透射电镜观察p21HBHBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡

目的 观察p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡.方法 用透射电镜观察p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡的形态学改变.结果 细胞凋亡早期,细胞核染色体发生边集,核形不规整,核膜表面凹凸;凋亡中期,核内染色质凝聚,趋边呈月牙状,核膜孔消失,核膜呈波纹状皱缩;凋亡晚期,核固缩,细胞膜出芽形成小泡,可见凋亡小体.结论 p21HBsAg/HBsAg转基因小鼠肝癌细胞凋亡具有典型性病变特征,是研究HBV感染诱发肝癌发病机理的合适动物模型.     

封闭群比格犬遗传标志微卫星引物的筛选

目的筛选出有效的微卫星引物,利用微卫星遗传标志对封闭群内比格犬的个体遗传情况进行分析。方法从文献中筛选杂合度在0．4～0．8的微卫星引物24对,对本场英系比格犬封闭群中随机筛选出的12只比格犬的混合基因组进行了扩增。结果24对引物中,有7对微卫星引物的扩增结果具有较好的多态性和重复性。利用这7对引物,对8只玛斯公司美系比格犬的混合基因组进行了扩增,结果与本场英系比格犬的扩增结果具有明显的差异。又利用这7对引物对随机筛选出的6只比格犬的个体遗传情况进行了分析,其中3只比格犬表现出明显的差异。结论作者筛选的7对微卫星引物可以对本场比格犬种群的个体遗传情况进行初步分析。     

人工饲养恒河猴、食蟹猴的繁殖性能初报

目的 探索北京地区人工饲养恒河猴与食蟹猴的繁殖性能,为温带地区猕猴的人工饲养和繁殖方式提供借鉴.方法 对军事医学科学院实验动物中心饲养的317只恒河猴繁殖群(30只雄猴,287只雌猴)和78只食蟹猴繁殖群(8只雄猴,70只雌猴)近两年的繁殖性状进行观察和统计分析.结果 恒河猴母猴妊娠率、繁殖率和成活率分别为60.73%、54.45%和96.89%.食蟹猴母猴妊娠率、繁殖率和成活率分别为79.86%、56.12%和75.00%.结论 食蟹猴和恒河猴可以成功的在温带地区饲养和繁殖,但人工饲养食蟹猴的妊娠率与产仔率较恒河猴高,而仔猴成活率则低于恒河猴.     

比格犬一种新雌激素β受体可变剪切体的克隆及鉴定

目的对比格犬雌激素β受体的新剪切体进行克隆与鉴定。方法以比格犬垂体组织为模板,用RT-PCR方法从垂体组织中扩增雌激素β受体,电泳确定新剪切体的存在情况.并对其进行克隆和序列测定.结果利用设计的引物得到2条明显电泳条带,通过测序表明其中一种为新的可变剪切体,目前此可变剪切体尚未见报道。结论得到了雌激素β受体的一种新的可变剪切体,有助于研究雌激素β受体可变剪切体的功能及其在生殖调控过程中的作用。     

比格犬雌激素β受体RNA干扰实验细胞及PCR检测引物的筛选

目的筛选用于比格犬ERβ基因RNA干扰实验的细胞和检测所用引物。方法根据比格犬ERβ氨基末端区域和DNA结合区设计三对引物,用阳性质粒筛选最佳引物应用于RNA干扰效果检测,并利用293T、Hela和vero细胞的cDNA验证该引物的特异性。对这三种细胞内人ERβ基因的存在情况也进行了检测。结果经过三次重复性实验之后,结果显示引物C36684扩增效率高,且没有非特异条带,该引物对293T、Hela和vero细胞cDNA扩增时同样没有非特异性条带,但293T细胞中存在人的ERβ基因。结论引物C36684用于检测RNA干扰效率,而Hela细胞则作为RNA干扰实验的细胞工具。     

