自身猝灭探针定量PCR检测HCV方法的建立

目的 建立自身猝灭荧光探针定量PCR技术检测HCV方法.方法 构建重组质粒pMD18-T-HCV5'NCR作为标准品,并通过Sigma在线软件设计自身猝灭探针,优化定量PCR体系,并进行方法学评价.结果 建立了自身猝灭荧光探针的定量PCR方法,线性为101～1010copies/μl;灵敏度达50 copies/μl;批内CV为6.1%,批间CV为6.5%,日间CV为6.8%;特异性为100%,与其他肝炎病毒无交叉反应.与紫外定量方法比较,结果差异无显著性,且高度相关.结论 以自身猝灭荧光探针建立的HCV荧光定量PCR检测方法,灵敏度高、特异性强,为新型试剂盒的开发奠定了基础.     

全血分析仪室内质量控制规则的选择与评价

目的为COULTERSTK全自动细胞分析仪选择满足临床质量要求的质控规则。方法以CLIA88能力比对验证为“允许总误差”对每项测定规定质量要求，确定各测定方法稳定操作下的不精密度或标准差、不准确度或偏倚，绘制操作过程规范图，画出操作点，通过评价候选质控方法的误差检出概率（Ped）和假失控概率（Pfr），选择质控规则。结果血红蛋白、白细胞、MCV、MCH使用1 3.5，质控规则（n=1）；红细胞、MCHC使用1a。质控规则（n=1）；红细胞压积使用1 2.5s质控规则（n=1）；血小板使用Westgard多规则（1 3s／2 2s／R 4s，／4 1s／1 03）（n=2）均可达到90％的Ped。白细胞低值标本不准确度较大（偏倚4．5％），采用1。。／2s／R4s／4 1s／8x多规则进行判断，n=2时Pfr为0．038，Ped为50％。结论通过操作过程规范图能够简便地选择满足临床检验所需要的质控规则和质控品测定的个数，使误差检出概率和假失控概率达到临床工作的要求。     

新鲜全血重复测定差值法在血细胞分析质量控制中的应用

目的建立一种以病人新鲜全血为质控物的血细胞分析仪的质控方法。方法以Bayer ADVIA 2120血细胞分析仪为实验仪器．每天上午在配套质控物随标本测定后．选取20份结果合适的新鲜病人标本，下午重复测定1次（间隔6小时），连续检测10天，计算红细胞、白细胞、血红蛋白、红细胞压积、血小板前后2次检测结果的差值．将差值的均值和标准差定义为质控图的靶值和标准差．建立差值法Z分数质控图，再以Westgard质控规则连续17天监测病人新鲜全血标本，判断检测结果是否在控。结果除Hb发生1次失控外．差值法连续17天的质控结果均在控。结论差值法能作为仪器配套质控物8小时外质量控制的补充．该方法经济、方便．提高了检验报告的质量。     

不同检测系统血清酶测定结果的偏倚评估与可比性研究

目的通过对不同检测系统血清酶测定进行方法比对和偏倚评估,探讨不同检测系统间血清酶测定结果的可比性,为不同实验室检验结果的互认和实验室认可提供实验数据. 方法参考NCCLS的EP9-A2文件,以日立7170生化分析仪、罗氏原装试剂、C.f.a.s校准品和质控品组成的检测系统（已通过ISO/IEC 17025标准认可）为目标检测系统（比较方法）,检测系统1～4为实验方法,用病人新鲜血清对丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）和肌酸激酶（CK）进行检测,计算实验方法（Y）和比较方法（X）之间的相对偏差（% SE）,以美国临床实验室修正法规（CLIA＇88）规定的室间质量评价允许误差范围的1/2为标准,判断不同检测系统测定结果的可比性. 结果除检测系统4的ALT结果、检测系统1 ALP测定的高值（＞150 U/L）、检测系统3和检测系统4的AST结果与比较方法的系统误差不能被接受外,其余项目测定结果的系统误差临床可以接受. 结论当用两个以上的检测系统检测同一检验项目时,应进行方法比对和偏倚评估,判断其临床可接受性能,以保证检验结果的可比性.     

5株玫瑰单胞菌的临床分离、鉴定和特征分析

目的：对2011－2013年我院收集的5株来源临床的玫瑰单胞菌进行分析,探讨玫瑰单胞菌的病原学特点。方法：采用生化鉴定、API 20NE、Vitek系统GN卡、RapID NF和16S rRNA基因测序对该5株菌进行鉴定,Kirby-Bauer法进行药敏试验。结果：玫瑰单胞菌不在API 20NE和Vitek鉴定的数据库范围内;RapID NF数据库涵盖了玫瑰单胞菌,但仅2株正确鉴定为玫瑰单胞菌属。采用16S rRNA基因测序分析,5株菌分别鉴定为黏液玫瑰单胞菌（3株）、吉氏玫瑰单胞菌（1株）和河口玫瑰单胞菌（1株）。药敏结果显示,5株菌对碳青酶烯类、氨基糖苷类和喹诺酮类药物均敏感,对单环内酰胺类、青霉素类和头孢类等抗菌药物呈现广泛耐药。结论：16S rRNA基因测序是玫瑰单胞菌最佳的临床鉴定方法,玫瑰单胞菌对抗菌药物呈现耐药应引起临床重视。     

