RASAL1表达及ras活性与胃肠道肿瘤临床关系的研究进展

大约有20％的人类肿瘤与ras的突变有关。ras蛋白调控细胞的一系列生物学行为,包括细胞增殖、分化、生存及凋亡等。ras蛋白属于小GTP结合蛋白,通过响应细胞外信号产生活性。RASAL1是一种rasGTP酶激活蛋白,可以抑制ras的活性。调节ras以及RASAL1的活性,可能是肿瘤靶向治疗的方向之一。检测ras以及RASAL1的活性有助于胃肠道肿瘤的早期诊断以及预后的判断。本文从ras的结构、功能及突变与肿瘤的关系,RASAL1作为ras的效应分子抑制ras的活性,ras、RASAL1与胃肠道肿瘤的关系三方面来综述了RASAL1表达及ras活性与胃肠道肿瘤临床关系的研究进展。     

蛋白质组学技术在高血压领域的应用

高血压病是临床常见病之一,随着人类基因组计划的完成,心血管研究趋向于绘制一幅分子生物学“疾病基因图谱”.蛋白质组学的应用,将基因分析和病理分析串联起来[1],现就蛋白质组学在高血压领域的应用总结如下.1 蛋白质组以及蛋白质组学的概念蛋白质组的概念由澳大利亚Wilkins和Willians于1994年提出,指的是由一个基因组所表达的全部蛋白质.蛋白质广泛参与细胞的功能及调节,蛋白质组决定细胞乃至组织和器官的表型.不论是处于正常状态还是急慢性疾病状态下[2].     

蛋白质间相互作用的研究策略

病毒感染肝细胞后,病毒的核酸、蛋白与肝细胞的核酸、蛋白等生物大分子之间的相互作用是病毒致病的主要分子机制之一。研究蛋白的功能,常常通过改变蛋白的表达水平,观察细胞的生物学特性的变化,来研究蛋白相应的生物学功能。近年来,基因和蛋白质结构的分子生物学技术与计算机分析技术结合起来,形成了目前极具潜力的新兴交叉学科-生物信息学技术。     

2型糖尿病患者血清炎性因子与颈动脉粥样硬化的相关性研究

目的 研究2型塘尿病患者血清炎性因子水平与颈动脉粥样硬化的关系.方法 选择124例2型糖尿病患者,采用酶联免疫吸附法测定血清内皮细胞猫附分子1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）,E选择素、白细胞介素6（IL-6）和C反应蛋白（CRP）水平;按颈动脉超声检查结果将糖尿病患者分为颈动脉正常组（38例）、颈动脉增厚组（40例）和颈动脉斑块组（46例）.选择40例健康体检者作为对照组,比较各组血清炎性因子水平.结果 ①颈动脉正常组血清ICAM-1,IL-6及CRP较对照组升高,颈动脉增厚组ICAM-1、VCAM-1、IL-6及CRP水平高于颈动脉正常组,颈动脉斑块组ICAM-1、VCAM-1、E选择素高于颈动脉增厚组,上述指标各组差异均有统计学意义,P 〈0.05,或P〈0.01.②相关性分析显示,颈动脉内-中膜厚度（IMT）增厚程度与糖化血红蛋白（HbAlc）（r=0.472）、ICAM-1（r=0.501）、VCAM-1（r = 0.484）、E选择素（r＝0.289）、IL-6（r=0.425）及CRP（r=0.381）呈正相关.患者HbAlc与ICAM-1、VCAM-1、IL-6及CRP呈正相关.ICAM-1、VCAM-1、E选择素、IL-6、CRP间呈正相关,均P〈0.01或P〈0.05.结论 炎性反应参与了2型糖尿病患者颈动脉粥样硬化的发病过程,血清炎性因子水平可以在一定程度上反映糖尿病患者的颈动脉粥样硬化程度.     

