重组酶介导的蓝氏贾第鞭毛虫特异性等温核酸扩增方法的建立及评价

目的　建立基于重组酶介导的等温扩增技术（RAA）的蓝氏贾第鞭毛虫核酸检测方法,并评价其检测敏感性和特异性。方法　选择蓝氏贾第鞭毛虫β?贾第素（β?giardin）基因作为检测靶基因,设计、合成特异性检测引物及荧光探针,建立荧光RAA检测体系。分别以不同拷贝数的重组质粒（含β?giardin基因靶序列）和不同浓度蓝氏贾第鞭毛虫基因组DNA为模板进行荧光RAA扩增,评价其检测敏感性;分别以蓝氏贾第鞭毛虫、日本血吸虫、华支睾吸虫、微小隐孢子虫、似蚓蛔线虫、沙门氏菌及志贺氏菌基因组DNA为模板进行扩增,评价其检测特异性。结果　成功建立了蓝氏贾第鞭毛虫荧光RAA检测方法,其可在等温（39 ℃）条件下实现对靶基因片段的快速、特异性扩增（20 min内）。分别以重组质粒和蓝氏贾第鞭毛虫基因组DNA为模板,该方法的检测敏感性可达102拷贝/μL和1 pg/μL;以日本血吸虫、华支睾吸虫、微小隐孢子虫、似蚓蛔线虫、沙门氏菌及志贺氏菌基因组DNA为模板的RAA检测结果均为阴性,具备较好特异性。结论　建立了一种操作简便、敏感、特异的可用于蓝氏贾第鞭毛虫核酸检测的荧光RAA方法。     

巴西日圆线虫虫体蛋白体外诱导THP-1来源巨噬细胞极化的研究

目的　分析巴西日圆线虫虫体蛋白体外诱导人单核细胞白血病THP?1细胞来源巨噬细胞的极化方向,探索机体对巴西日圆线虫感染的免疫应答机制。方法　建立并维持巴西日圆线虫培养的实验室循环,无菌条件下收集L3和L5虫体,分别制备虫体蛋白;建立THP?1细胞体外培养体系,经500 ng/mL佛波酯（PMA）刺激培养后呈贴壁状态的M0型细胞分别采用500 ng/mL脂多糖（LPS）+ 100 ng/mL γ?干扰素（IFN?γ）、白细胞介素4（IL?4）+ IL?13（浓度均为100 ng/mL）、L3及L5虫体蛋白（浓度均为5 mg/mL）进行刺激,同时设不加任何刺激的阴性对照组。通过显微镜镜检观察刺激后细胞形态、实时荧光定量PCR（qPCR）检测M1/M2型巨噬细胞特异性基因mRNA表达水平、流式细胞术检测巨噬细胞表面标志物及酶联免疫吸附试验（ELISA）检测M1/M2型巨噬细胞分泌的细胞因子含量,观察巴西日圆线虫虫体蛋白体外诱导THP?1来源巨噬细胞的极化方向。结果　THP?1细胞经PMA刺激培养呈贴壁的M0型细胞后,经LPS + IFN?γ刺激培养后呈特征性M1型极化;经IL?4 + IL?13刺激培养后呈特征性M2型极化;经L3和L5蛋白刺激培养后均呈特征性M2型极化。阴性对照组、LPS + IFN?γ刺激组、IL?4 + IL?13刺激组、L3蛋白刺激组、L5蛋白刺激组间M1型巨噬细胞比例差异有统计学意义（[χ2] = 3 721.00,P < 0.001）,其中LPS + IFN?γ刺激组M1型巨噬细胞比例最高;各组间M2型巨噬细胞比例差异有统计学意义（[χ2] = 105.43,P < 0.001）。各组间C?C基序趋化因子配体2（CCL2）、肿瘤坏死因子α（TNF?α）、IL?12b、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、IL?10、甘露糖受体C型1（Mrc1）基因mRNA表达水平差异均有统计学意义（F = 191.95、129.95、82.89、11.30、9.51、12.35,P均< 0.001）,各组间CD86、CD206阳性率差异均有统计学意义（[χ2] = 24 004.33、832.50,P均< 0.001）。LPS + IFN?γ刺激组IL?1β、TNF?α表达水平均显著高于IL?4 + IL?13刺激组、L3蛋白刺激组及L5蛋白刺激组（P均< 0.001）;IL?4 + IL?13刺激组、L3蛋白刺激组和L5蛋白刺激组TGF?β1、IL?10表达水平均显著高于阴性对照组和LPS + IFN?γ刺激组（P均< 0.05）。结论　巴西日圆线虫L3和L5虫体蛋白体外均可诱导THP?1来源巨噬细胞向M2型极化。     

