糖尿病肾病从络论治研究进展

糖尿病肾病（DKD）是糖尿病最主要的慢性并发症之一,已成为终末期肾病的最常见原因。目前西医治疗DKD仍缺乏有效的手段和方法,近年来,中医药从络论治DKD已成为焦点,积极探讨DKD的中医病名和病因病机,可以为中医药治疗糖尿病肾病提供理论依据,众多学者强调肾络损伤在DKD中的重要性,治疗上多采用分期结合分型辨证的治则治法,早期注重养气阴恢复肾脏气化功能,中期注重祛邪通络,晚期在通络的基础上注重顾护肾阳,填养肾精。     

预警哨鼠抗Sj23HD IgG抗体Western blot检测方法的改进及应用

目的改进检测预警哨鼠血清抗日本血吸虫23ku膜蛋白大亲水肽段（Sj23HD）IgG抗体的Western blot方法,并观察其现场应用价值。方法预先制备转印有重组si23HD蛋白的NC膜条,采用化学发光Western blot检测哨鼠血清抗sj23HD IgG,观察方法的稳定性和敏感性,并对2012年江苏省潜在血吸虫感染高风险水域监测预警哨鼠回收后第14、21、35d血样进行检测,同时以ELISA检测方法作为对照,对免疫检测结果与解剖查虫结果进行统计学分析。结果改进后的Western blot操作简便,比常规方法节省142周时间。预制NC膜条至少可低温保存6个月,其敏感性与新鲜制备的NC膜条的敏感性相似。使用改进后的Western blot方法检测预警哨鼠14、21和35d血清标本,阳性率分别为0．90％,3．50％和5．06％,ELISA阳性率分别为0．45％、3．00％和5．06％,差异无统计学意义（P〉0．05）。两种免疫学方法的敏感性均高于解剖查虫法。结论改进后的Western blot操作简便,敏感性高,可用于预警哨鼠血吸虫感染检测。     

诱导子对丹参毛状根酚酸类和丹参酮类成分积累的影响

目的:考察生物诱导子真菌菌丝提取物和非生物诱导子茉莉酸甲酯及二者协同作用对丹参毛状根酚酸类和丹参酮类成分积累的综合性影响.方法:在继代培养21 d的丹参毛状根中添加不同的诱导子及诱导子组合,分别测定不同收获期毛状根的生长量和两大类成分的积累量.结果:3种处理均显著抑制了丹参毛状根的生长,促进了隐丹参酮和二氢丹参酮Ⅰ的积累,但对酚酸类成分的积累却有不同的作用,茉莉酸甲酯可以促进酚酸类成分的积累,真菌诱导子在一定程度上抑制了酚酸类成分的积累.结论:真菌诱导子和茉莉酸甲酯以及二者协同作用对丹参毛状根不同成分的积累具有不同的影响,3种处理条件下水溶性成分的积累和脂溶性成分的积累基本不存在关联性.     

探讨青蒿琥酯和扶正化瘀方治疗血吸虫病肝纤维化对线粒体的影响

目的:比较青蒿琥酯(Art)和扶正化瘀方治疗血吸虫病肝纤维化对线粒体自噬的影响。方法:将80只C57BL/6雌性小鼠随机分为健康组、感染组、Art治疗组和扶正化瘀方治疗组,每组20只。感染组及治疗组小鼠感染日本血吸虫尾蚴16条。6周后,吡喹酮（300 mg/kg）2日疗法杀虫。Art治疗组采用每天100 mg/kg腹腔...     

基于恶性疟原虫PHIST特有基因的环介导等温扩增技术的建立与评价

目的建立基于编码恶性疟原虫PHIST蛋白特有基因的环介导等温扩增技术。方法在Plasmo DB数据库中,搜索并筛选编码PHIST、在环状体或裂殖体期高表达且恶性疟原虫特有的基因。利用在线软件Primer Explorer V4设计目的基因LAMP引物。采集恶性疟原虫滤纸血并提取基因组DNA。将提取后的恶性疟原虫DNA用超纯水进行10~(-1)、10~(-2)、10~(-3)、10~(-4)倍比稀释,用LAMP法检测其敏感性;采用间日疟原虫、约氏疟原虫、牛带绦虫和日本血吸虫基因组DNA作为对照,用LAMP法评价其特异性。结果共筛选出61个编码恶性疟原虫PHIST的基因。选取环状体期高表达的特有基因PF3D7_1372300和裂殖体期高表达的特有基因PF3D7_1401600建立LAMP技术。基于PF3D7_1372300和PF3D7_1401600基因的LAMP法检测恶性疟原虫的最低限度分别为130.5个/μl和1 305.3个/μl,所获得的恶性疟原虫扩增产物其检测管染色后呈绿色,即阳性。基于PF3D7_1372300和PF3D7_1401600基因的LAMP法扩增恶性疟原虫产物检测管染色后呈绿色,即阳性;而间日疟原虫、约氏疟原虫、牛带绦虫和日本血吸虫的LAMP扩增产物检测管染色后仍呈棕色,即阴性。结论基于PF3D7_1372300基因的LAMP法检测恶性疟原虫敏感、特异、简便、实用,可用于恶性疟流行区现场调查和临床诊断。     