银杏叶提取物对大鼠坐骨神经切断后HSP 70在脊髓与脊神经节中表达的影响

目的 研究周围神经损伤后脊髓热休克蛋白(heat shock proteirns,HSPs)的表达变化,及银杏叶提取物EGb 761对其影响,探讨银杏叶提取物对周围神经损伤的保护机制.方法 取成年雄性SD大鼠144只,随机分成三组:对照组、坐骨神经切断组、坐骨神经切断+银杏叶提取物干预组[术后每天用EGb 761(100 mg·kg-1*d-1,溶于2 ml SAL)灌胃,直到取材],每组48只.术后6 h、12 h、1 d.2 d,4 d、7 d、14 d、28 d取L4～6节段脊髓节段,采用免疫组织化学方法检测HSP 70在脊髓前角及脊神经节中的表达.结果 正常大鼠脊髓与神经节中均有少量HSP 70表达,在坐骨神经切断后表达迅速增加,持续一段时间后又回到正常水平,用EGb 761干预后,HSP 70表达早期较未干预组表达低,后期表达增高,且表达持续时间长.结论 银杏叶提取物EGb 761可以增加神经损伤后HSP 70表达,可能是银杏叶提取物保护神经,促进神经再生作用的机制.     

四种热休克蛋白/肽混合物预防小鼠肉瘤发生、发展的作用研究

Objective To investigate the anti-tumor effects of the mixture of four heat shock protein/ peptides in mouse model for sarcoma. Methods The mixture of four subtype heat shock protein/peptides were extracted from mouse sarcoma cell line S180 and MCA-207 by molecular chromatography Sephacryl S-200HR and identified by SDA-PAGE and Western blot. Balb/c mice were immunized by the mixed heat shock protein/peptides with different dose, and then S180 and MCA-207 sarcoma cell line was wafted after vaccine in Balb/c or C57 mice. The disease-free survival and tumor growth inhibition rates were examined. Immune response eliciat by heat shock protein/peptides were detected. Sub-group of T lymphocyte was as-sessed by FACS; CTL by lactate dehydrogenase release assay anti IFN-γ by ELISPOT assay. Results The mixture of heat shock pretein/peptides and HSP-60, HSP-70, Gp-96 were isolated by chromatography and affinity chromatography separately. The mice vaccinated by the mixture of heat shock protein/peptides has the most protective results. In S180 model, the disease-free survival for tumor was 41.1%, the tumor growth inhibition rates was 83.3%. In MCA-207 model, the disease-free survival was 50.0%, the tumor growth inhi-bition rates was 79.0%. After immunization, CD8+, Nk cell, and IFN-γ were all increased. CTL was 42.4% (B/T-=40). Conclusion These animal vaccination/immunization strategies show that the mixture of heat shock protein/peptides as vaccine can induce immuno-activity against sarcoma and reduce tumor burden pro-phylactically, it may be possible to develop a specialized sarcoma vaccine for clinical treatments.     

PI3K-Akt-eNOS信号转导通路在吗啡促人脐静脉内皮细胞一氧化氮合成中的作用

目的 评价磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶-内皮型一氧化氮合酶(PI3K-Akt-eNOS)信号转导通路在吗啡对促人脐静脉内皮细胞一氧化氮(NO)合成中的作用.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,实验Ⅰ:人脐静脉内皮细胞随机分为4组,每组6孔:C组和M1～3组,C组不予任何处理;M1～3组加入吗啡,终浓度为1 μmol/L,分别孵育3、6和12 h,随后测定NO含量;实验Ⅱ:人脐静脉内皮细胞随机分为4组,每组6孔:C组和M1～3组,C组不予任何处理;M1～3组加入吗啡,终浓度分别为0.01、1和100 μmol/L,孵育6 h,随后测定NO含量;实验Ⅲ:人脐静脉内皮细胞随机分为5组,每组6孔:C组、M组、MW组、MS组和ML组,C组不予任何处理;M组加入吗啡,终浓度1 μmol/L;MW组先加入wortmannin(PI3K特异性抑制剂),15 min后加入吗啡,终浓度分别为5、1μmol/L;MS组先加入SH-5(Akt特异性抑制剂),15 rain后加入吗啡,终浓度分别为10、1 μmol/L;ML组先加入L-NAME(eNOS特异性抑制剂),15 min后加入吗啡,终浓度分别为0.5、1 μmol/L,各组孵育6 h后,测定NO含量.结果 实验Ⅰ结果 :随吗啡孵育时间延长,促脐静脉内皮细胞NO合成的作用增强(P<0.05);实验Ⅱ结果 :随吗啡浓度升高,促脐静脉内皮细胞NO合成的作用增强(P<0.05);实验Ⅲ结果 :与C组比较,M组人脐静脉内皮细胞NO含量升高(P<0.05),MW组、MS组和ML组差异无统计学意义(P>0.05);与M组比较,MW组、MS组和ML组人脐静脉内皮细胞NO含量降低(P<0.05).结论 吗啡促人脐静脉内皮细胞NO合成呈浓度和时间依赖性,其机制可能与激活PI3K-Akt-eNOS信号转导通路有关.     