日本血吸虫鸡尾酒式DNA疫苗与蛋白疫苗联合应用增强免疫保护作用的研究

目的 探讨日本血吸虫鸡尾酒式DNA疫苗与蛋白疫苗联合应用以增强免疫保护作用的效果。方法分别大量制备质粒DNA：pcDNA3．1-SjC23、pcDNA3．1-SjCTPI、pcDNA3．1-（CDR3）6和重组蛋白SjC23-HD、SjCTPI、NP30。pcDNA3．1-SjC23、pcDNA3．1-SjCTPI、pcDNA3．1-（CDR3）6等量混合后即为鸡尾酒式的混合DNA疫苗，重组蛋白SjC23-HD、SjCTPI、NP30等量混合后即为鸡尾酒式的混合蛋白疫苗。70只BALB／c小鼠随机分为A、B、C、D、E5组，每组14只。A组为自然感染组；B组（空质粒对照组）每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μlpcDNA3．1；C组（空质粒＋混合蛋白对照组）每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μlpcDNA3．1，第9周每鼠经背部皮下多点注射100μl混合蛋白疫苗＋100μl福氏完全佐剂（FCA）；D组（混合DNA组）每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μl混合DNA疫苗；E组（混合DNA＋混合蛋白组）每只小鼠分别在第0、3、6周经股四头肌注射100μl混合DNA疫苗，第9周每鼠经背部皮下多点注射100μl混合蛋白疫苗＋100μlFCA。DNA免疫组末次免疫后4周，蛋白加强组末次免疫后2周，所有小鼠同时经腹部皮肤感染（40±1）条尾蚴。攻击感染后42d剖杀小鼠，计数成虫及肝脏虫卵数。首次免疫前2d及感染前2d分别经尾静脉采血，分离血清检测IgG抗体水平、抗体亚类IgG1及IgG2a，并取小鼠脾脏制备单个脾细胞，检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ的水平。结果C、D组和E组的减虫率分别为17．70％、32．88％和45．35％，D组和E组的减虫率均显著高于C组（P均〈0．01），且E组的减虫率显著高于D组（P〈0．01）；C、D组和E组的减卵率分别为9．39％、36．20％和48．54％，D组和E组的减卵率均显著高于C组（P均〈0．01），且E组的减虫率也显著高于D组（P〈0．05）。C、D、E3组小鼠血清都检测到特异性IgG抗体，?     

巨噬细胞替代激活在钩虫干预炎症性疾病中的研究进展

巨噬细胞作为一种高度可塑性的固有免疫细胞,可在不同刺激下分化为M1型巨噬细胞和替代活化的M2型巨噬细胞,其中M2型巨噬细胞参与免疫调节、组织重构和再生、伤口愈合等过程。既往流行病学调查发现,蠕虫感染率与过敏、自身免疫性疾病等炎症性疾病发病率间存在显著负相关关系。钩虫作为一种常见的肠道蠕虫,其感染后同样可诱导宿主产生高水平Ⅱ型免疫反应,巨噬细胞呈现替代激活,可有效干预炎症性疾病的发生发展。本文从巨噬细胞替代激活的角度对钩虫干预炎症性疾病的研究进展进行综述。     