纤维蛋白原的凝血酶原时间衍生法参考区间的建立及其适用范围

目的 建立纤维蛋白原的凝血酶原时间衍生法（PT-Der）的参考范围,观察其在检测不同人群纤维蛋白原（FIB）时与Clauss法的差异及相关性,建立适合该实验室的FIB检测程序.方法 采用CA1500凝血分析仪及Dade配套试剂,PT-Der法检测216例健康者FIB含量.PT-Der法及Clauss法同时检测29例健康者、100例患者（肝肾功能障碍17例,冠心病13例,肿瘤29例,炎症23例、糖尿病等其他疾病18例）FIB含量.结果该实验室PT-Der法参考区间为1.58～3.82 g/L;健康者及各疾病组用PT-Der法检测FIB含量均高于Clauss法,差异有统计学意义（P＜0.01）;除冠心病组外,各组用2种方法 检测FIB的结果均有相关性（P＜0.05）,健康对照组相关系数接近1,其余各组相关系数均小于0.7.结论 健康者群筛查时,可用PT-Der法检测FIB;对超出参考区间者,需用Clauss法再次检测.对已明确处于各种疾病状态人群,则直接用Clauss法检测FIB.     

标本双份测定法在临床生化检验室内质控中的应用

目的利用极差型质控图,探讨患者标本双份测定法在临床生化检验室内质控中的应用。方法在常规室内质控在控后开始检测标本,每天从前10份标本中选出1份总蛋白(TP)60～80 g·L~(-1)、白蛋白(ALB)30～50 g·L~(-1)的标本,3 h后再重测1次该标本的TP、ALB,每天计算2次测定结果的差值和差值的标准差,连续40个工作日,利用标准差计算双份测定极差的控制限,建立极差型质控图。再连续1个月(22个工作日)进行患者标本TP、ALB双份测定,把每天2次测得结果的差值描到极差型质控图上。结果TP和ALB 1个月标本双份测定差值无失控点。结论患者标本双份测定法可以用来监测检测系统的稳定性,与常规室内质控相互补充提高检验质量。     

肝素对亮氨酸氨基肽酶测定的干扰评价

目的依据美国临床实验室标准化协会（CLSI）EP7-A2文件评价肝素对速率法测定亮氨酸氨基肽酶（LAP）的干扰,明确干扰物质带来的结果差异,确保分析方法性能符合临床要求。方法首先,使用2个不同厂家[北京利德曼生化股份有限公司（简称利德曼）、日本第一化学药品株氏会社（简称日本一化）]的试剂同时测定40例患者不抗凝血样本和肝素锂抗凝血样本的LAP,对2种样本的LAP结果进行分析,对有差异的结果进行干扰筛选分析。然后,分别进行＂配对差异＂试验和＂剂量效应＂试验以及肝素干扰LAP测定的浓度范围的评价。结果利德曼试剂测定2种样本LAP的结果有差异（P〈0.05）,日本一化试剂结果无差异（P〉0.05）。＂配对差异＂试验显示肝素对利德曼试剂测定低浓度LAP时存在干扰,而高浓度LAP不存在干扰。＂剂量效应＂试验结果显示肝素在不同浓度对LAP测定的干扰为非线性函数。初步判定LAP≤97 U/L时,肝素对利德曼试剂产生干扰;在LAP≥149 U/L时,其干扰效应不明显。结论当样本LAP≤97 U/L时,用利德曼试剂测定肝素锂抗凝样本LAP时会对检测结果产生正干扰。为保证LAP检测结果的准确性,如果继续使用利德曼LAP试剂,则需换用无抗凝的干燥管采集样本;如果继续使用肝素锂抗凝管采集样本,可换用日本一化LAP试剂。     

自身淬灭探针荧光定量PCR检测淋病奈瑟菌

目的利用自身淬灭探针技术建立敏感、特异、快速、价廉且能广泛应用的淋病奈瑟菌荧光定量PCR检测方法。方法构建重组质粒pGEM-11Zf-CPPB作为标准品,自行设计自身淬灭探针,建立、优化定量PCR体系,并进行方法学评价及临床应用。结果所建立方法的线性检测范围为101～109拷贝/μL,灵敏度为10拷贝/μL,特异性为100%。天间变异系数(CV)为2.38%,批内CV为1.32%,批间CV为2.75%。该方法比培养方法更快速、灵敏。结论以自身淬灭探针技术为平台的淋病奈瑟菌荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,对淋病的早期快速诊断有较高价值。     

60例牙周炎中西医结合治疗临床观察

牙周炎归属中医牙疳的范畴，笔者用中药加抗生素治疗收到显著的疗效，现报道如下。