张洪义痛泻要方治疗泄泻验案举隅

张洪义认为泄泻主要病机为脾虚湿盛。土虚木乘,脾虚水谷杂下,清浊不分,水湿下注。治宜补脾柔肝,利湿涩肠止泻。使用痛泻要方治疗,补脾抑肝,祛湿止泻,取得满意疗效。     

内耳三维重建与数值模拟

内耳是听觉和平衡觉的感受器,其精细的解剖结构及复杂的空间关系是其功能的重要基础,近年来,运用内耳组织连续切片及医学影像学资料获取二维结构信息,并进一步重建三维结构形态的技术正在不断发展。此外,基于三维成像模型进行数值模拟研究,亦获得了对内耳功能的进一步理解,本文拟对内耳三维重建及前庭生物力学数值模拟的研究进展做一综述。     

数值模拟人双耳感受体位变化的机制

目的探究双耳3对半规管在感受有角运动时力学行为表达的规律。方法采用有限元法数值模拟一例健康人头部水平正弦转动时左、右耳3对半规管的力学响应。结果各平衡感受器嵴顶局部位移响应随着嵴顶位置改变而变化,但是3对嵴顶的体积应变响应是规律的,每对嵴顶均以与激励相同的频率等幅度膨胀或收缩。水平、前、后半规管3个嵴顶的体积应变幅值绝对值的比值恒定,近似为1.00︰0.80︰1.72。此外,水平半规管和前半规管嵴顶体积应变响应的相位相同,且与头转动速度的相位约相差14.4°,与后半规管嵴顶体积应变响应的相位相差180°。结论嵴顶体积应变可以较好地表征3对半规管感受有角运动的规律,其幅值、频率和相位可以分别反映刺激角速度的幅值、频率和相位,这一规律为进一步建立前庭眼反射的数量依存关系奠定基础,同时为眼震检查定量评估前庭功能提供理论依据。     

血管紧张素原T704Crs699位点多态性与小动脉粥样硬化性脑梗死发病机制的关系研究

目的 探讨血管紧张素原（AGT）T704Crs699位点多态性与小动脉粥样硬化性脑梗死（SA）发病机制的关系。方法 以SA组186例和对照组94例为研究对象,采用SNaPshot技术及GeneMapper4.0软件分析AGTT704Crs699位点的基因分型情况,比较C（T）基因特征及等位基因频率,并进一步采用多元logistic回归,分析脑血管病常见危险因素与所携带基因分型在SA发病中的交互作用。结果AGTT704Crs699位点在SA组中以携带TT和TC基因型多见（30.1%、41.9%）,但患病率以CC基因型为高（80.0%）,与TT和TC基因型（65.1%、60.4%）比较,差异均有统计学意义（字2=5.24、6.78,均P＜0.05）;SA组T等位基因频率高于C等位基因频率,但差异无统计学意义（字2=1.23,P＞0.05）。携带AGTCC基因型（OR=3.34,95%CI1.54～8.43）、高血压病史（OR=5.59,95%CI2.35～22.61）、老龄（≥70岁）（OR=2.82,95%CI1.13～10.63）是SA发病的独立危险因素。结论AGTT704C基因多态性可能是SA发病机制的遗传因素,且携带AGTCC基因型,高血压病史和老年患者具有协同致病效应。     

日本血吸虫核糖核酸酶T2的表达及其功能分析

目的制备重组151本血吸虫核糖核酸酶T2蛋白（rSj RNase T2）,并分析其生物学功能。方法根据编码RNase T2开放阅读的基因序列设计、合成一对5’端带有酶切位点的引物。采用PCR方法从质粒CP1412/PEu—GST中扩增编码RNase T2蛋白成熟肽的基因片段,亚克隆到表达载体pET28a（＋）中,构建重组表达质粒Sj RNase T2-pET28a。将重组表达质粒转化到E．coli BL21中,用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达,用镍螯合亲和层析胶在变性条件下纯化rSj RNase T2蛋白。纯化蛋白通过尿素浓度梯度透析的方法进行复性,制备可溶性rSj RNase T2。以酵母RNA为底物进行消化,采用琼脂糖凝胶电泳的方法检测rSj RNase T2酶活性。用纯化的rSj RNase T2免疫小鼠,采用酶联免疫法（ELISA）检测小鼠血清特异抗体水平,观察其抗原性;采用检测Western blot抗rSj RNase T2抗体IgG与成虫可溶性虫抗原、成虫外分泌抗原、虫卯可溶性抗原和虫卵外分泌抗原的反应性,并观察Sj RNase T2在虫体中的分布。以rSj RNase T2刺激巨噬细胞RAW264．7,通过流式分析观察RAW264．7细胞表面标志物CD16／32、CD206表达水平的变化,采用RTPCR检测RAW264．7细胞内诱导型一氧化氮合酶与精氨酸酶基因mRNA的表达水平,采用ELISA检测RAW264．7细胞培养上清液中IL-12及IL-10水平的变化,以观察Sj RNase T2的免疫凋节功能。结果重组表达质粒Sj RNase T2-pET28a构建成功,经IPTG诱导,能表达重组Sj RNase T2蛋白。该蛋白以包涵体形式存在,经过复性能获得部分可溶性蛋白。rSj RNaseT2具有酶活性,能够水解酵母RNA。ELISA检测rSj RNase T2免疫小鼠血清特异性抗体滴度为1：200000,该抗血清能识别来源于血吸虫虫卯及虫卯外分泌抗原中的天然RNase T2。rSj RNase T2可诱导巨噬细胞向M2型方向转化,表达高水平的IL-10、精氨酸酶及CD206表面分子。结论rSj RNase T2表达成功。该蛋白具有天然的酶学特性和抗原性,能调节巨噬细胞向M2型方向分化。