颗粒蛋白前体通过CTLA4调控调节性T细胞的发育和功能

目的探讨颗粒蛋白前体(PGRN)对调节性T细胞发育和功能的影响及分子机制。方法在野生型和PGRN敲除小鼠模型中,采用流式细胞术检测小鼠中枢及外周各淋巴器官中T细胞各亚群的比例及调节性T细胞比例及其功能相关分子的表达;采用RT-PCR检测调节性T细胞中CTLA4的表达;最后采用调节性T细胞体外抑制试验验证其功能变化。结果与野生型小鼠相比,PGRN敲除小鼠脾脏、胸腺和淋巴结中调节性T细胞的比例均升高,特别发现在脾脏调节性T细胞中CTLA4在基因和蛋白表达水平均显著升高。体外功能试验发现PGRN敲除小鼠的脾脏调节性T细胞的抑制功能也较野生型增强。结论 PGRN在调节性T细胞的发育和功能中扮演重要角色,其机制可能涉及CTLA4。     

蛋白质凝胶电泳银染色法的改进

目的探索一种快速、灵敏的蛋白质凝胶电泳银染色方法。方法对蛋白质凝胶电泳银染色过程中的多种因素进行了实验探索。在此基础上探索出一种改良的蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳银染色法。结果改进方法灵敏度为Coomassie Brilliant Blue R-250法的100倍以上，对牛血清白蛋白的检测限在0．5ng以下，整个染色过程不超过60min，染色重复性好。结论改进后的方法比以前使用的方法简便、快速、灵敏、成本相对低廉。     

一种快速检测HBV基因的荧光定量PCR法的建立

目的：利用二聚体蝎型荧光探针技术,建立一种能用于临床的快捷、敏感、特异、价格低廉的HBV实时荧光定量PCR检测方法。方法：根据HBV基因组保守区域precore／core设计二聚体蝎型荧光探针和引物,构建质粒标准品,优化荧光定量PCR条件,并进行方法学评价。结果：所建方法的检测范围为10^1～10^8 copies／μl,灵敏度达到10copies／μl,低拷贝样品的批内和日间重复性（CV）分别为1．71％和2．57％,高拷贝样品的批内和日间GV,分别为3．00％和3．86％。与商品化TaqMan试剂盒相比,本法阳性检出率较高,且检测时间缩短了45min（约减少1／3）,成本降低50％。结论：成功建立了快速检测HBVDNA的二聚体蝎型荧光定量PCR方法,为研发适合临床应用的HBV基因定量检测试剂盒奠定了基础。     

蛋白质凝胶电泳银染色法的改进

目的探索一种快速、灵敏的蛋白质凝胶电泳银染色方法.方法对蛋白质凝胶电泳银染色过程中的多种因素进行了实验探索,在此基础上探索出一种改良的蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳银染色法.结果改进方法灵敏度为Coomassie Brilliant Blue R-250法的100倍以上,对牛血清白蛋白的检测限在0.5ng以下,整个染色过程不超过60min,染色重复性好.结论改进后的方法比以前使用的方法简便、快速、灵敏、成本相对低廉.     

新型二聚体蝎型探针技术在结核分枝杆菌荧光定量聚合酶链反应中的应用

目的利用二聚体蝎型荧光探针技术，建立一种敏感特异、快速价廉且能广泛应用的结核分枝杆菌DNA荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测方法。方法构建重组质粒pMD18-T-senX3-regX3 IR作为标准品，自行设计二聚体蝎型探针，优化定量PCR体系，并进行方法学评价及初步临床应用。结果（1）成功构建了重组质粒pMD18-T-senX3-regX3IR。（2）建立了利用二聚体蝎型荧光探针的荧光定量PCR方法，其线性范围：10^1～10^7拷贝／μ1；灵敏度：10^1拷贝／μ1；重复性：批内变异系数（CV）为2．35％，批间CV为3．17％，日间CV为4．06％；特异性100％；（3）初步临床应用证明：该方法比商品化Taqman方法阳性检出率更高，检测时间更短和成本也明显降低。结论本研究首次建立了以二聚体蝎型荧光探针技术为平台的结核分枝杆菌荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法，这为应用二聚体蝎型荧光探针技术开辟检测结核分枝杆菌的分子诊断新途径奠定了一定的基础。     