常州市特殊人群弓形虫感染状况及知识行为调查分析

目的了解常州市特殊人群弓形虫感染状况、防治知识知晓情况及相关行为,为制定有效的弓形虫病防治措施提供科学依据。方法选择常州市孕妇、肿瘤病人及畜禽养殖或产品加工人员等3类特殊人群为调查对象,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测其血清弓形虫IgG、IgM抗体,并进行弓形虫病防治知识与行为问卷调查。结果 2015年3月—5月,共调查检测300人,弓形虫感染率16.3%(49/300);弓形虫病防治知识知晓率17.3%(52/300)。弓形虫病防治知识知晓组常接触猫/狗者占25.0%(13/52),低于不知晓组的50.8%(126/248),差异有统计学意义(χ~2=11.51,P0.05);知晓组生熟砧板分开者占61.5%(32/52),高于不知晓组的9.3%(23/248),差异有统计学意义(χ~2=78.43,P0.001)。弓形虫病防治知识知晓率与感染率之间呈负相关,知晓组弓形虫感染率5.8%(3/52),低于不知晓组的18.5%(46/248),差异有统计学意义(χ~2=5.14,P0.05)。结论常州市特殊人群弓形虫病防治知识知晓率较低,应加强宣传教育,增强其卫生防护意识,改变不良生活习惯。     

重组酶介导的隐孢子虫属特异性等温核酸扩增 方法的建立及评价

目的　建立一种可用于隐孢子虫检测的重组酶介导的等温核酸扩增（RAA）方法,并对其检测敏感性和特异性进行评价。方法　以隐孢子虫属特异性18S rRNA核酸序列作为检测靶标,采用Amplfix软件设计、合成引物及荧光检测探针,构建并优化RAA荧光反应体系;分别以不同拷贝数的含18S rRNA靶序列的重组质粒、不同浓度隐孢子虫卵囊基因组DNA及不同数量隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板进行RAA荧光法检测,以评价其敏感性;分别以隐孢子虫卵囊、蓝氏贾第鞭毛虫包囊、日本血吸虫虫卵、似蚓蛔线虫虫卵、华支睾吸虫虫卵、沙门氏菌、志贺氏菌基因组DNA为模板进行RAA荧光法检测,以评价其特异性。结果　成功建立了隐孢子虫检测RAA法,该方法可在39 ℃、20 min内得到隐孢子虫属18S rRNA基因片段的有效扩增。以不同拷贝数的含18S rRNA靶序列的重组质粒、不同浓度隐孢子虫卵囊基因组DNA及不同数量隐孢子虫卵囊基因组DNA为模板,该方法最低检出限分别为102拷贝/μL、1 pg/μL和1个/50 μL;以蓝氏贾第鞭毛虫包囊、日本血吸虫虫卵、似蚓蛔线虫虫卵、华支睾吸虫虫卵、沙门氏菌、志贺氏菌基因组DNA为模板的荧光RAA扩增结果均为阴性。结论　成功建立了一种可用于检测隐孢子虫卵囊DNA的RAA法,该方法操作简便、反应快速,敏感性和特异性均较好。     

基于恶性疟原虫PHIST特有基因的环介导等温扩增技术的建立与评价

目的建立基于编码恶性疟原虫PHIST蛋白特有基因的环介导等温扩增技术。方法在Plasmo DB数据库中,搜索并筛选编码PHIST、在环状体或裂殖体期高表达且恶性疟原虫特有的基因。利用在线软件Primer Explorer V4设计目的基因LAMP引物。采集恶性疟原虫滤纸血并提取基因组DNA。将提取后的恶性疟原虫DNA用超纯水进行10~(-1)、10~(-2)、10~(-3)、10~(-4)倍比稀释,用LAMP法检测其敏感性;采用间日疟原虫、约氏疟原虫、牛带绦虫和日本血吸虫基因组DNA作为对照,用LAMP法评价其特异性。结果共筛选出61个编码恶性疟原虫PHIST的基因。选取环状体期高表达的特有基因PF3D7_1372300和裂殖体期高表达的特有基因PF3D7_1401600建立LAMP技术。基于PF3D7_1372300和PF3D7_1401600基因的LAMP法检测恶性疟原虫的最低限度分别为130.5个/μl和1 305.3个/μl,所获得的恶性疟原虫扩增产物其检测管染色后呈绿色,即阳性。基于PF3D7_1372300和PF3D7_1401600基因的LAMP法扩增恶性疟原虫产物检测管染色后呈绿色,即阳性;而间日疟原虫、约氏疟原虫、牛带绦虫和日本血吸虫的LAMP扩增产物检测管染色后仍呈棕色,即阴性。结论基于PF3D7_1372300基因的LAMP法检测恶性疟原虫敏感、特异、简便、实用,可用于恶性疟流行区现场调查和临床诊断。     

