析表明丹参F3′5′H与美女樱的F3′5′H具有较高序列同源性。获得了过表达F3′5′H的毛状根株系。结论:本研究在丹参中克隆到F3′5′H基因,对其序列进行了分析,为进一步研究丹参F3′5′H基因的功能奠定基础。     

Ⅰ、Ⅱ型剖宫产瘢痕部位妊娠患者清宫术后应用Foley导尿管联合垂体后叶素对出血量和安全性的影响研究

目的分析Foley导尿管联合垂体后叶素应用于Ⅰ、Ⅱ型剖宫产瘢痕部位妊娠(CSP)清宫术后对出血量及安全性的影响。方法70例Ⅰ、Ⅱ型剖宫产瘢痕部位妊娠患者,随机分为观察组与对照组,各35例。两组患者术前均给予甲氨蝶呤局部注射,随后在B超引导下行清宫术,术毕均给予宫颈注射垂体后叶素,研究组术后宫腔放置Foley导尿管压迫止血治疗,对照组术后给予口服米索前列醇片治疗。比较两组患者术后2、12及24 h阴道流血量,术后感染率、月经恢复时间。结果研究组术后2、12、24 h阴道流血量分别为(42.5±6.8)、(52.4±6.7)、(61.8±5.4)ml,均少于对照组的(98.5±11.8)、(102.1±7.0)、(125.1±8.7)ml,差异具有统计学意义(P<0.05)。研究组术后感染率5.71%低于对照组的8.57%,月经恢复时间(43.4±6.2)d短于对照组的(45.7±8.7)d,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论针对行清宫术的Ⅰ、Ⅱ型剖宫产瘢痕部位妊娠患者术毕注射垂体后叶素、术后宫腔放置Foley导尿管,能够有效止血,大大减少术后阴道出血量,且操作简单、安全有效,应用推广价值高。     

白芍与赤芍种质问题探讨

白芍与赤芍均来源于芍药Paeonia lactiflora Pall.，通常认为加工方法是导致2种药材功效差异的本质原因，仅根据加工方法而不考虑药材种质，就会出现药材的性状、活性成分含量不能很好吻合药材的质量标准。芍药具有丰富的遗传多样性，从白芍和赤芍的本草考证、种质差异及药材化学成分差异的影响3个方面阐明了白芍和赤芍药材的种质存在的差异，白芍应为古人从野生芍药中选育出的栽培品种P.lactiflora ′Baishao′。白芍与赤芍基原问题的澄清可为优质药材生产提供参考。