天然抗菌肽分离纯化方法的建立

目的寻找高效、广谱的新型天然抗菌肽，建立稳定、有效的分离纯化方法。方法家蝇免疫诱导后制成组织匀浆，经超速离心、分子筛过滤、SephadexG50层析、反相高效液相色谱法（RP-HPLC）、透析浓缩等技术进行分离纯化，用K-B法鉴定抗菌活性。结果组织提取液经超速离心后，用pH6．8Tris-HCI尿素缓冲液作流动相，SephadexG50层析，收集到有明显抗菌活性的成分。再用pH6．8磷酸盐缓冲液作流动相，经RP-HPLC半制备柱进一步纯化，各成分分离效果良好，保留时间为18．008min处的谱峰，有明显的抗菌活性。用RP-HPLC分析柱显示其为单一成分，达到了色谱纯。该抗菌肽对大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistantS．aureus，MRSA）均有抗菌活性。结论建立了有效的家蝇抗菌肽分离纯化方法，纯化的家蝇抗菌肽有广谱抗菌活性。     

常染色体显性遗传白内障分子遗传学研究进展

先天性白内障是儿童致盲的重要原因，其发病机制复杂，其中约1／3为遗传性因素。遗传方式包括常染色体显性遗传（ADCC）、常染色体隐性遗传（ARCC）和X连锁遗传（XLCC），其中以ADCC最为常见。随着分子遗传学的发展，迄今为止已报道了人类ADCC的14种基因的数10种突变。现就ADCC在分子遗传学上的研究进展加以综述。     

肺炎链球菌蛋白质疫苗研究进展

肺炎链球菌是引起肺炎、中耳炎、脑膜炎等的重要致病菌。目前投入使用的荚膜多糖疫苗有很大的局限性，因此针对其主要毒力因子的蛋白质疫苗发展很快，有望替代多糖疫苗。     

不同检测系统血清酶测定结果的偏倚评估与可比性研究

目的通过对不同检测系统血清酶测定进行方法比对和偏倚评估,探讨不同检测系统间血清酶测定结果的可比性,为不同实验室检验结果的互认和实验室认可提供实验数据. 方法参考NCCLS的EP9-A2文件,以日立7170生化分析仪、罗氏原装试剂、C.f.a.s校准品和质控品组成的检测系统（已通过ISO/IEC 17025标准认可）为目标检测系统（比较方法）,检测系统1～4为实验方法,用病人新鲜血清对丙氨酸氨基转移酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）和肌酸激酶（CK）进行检测,计算实验方法（Y）和比较方法（X）之间的相对偏差（% SE）,以美国临床实验室修正法规（CLIA＇88）规定的室间质量评价允许误差范围的1/2为标准,判断不同检测系统测定结果的可比性. 结果除检测系统4的ALT结果、检测系统1 ALP测定的高值（＞150 U/L）、检测系统3和检测系统4的AST结果与比较方法的系统误差不能被接受外,其余项目测定结果的系统误差临床可以接受. 结论当用两个以上的检测系统检测同一检验项目时,应进行方法比对和偏倚评估,判断其临床可接受性能,以保证检验结果的可比性.     

循环核酸测定在恶性肿瘤诊断中的应用

循环核酸是指存在于血液(血浆或血清)中的细胞外游离DNA和RNA。本文对血浆(血清)DNA如Ras和p53基因突变、微卫星改变、肿瘤抑癌基因启动子的高甲基化、线粒体DNA突变和肿瘤相关病毒DNA等以及肿瘤相关RNA如酪氨酸酶RNA、端粒酶成分RNA、不同肿瘤相关基因编码的mRNA和病毒RNA等检测在肿瘤诊断和预后中的意义进行了综述，并简要展望了循环核酸测定的应用前景。