蜂毒肽通过转化生长因子β/SMAD信号通路调控非小细胞肺癌的上皮-间质转化进程*

目的 探讨蜂毒肽对非小细胞肺癌转化生长因子β（TGF-β）/SMAD信号通路的调控作用及对TGF-β1诱导的上皮-间质转化（EMT）进程的影响。方法 通过外源性TGF-β1刺激构建非小细胞肺癌A549细胞EMT模型,将细胞分为对照组、TGF-β1组（加入2 μg/L TGF-β1）、蜂毒肽组（加入2.5 mg/L蜂毒肽）、蜂毒肽+TGF-β1组（加入2 μg/L TGF-β1和2.5 mg/L蜂毒肽）。采用免疫印迹及逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）实验检测各组细胞EMT标志蛋白钙黏附蛋白E、N-钙黏蛋白、波形蛋白及mRNA表达情况;同时检测各组细胞中Smad2、p-Smad2蛋白表达情况,分析蜂毒肽对非小细胞肺癌TGF-β/SMAD信号通路的影响。采用免疫荧光实验检测对照组及蜂毒肽组细胞中TGF-βⅠ受体及TGF-βⅡ受体表达情况,同时采用Transwell实验检测两组细胞迁移、侵袭能力。结果 ①与对照组相比,TGF-β1组钙黏附蛋白E mRNA及蛋白表达水平明显降低,N-钙黏蛋白mRNA及蛋白与波形蛋白mRNA及蛋白表达水平明显升高（均P＜0.05）。蜂毒肽+ TGF-β1组钙黏附蛋白EmRNA及蛋白表达水平明显优于TGF-β1组,且N-钙黏蛋白mRNA、蛋白以及波形蛋白mRNA、蛋白表达水平低于TGF-β1组（均P＜0.05）。②对照组和蜂毒肽组细胞中TGF-βⅠ受体表达比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,蜂毒肽组中TGF-βⅡ受体含量明显少于对照组。③Transwell实验结果显示,TGF-β1组细胞迁移、侵袭能力明显优于对照组,蜂毒肽+TGF-β1组细胞迁移、侵袭能力明显劣于TGF-β1组细胞（均P＜0.05）。结论 蜂毒肽可通过抑制TGF-β/SMAD信号通路抑制Smad2磷酸化,下调TGF-βⅡ受体分布,从而抑制肿瘤细胞的侵袭、迁移,抑制TGF-β1诱导的肺癌细胞EMT进程。     

基于β2AR2/βarrestin2/NFκB通路的地佐辛对心肌缺血再灌注损伤大鼠的作用及机制

目的 探讨地佐辛对心肌缺血再灌注损伤大鼠β2肾上腺素受体(β2AR)/β抑制蛋白2(β-arrestin2)/核转录因子-κB(NF-κB)通路及心肌凋亡的影响。方法 60只大鼠随机分为假手术组（Sham组）,心肌缺血再灌注模型组（MIRI组）,地佐辛高、中、低剂量组（20、10、5 mg/kg）,每组12只。地佐辛各剂量组在造模前30 min经股静脉注射相应剂量的地佐辛,Sham组和MIRI组给予等量生理盐水,采用手术结扎大鼠冠状动脉左前降支的方法复制大鼠MIRI模型。再灌注2 h后,检测各组大鼠心率（HR）、左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末（LVEDP）,评价心脏功能;并检测血清中肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶MB（CKMB）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平;HE染色观察左心室组织学变化;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况,计算凋亡指数;免疫组织化学法检测心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达;Western blot检测心肌组织β2AR、β-arrestin2、IκBα、NF-κB p65蛋白表达。结果 心肌组织病理学可见,Sham组心肌纤维完整、排列整齐,MIRI组心肌严重受损,局部肌纤维横纹消失,大量炎性细胞浸润;与Sham组相比,各治疗组明显好转。与Sham组相比,MIRI组大鼠HR、LVSP、Bcl-2/Bax比值、心肌组织β2AR、β-arrestin2、IκBα蛋白表达显著降低,各治疗组较MIRI组明显升高（均P＜0.05）;与Sham组相比,MIRI组LVEDP、血清CK、CK-MB、TNF-α、IL-6水平、心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3、NF-κB p65蛋白表达、心肌细胞凋亡率显著升高,各治疗组较MIRI组明显降低（均P＜0.05）。结论 地佐辛可抑制炎症反应,减少心肌细胞凋亡,对MIRI大鼠具有保护作用;其作用机制可能与上调β2AR、β-arrestin2、IκBα的表达,降低NF-κB p65表达有关。     

