儿童新型冠状病毒感染诊断、治疗和预防专家共识(第二版)

自2019年12月新型冠状病毒感染暴发以来,我国政府采取了严格的防控措施,国内疫情已得到初步控制,但形势依然严峻,境外多个国家也相继出现疫情。根据世界卫生组织的报告:截至2020年3月5日,全球共报告95333例确诊病例(其中我国累计报告确诊病例80565例),85个国家有确诊病例报告,中国将面临输入性病例的传播风险,这为防治我国儿童的疾病疫情提出了新的挑战[1]。在这次疫情中,与成人病例相比,儿童病例相对较少、症状轻、预后较好。目前国内病例数据显示,18岁以下儿童占所有报告病例的2.4%,尚无死亡病例报告[2]。     

非编码RNA相关重大疾病发病机制和生物标志物筛选的研究进展

人类重大疾病因其复杂性给诊断和治疗带来巨大难题,而且一些疾病属于慢性疾病,长期治疗无疑会加重患者负担。非编码RNA是指不编码蛋白质,但是参与基因调控的RNA分子,其在基因转录、基因转录后以及翻译水平发挥重要的调控作用。近年来,研究发现,非编码RNA在相关重大疾病中有抑制或促进的作用,其异常表达与许多疾病相关。重大疾病相关非编码RNA机制的探究以及生物标志物的发现给复杂病理研究带来希望。该文就非编码RNA中的微RNA(miRNA)和长链非编码RNA(lncRNA)参与不同发病机制,以及疾病的非编码RNA生物标志物相关研究进行综述,并对其今后研究方向进行展望。     

大规模并行基因组测序技术应用于无创产前诊断染色体非整倍体的研究

目的利用大规模并行基因组测序技术检测孕妇外周血浆中的游离DNA,行胎儿染色体非整倍体的无创产前诊断。方法选择2009年1月到2010年7月在深圳市人民医院产前诊断中心就诊,孕龄在8～30周之间高龄妊娠、唐氏综合征生化筛查高风险和(或)彩超显示胎儿异常等同意介入产前诊断的孕妇941例,抽取孕妇外周静脉血,提取血浆DNA,制备测序文库,应用Illumina HiSeq2000高通量基因测序仪检测,测得的基因序列与人类的参考基因组比对并作统计分析。同时采集胎儿羊水或脐血,经细胞培养后行羊水或脐血细胞染色体核型分析确定染色体非整倍体。结果①941例孕妇血浆样本处理后经大规模并行基因组测序技术检测判定胎儿为唐氏综合征高风险共27例,非唐氏综合征914例;以羊水或脐血染色体核型分析的结果为金标准进行结果对照,检测出的27例唐氏综合征高风险中2例误诊,其中一例核型为47,XXY,一例核型分析正常。经统计分析胎儿唐氏综合征的检出率为100%,检出正确率99.78%,误诊率0.22%;②941例样本中,检出18-三体高风险14例,18-三体低风险927例。与染色体核型分析相比,统计分析显示无创产前基因检测18-三体胎儿的检出率为93.33%(14/15),漏诊率为6.67%(1/15)、误诊率为0。结论利用大规模并行基因组测序技术检测孕妇外周血浆中的游离DNA行无创产前诊断胎儿染色体非整倍体,其敏感性、特异性与染色体核型分析技术具有较高的一致性。该技术具有无创性、高准确性、高通量等优势,具有临床实际应用价值。     

microRNA在肾脏疾病和生理中的研究进展

慢性肾脏疾病(CKD)与主要的非传染性疾病(如糖尿病和高血压)密切相关。微RNA(miRNA)是一类内源性有调控作用的非编码RNA,它们在肾脏发育、平衡和疾病中扮演重要角色。特别是在各种CKD的发展中,miRNA的表达与肾小管间质硬化和终末期肾小球病变发生相关。miRNA在基因中具有调控作用,其可能成为肾病的一种新的诊断标志物和治疗靶点。根据现有证据,miRNA可能与糖尿病肾病、IgA肾病、狼疮性肾炎、多囊肾病和移植排斥有关。     

蜂蜇伤战士血清相关蛋白分析

目的分析蜂蜇伤战士与正常人血清中蛋白质图谱之间表达差异。方法分别收集来源于解放军181医院于2008年10月—2010年2月收集的11例蜂蜇伤国防战士标本和8例健康人的血清标本进行双向凝胶电泳（2-DE）检测。通过基质辅助激光解析飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析鉴定蜂蜇伤患者的血清蛋白质中存在显著差异的蛋白质点。结果在蜂蜇伤战士的血清中存在5个新增蛋白质点,3个蛋白点上调,7个蛋白点下调,其中包括KRT10角蛋白Ⅰ型、KRT1角蛋白Ⅱ型、触珠蛋白相关蛋白、触珠蛋白HP、HPR蛋白、α2-巨球蛋白、β血影蛋白brain1。结论采用固相pH梯度2-DE分离鉴定血清蛋质组能够获得很好的实验重复性。蜂蜇伤患者与正常人血清存在差异表达蛋白,为进一步研究蜂蜇伤相关生物标记提供理论基础及指导。     