甲氰咪胍对眼睑带状疱疹的疗效观察

笔者采用甲氰咪胍口服治疗眼睑带状疱疹12例获得显著疗效。男性7例,女性5例。年龄18～72岁。治疗方法:甲氰咪胍200毫克,每日3次口服,     

氯硝柳胺展膜油剂水面分布及杀尾蚴效果观察

目的观察了解氯硝柳胺展膜油剂水面铺展速度、水面分布和水面杀尾蚴效果。方法取直径4 mm的泡沫塑料作为浮标,置于大型静止水面中心处,待静止后,在距浮标0.5 cm处滴加氯硝柳胺展膜油剂,开始计时并测定浮标在水面漂浮距离,计算氯硝柳胺展膜油剂的铺展速度及面积。将塑料桶(直径40 cm,高50 cm)装满脱氯水后,水温(25±1)℃,待水体静止后在水表面圆心处滴加氯硝柳胺展膜油剂60μl。分别在距离滴加展膜油剂处的水体表面10 cm和20 cm,并且水深10、20、30、40 cm和50 cm处提取水样1 ml,采用高效液相色谱法测定水样中氯硝柳胺浓度。将氯硝柳胺展膜油剂用乙醇稀释成有效浓度为1.25 mg/L和0.62 mg/L的溶液,各取10μl溶液加入含有尾蚴的24孔培养板中,使各孔中氯硝柳胺浓度分别为6.25×10-3mg/L和3.13×103mg/L,观察不同时间尾蚴存活情况。结果氯硝柳胺展膜油剂滴入量为20、30、40、50、60、70μl和80μl时,铺展速度分别为59、55、71、90、111、122 cm/s和153 cm/s,铺展面积分别为5.31、5.89、7.07、10.06、12.56、15.20 m2和16.61 m2,且随着滴入量的增加,铺展速度呈加快趋势,铺展面积相应增加,铺展速度与滴入量成良好的线性关系。水表面滴入氯硝柳胺展膜油剂60μl后,其浓度最高可达1.27 mg/L,2 h后浓度仍维持在0.07 mg/L以上。距离水面10 cm以下水体中氯硝柳胺浓度均<0.04 mg/L。氯硝柳胺展膜油剂浓度为6.25×10-3mg/L时,1 min尾蚴内全部死亡;当浓度为3.13×10-3mg/L时,1、2、3、5、10、20 min和30 min尾蚴死亡率分别为0、13.89%、19.44%、43.06%、69.44%和79.17%。结论氯硝柳胺展膜油剂铺展速度快、水面滞留时间长,具有较好的表面杀蚴作用,可用于现场水面杀尾蚴,阻断血吸虫病的传播。     

江苏省土源性线虫病流行趋势和防治历程

土源性线虫病曾在江苏省广泛流行,严重威胁人民身体健康、阻碍社会经济发展。经过多年积极有效防治,江苏省土源性线虫人群感染率大幅下降,从1989年的59.32%下降至2019年的0.12%,自2013年以来人群土源性线虫感染率均维持在0.5%以下的水平。自1987年以来,江苏省采取土源性线虫病综合防控策略,但各阶段防控措施的侧重点存在差异,主要包括驱虫服药、改水改厕、健康教育和监测与防治效果评估等。至2019年底,全省所有县（市、区）均达到有效控制土源性线虫病标准。今后仍需加强健康教育和监测、落实精准防控,以进一步巩固江苏省土源性线虫病防治成效、消除土源性线虫病对人群的危害。本文对江苏省土源性线虫病流行情况、防控历程及策略演变等进行了回顾与总结。