咳嗽变异性哮喘患儿血清sPD-L1、TLR4和sICAM-1水平及临床意义

目的 探讨咳嗽变异性哮喘(CVA)患儿血清可溶性程序性死亡配体1(sPD-L1)、Toll样受体4(TLR4)和可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)水平及临床意义。方法 纳入我院162例CVA患儿临床资料行前瞻性研究,根据其临床分期分为CVA急性期组（90例）.与CVA缓解期组（72例）;并收集同期入院的124例典型支气管哮喘(CA)患者临床资料,根据其临床分期分为CA急性期组（66例）与CA缓解期组（58例）,另纳入36例非呼吸系统疾病患儿作为对照组。比较各组血清sPD-L1、TLR4和sICAM-1水平及肺功能［用力肺活量(FVC)、一秒用力呼气容积(FEV1)、最大呼气中段流量(MMEF)］、气道反应性及敏感性［初始阻力值(Rrs cont)、基础呼吸传导率(Grs cont)、最小诱发累积剂量(Dmin)、传导率下降斜率(sGrs)］差异,并评估CVA患儿肺功能、气道反应性、敏感性与血清sPD-L1、TLR4和sICAM-1水平的关系。 结果 5组性别、年龄、身高、体重及Rrs cont、Grs cont比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。5组血清sPD-L1水平及FVC、FEV1、MMEF、Dmin、sGrs比较,CA急性期组＜CVA急性期组＜CA缓解期组＜CVA缓解期组＜对照组（均P＜0.05）,5组血清TLR4、sICAM-1水平比较,CA急性期组＞CVA急性期组＞CA缓解期组＞CVA缓解期组＞对照组（均P＜0.05）。经Pearson相关性分析,发现CVA患儿FVC、FEV1、MMEF及Dmin、sGrs与血清sPD-L1水平呈显著正相关（P＜0.05）,与血清TLR4和sICAM-1水平呈显著负相关（P＜0.05）。 结论 血清sPD-L1、TLR4和sICAM-1水平与CVA患儿肺功能、气道反应性及敏感性相关,对判断病情发展有利。     

转移性结直肠癌抗EGFR治疗耐药机制的研究进展

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)是转移性结直肠癌(metastatic colorectal cancer, mCRC)的主要治疗靶点之一,然而抗EGFR治疗的耐药一直是亟待解决的临床难题。肿瘤细胞本身EGFR相关信号通路异常激活,基因组不稳定性等遗传学或表观遗传学改变是引发耐药最常见的机制,近期也有研究发现肿瘤微环境中细胞丰度和细胞因子的变化等也是引发抗EGFR治疗耐药的重要机制。我们将从肿瘤细胞和肿瘤微环境两个方面,对mCRC抗EGFR治疗的耐药机制进行综述。     

泌乳素瘤多巴胺受体激动剂治疗相关冲动控制障碍的诊疗进展

泌乳素瘤是最常见的功能性垂体腺瘤,首选多巴胺受体激动剂作为一线治疗方案。在接受多巴胺受体激动剂治疗的泌乳素瘤患者中可能出现各种类型的冲动控制障碍(impulse control disorders,ICDs),如病理性赌博、强迫性购物、性欲亢进、强迫性进食等。这些不良反应会对患者的工作和生活造成严重的影响。然而目前国内缺少相关研究报道,内分泌学界对冲动控制障碍的临床表现、诊断及治疗缺乏全面的认识。本文就泌乳素瘤中ICDs的发生比例、发生机制、危险因素、诊断及治疗等方面展开综述,以深入了解泌乳素瘤多巴胺受体激动剂治疗相关ICDs,为今后在临床诊治中筛查识别及诊治提供帮助。     