基因芯片用于检测β地中海贫血

目的 探讨基因芯片诊断β地中海贫血的方法。方法 抽提样品基因组DNA，经聚合酶链反应后，进行荧光标记及杂交，扫描芯片荧光信号图像，将分析的结果与原基因类型进行对照。结果 在40例被检样品中，正常个体4例，β地贫杂合子29例，双重杂合子或纯合子7例。结论 基因芯片法能同时快速、准确地筛查多种β地中海贫血。     

超重和肥胖人群血清脂联素水平与2型糖尿病的关系

目的研究血清脂联素水平与超重、肥胖及与血糖（PG）的关系。方法对深圳地区21～60岁人群共29799人进行BMI，腰围（WC），腰臀围比（WHR）及血糖检测，按BMI高低分成三大组：正常非肥胖（NC）组（BMI≤24）男10267人、女14268人；超重（OW）组（24〈BMI〈28）男2952人、女1800人；和肥胖（Ob）组（BMI≥28）男245人、女267人。Ob组按血糖水平又分为单纯肥胖（S-Ob）组（男190人，女216人）和2型糖尿病肥胖（T2DM-Ob）组（男55人，女51人）。调查三大组人群T2DM的患病率，分析BMI、WC、WHR与T2DM的关系，并测定各组人群的血清脂联素水平。结果T2DM的患病率在NC组男性和女性分别为32‰和35‰；在OW组的男性和女性分别为126‰和106‰；在肥胖组的男性和女性分别为225‰和191‰。T2DM的患病率在男性WC〉85cm者显著高于WC≤85cm者，在女性，WC〉80cm者显示高于WC≤80cm者（P均〈0．01）。血清脂联素浓度在Ow组、Ob组及T2DM—Ob组均显著低于NC组（P=0．000）。在T2DM—Ob患者中，脂联素浓度与BMI、WC、WHR、PG呈显著负相关。结论脂联素浓度变化可能与肥胖及糖尿病密切相关。保持BMI和WC在正常范围，是预防糖尿病发生的有效措施之一。     

血清AMH检测在多囊卵巢综合征中的应用价值研究

目的探讨血清抗缪勒管激素(AMH)检测在多囊卵巢综合征(PCOS)诊断中的应用价值。方法选取2017年1月至2018年6月经临床诊断为多囊卵巢综合征患者206例,简称为研究组;其中雄性激素睾酮(T)浓度≤75ng/dL患者130例,简称为研究组A;雄性激素睾酮(T)浓度75ng/dL患者76例,简称为研究组B。同期在健康管理中心招募206例女性为对照组,利用统计学软件分析多囊卵巢综合征患者和健康人群的AMH检测结果。结果研究组AMH浓度明显高于对照组,研究组B的AMH浓度明显高于研究组A,差异均有统计学意义(P0.05);研究组AMH浓度与睾酮浓度呈正相关性,相关系数r=0.171且P0.05;ROC曲线分析AMH诊断PCOS患者的线下面积为0.776,面积标准误为0.028,差异有统计学意义(P=0.000),以AMH浓度6.19ng/mL为PCOS诊断界值时,灵敏度为69%,特异度为71%。结论多囊卵巢综合征患者血清中AMH浓度显著升高,血清AMH浓度检测对多囊卵巢综合征的临床诊断有一定价值。     

基于CRISPR/Cas9技术构建人CLCN7基因编辑载体

目的为修复石骨症致病基因(CLCN7)进行前期探索,采用CRISPR/Cas9技术构建CLCN7基因编辑表达载体。方法根据sgRNA设计原则,在CLCN7外显子区设计一对sgRNA,合成四条单链DNA寡核苷酸,退火后连接于CRISPR/Cas9质粒的BspQ I酶切位点处,然后转染感受态大肠杆菌DH5α,并通过氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,扩大培养。结果最后经过PCR和Sanger测序鉴定获得了两个基因编辑表达载体CLCN7-sg1RNA-CRISPR-Cas9和CLCN7-sg2RNACRISPR-Cas9。结论基因编辑载体的成功构建为CLCN7突变修复提供了工作基础。