比格犬ERβ剪切异构体ERβ419沉默表达载体的构建及筛选

目的构建最有效的慢病毒介导RNAi干扰序列,未来将应用于比格犬ERβ419的未知生物学功能的探索。方法模拟比格犬ERβ419靶细胞筛选针对目的基因mRNA设计的最佳干扰序列实验,通过qRT-PCR和Western Blot技术筛选最佳沉默表达载体序列。结果qRT-PCR结果显示,ERβ419-shRNA1(P0.01)和ERβ419-shRNA3(P0.01)的差异表达极显著,Western Blot结果与qRT-PCR结果一致,ERβ419-shRNA3的干扰效果最佳。结论 ERβ419-shRNA3最有效地抑制了目的基因的表达,未来将应用于探索比格犬ERβ419未知生物学功能对比格犬生殖系统影响的研究,并进而预防和治疗比格犬繁殖机能障碍性疾病。     

中国源恒河猴Mamu-B＊17等位基因的筛查

目的对本场中国源恒河猴Mamu-B＊17等位基因的存在情况进行筛查,为艾滋病动物模型的制备和疫苗效果的评价提供帮助。方法随机筛选07年出生的恒河猴101只,股静脉采取抗凝血200μL,提取基因组。根据Mamu-B＊17等位基因的特异性序列设计引物,利用序列特异性引物PCR（sequence specific primers polymerasechain reaction,PCR-SSP）筛查这101只恒河猴B＊17等位基因的存在情况。结果没有筛查到Mamu-B＊17阳性的恒河猴,与印度源恒河猴12%的存在率有很大的差异。     

小鼠Uncv基因克隆及真核表达

目的克隆小鼠的Uncv基因并在真核细胞表达。方法采用RT-PCR方法扩增小鼠皮肤组织中Uncv基因编码区,以真核表达质粒pcDNA 3.1-Flag为载体,构建Uncv真核表达质粒,将重组载体转染Hela细胞并用Western blot法检测基因表达。结果构建Uncv基因真核表达载体pcDNA 3.1-Flag/Uncv,重组质粒在Hela细胞中有效表达约95×10³的融合蛋白。结论成功构建真核表达载体pcDNA 3.1-Flag/Uncv,并且在真核细胞中有效表达,为研究Uncv基因生物学功能奠定基础。     

比格犬ERβ_(1293)基因真核载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达和定位

目的观察比格犬Myc标签ERβ1293重组真核表达载体在HEK293T细胞中的表达及定位。方法以pEGFP-N1-ERβ1293重组真核表达载体为模板,PCR保真酶扩增得到ERβ1293基因编码区全长。Myc标签ERβ1293重组真核载体瞬时转染HEK293T细胞,运用蛋白质印迹技术(Western blotting)和间接免疫荧光技术(indirect immunofluorescence,IF)鉴定pcDNA3.1-Myc-ERβ1293在HEK293T细胞中的表达和定位情况。结果成功构建pcDNA3.1-Myc-ERβ1293重组真核表达载体,转染至HEK293T细胞中。Western blotting检测有蛋白条带表达,共聚焦显微镜下观察IF处理后的转染细胞,荧光定位于细胞质。结论前期实验得到比格犬ERβ剪切异构体ERβ1293编码区序列,缺失第四外显子,导致其与配体结合能力减弱或消失,因此目的基因编码蛋白定位在细胞中发生变化。     

耐寒添加剂急性毒性和致突变性研究

寒冷是一种常见的应激原 ,它给日常生活带来诸多不便 ,影响人的作业效率 ,甚至对机体造成严重损害。为提高人员在寒冷条件下的御寒和适应能力 ,我们根据低温条件下物质代谢特点[1] ,以中药、维生素等为主要原料 ,研制了具有抗冷应激作用的耐寒添加剂。试验表明它能明显提高冷水中率小鼠的游泳时间 ,增加严寒条件下小鼠存活率 ,对皮质酮、甲状腺素及胰高血糖素有不同程度的影响。为评价其安全性 ,我们按《食品安全性毒理学评价程序和方法》的要求[2 ] ,进行了急性毒性和致突变性试验。1　材料与方法1 1　材料　耐寒添加剂 ,粉剂 ,由本单位提…