天麻素注射液通过NGF/TrkA通路减轻大鼠脑缺血所致肺损伤

目的 基于神经生长因子（NGF）/酪氨酸激酶受体A（TrkA）通路探讨天麻素注射液治疗局灶性脑缺血致肺损伤大鼠的作用机制。方法 将40只SD大鼠随机分为4组：正常组、假手术组、模型组和天麻素治疗组（10只/组）。采用栓塞大鼠右侧大脑中动脉复制局灶性脑缺血模型,造模成功后,用天麻素注射液腹腔注射10 mg/kg,1次/d,持续14 d;假手术组和模型组大鼠不予治疗。治疗结束后,测定大鼠肺组织湿/干重比值,HE染色检测肺组织病理变化,ELISA法检测动脉血液中炎性因子（IL-10、TNF-α）的含量,Western blot检测肺组织NF-κB p65、TNF-α的表达,免疫组织化学染色法及蛋白质免疫印迹试验检测肺组织NGF、TrkA的表达。结果 与正常组和假手术组相比,模型组呈现出明显的炎症性肺损伤病理表型,肺湿/干重比值增加（P<0.01）,动脉血中TNF-α浓度增高（P<0.01）,肺组织内NF-κB p65（P<0.01）、TNF-α（P<0.01）、NGF（P<0.05）和TrkA（P<0.05）蛋白表达水平上升;与模型组相比,天麻素治疗组肺部炎性病理变化减轻,肺湿/干重比值降低（P<0.05）,动脉血中TNF-α浓度降低（P<0.01）,IL-10浓度增高（P<0.01）,肺组织内NF-κB p65和TNF-α蛋白表达水平降低（P<0.05）,肺组织内NGF和TrkA蛋白表达水平增加（P<0.05）。结论 脑缺血可引起炎症性肺损伤,NGF/TrkA通路可能参与了炎症反应的发生过程;天麻素注射液可减轻脑缺血大鼠的肺损伤,其机制可能与NGF/TrkA通路激活抗炎途径有关。     

类风湿关节炎血清学标志物的筛选：基于细胞因子蛋白芯片

目的 探讨多项血清中细胞因子及可溶性细胞因子受体蛋白在类风湿关节炎临床诊断中的应用价值。方法 选择2015年~2019年在本院确诊为类风湿关节炎（RA）的患者59例作为RA组,并以在我院接受定期体检的年龄和性别匹配的健康受试者46例作为健康对照组。通过人细胞因子蛋白芯片检测其中5例RA组及5例健康对照组血清样本,选取4种差异表达细胞因子LIMPII、ROBO3、Periostin、IGFBP-4及可溶性受体蛋白2B4、Tie-2,于另外54例RA组及41例健康对照组血清样本中,对其六者血清水平进行 ELISA验证。Spearman 相关分析检测细胞因子及可溶性细胞因子受体蛋白与临床指标（包括：类风湿因子（RF）、红细胞沉降率（ESR）、C反应蛋白（CRP）、疾病活动评分（DAS28）及健康评估问卷（HAQ））的关系;受试者工作特征曲线（ROC）分析评估其诊断价值。结果 与健康对照相比,2B4、LIMPII、Tie-2、ROBO3、Periostin和IGFBP-4在RA血清中的表达显著升高（P<0.01）。同时,RA血清中LIMPII、ROBO3和Periostin血清水平与类风湿因子、C反应蛋白、疾病活动评分及健康评估问卷等反映疾病活动程度评价指标正相关（P<0.01）。血清2B4、LIMPⅡ、Periostin、ROBO3、IGFBP-4和Tie-2表达水平均对RA的诊断有显著意义（P<0.05）,其中2B4曲线下面积为最大（AUC：0.861,P<0.001）,其次依顺序LIMPII、ROBO3、Periostin、Tie-2、 和IGFBP-4。结论 血清LIMPII、ROBO3和Periostin的表达水平可反映RA的疾病活动度,此外血清2B4、LIMPⅡ、Periostin、ROBO3、IGFBP-4和Tie-2可能作为RA的诊断的生物标记物。     

阻塞性睡眠呼吸暂停大鼠海马区HMGB1、 TLR4、NF-κB的变化

目的 探讨阻塞性睡眠呼吸暂停大鼠海马区HMGB1、TLR4、NF-κB的表达变化。方法 将60只雄性SD大鼠随机分为对照组和模型组(各30只),经咽腔多点注射医用透明质酸钠凝胶制备OSAS大鼠模型。于造模后2、4、6周组通过HE染色观察海马CA1区神经细胞的病理形态,免疫组织化学染色观察海马CA1区HMGB1及TLR4的阳性表达,应用Western blot法检测海马CA1区HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白的表达水平。结果 HE染色结果显示,与对照组比较,模型组各期海马CA1区神经元排列紊乱,结构稀疏,核仁模糊不清,核固缩、裂解。免疫组化结果显示,实验组各期HMGB1及TLR4的表达较对照组各期均明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05)。Western blot法检测结果显示,与对照组各期比较,实验2、4、6周组HMGB1、TLR4、NF-κB表达均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 阻塞性睡眠呼吸暂停大鼠海马CA1区神经细胞损伤,并引起该区域HMGB1、TLR4及NF-κB的高表达。     

间歇性禁食对小鼠脑缺血再灌注 TLR4/NF-κB通路的作用

目的 探讨间歇性禁食对小鼠脑缺血再灌注损伤中TLR4/NF-κB通路的作用及对脑缺血再灌注损伤的保护机制。方法 KM小鼠45只平均随机分为假手术组(Sham组)、正常饮食组(CIRI组)和间歇性禁食组(IF组)。IF组造模前连续间歇性禁食14天,除Sham组外,其他各组构建小鼠脑缺血再灌注损伤模型,观察各组小鼠行为学变化,HE染色观察细胞形态,免疫组化法测定TLR4及NF-κB 阳性细胞的表达情况。结果 IF组神经功能缺损评分较CIRI组明显下降(P＜0.05),IF组TLR4及NF-κB阳性细胞表达较CIRI组明显下降(P＜0.05)。HE染色显示IF组缺血半暗带及海马区神经元细胞深染及皱缩较CIRI组明显减轻,细胞形态明显改善。结论 间歇性禁食对小鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用可能与减轻炎症,抑制TLR4及NF-κB的表达有关。     

吡格列酮联合ARBs与单用ARBs治疗糖尿病肾病的临床疗效Meta分析

目的 系统评价糖尿病肾病(diabetic kidney disease, DKD)患者在血管紧张素受体拮抗剂(angiotensin receptorblockers,ARBs)治疗基础上联用吡格列酮的临床疗效。方法 检索CNKI、万方、EMBASE、PubMed、Cochrane Library等中外文数据库,纳入文献为随机对照实验。应用RevMan5.3对实验组(吡格列酮+ARBSs组)和对照组(ARBs常规治疗组)治疗DKD的临床疗效、尿蛋白、肾功能、糖代谢以及脂代谢情况进行Meta分析。结果 纳入7项随机对照实验,共592例患者,其中实验组298例,对照组294例。结果显示,对照组有效率显著低于实验组,且异质性较好。与对照组比较,实验组加用吡格列酮可显著降低DKD患者24h尿蛋白水平和尿蛋白排泄率,同时能改善肾功能,减少空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白和胆固醇水平(P均<0.05)。纳入文献报道均未发现严重不良反应。另外,尿素氮、甘油三酯和低密度脂蛋白结局指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 吡格列酮联合ARBs药物在改善DKD患者尿蛋白、肾功能、糖代谢和脂代谢等方面均优于单独应用常规ARBs药物,具有较好的临床疗效。