破伤风毒素C端片段与心肌营养素-1融合蛋白表达、纯化与靶向神经元逆向运输及神经营养活性鉴定

目的 在BL21(DE3)大肠杆菌中表达破伤风毒素C端片段(TTC)与心肌营养素(CT)-1融合蛋白并纯化.探讨TTC转导结构域对CT-1的靶向神经元逆向运输活性与CT-1的神经营养活性.方法 异丙基-B-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导BL21(DE3)大肠杆菌表达CT-1/TTC融合蛋白,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)与WB法鉴定融合蛋白表达.制备SD大鼠坐骨神经损伤模型,分别经神经再生室、肌肉注射给药,自由放养1周后处死,4%多聚甲醛灌注固定,取脊髓L4～L6腰膨大标本,冰冻切片,免疫组织化学检测.制备新生6～7 d龄sD大鼠坐骨神经损伤模型,肌肉注射CT-1/TTC融合蛋白,自由放养1周后处死,4%多聚甲醛灌注固定,取L4～L6腰膨大标本,冰冻切片,尼氏染色计数脊髓前角运动神经元.结果 原核表达目的 蛋白CT-1/TTC表达量占全菌蛋白总量的15%,以可溶性蛋白为主.通过谷胱甘肽S-转移酶(GST)标签亲和纯化获得2.7 g/L的CT-1/TTC重组融合蛋白.免疫组织化学于脊髓腰膨大检测到CT-1/TTC融合蛋白.坐骨神经损伤后,脊髓L4～L6腰膨大前角运动神经元计数较CT-1/TTC融合蛋白处理组减少,存活率下降.结论 基因重组CT-1/TTC蛋白在大肠杆菌中获得了表达和纯化,所获得的融合蛋白有靶向性脊髓神经元细胞的活性和对损伤后运动神经元的神经营养活性.     

实验性坐骨神经痛中辣椒素敏感初级传入纤维的作用

目的 通过局部破坏坐骨神经中辣椒素敏感传人纤维(CSPA),确定CSPA在自体椎间盘直接压迫L5神经根所诱导的机械刺激痛觉过敏的作用.方法 取大鼠自体尾部椎间盘组织放置在L5神经根下,造成对L5神经根的直接压迫,建立椎间盘突出致坐骨神经疼痛动物模型.同时暴露大鼠左侧坐骨神经,给予辣椒素溶液或溶媒处理.术前及术后不同的时间点测量大鼠双侧后足底机械刺激疼痛阈值的变化.在3周当机械刺激疼痛阈值降到最低时,利用免疫组织化学染色方法,测定脊髓后角中c-fos蛋白空间表达变化.结果 用辣椒素处理坐骨神经,完全阻止了椎间盘压迫神经根所诱致的机械刺激疼痛阈值的降低.椎间盘直接压迫L5神经根能够诱导后角中c-fos蛋白表达,而辣椒素处理坐骨神经能够抑制后角中c-fos蛋白的表达.结论 主要终止于脊髓后角浅层的CSPA纤维,可能在新的坐骨神经疼痛动物模型机械刺激痛觉过敏的发生中起着关键作用.     

白细胞介素6对体外培养人脐动脉平滑肌细胞成骨样转化、钙化的影响

目的 研究白细胞介素6（IL-6）对体外培养人脐动脉平滑肌细胞（HUASMC）成骨样转化、钙化的作用及可能的信号通路。 方法 组织植块法原代培养HUASMC。培养基加入不同浓度重组人IL-6（rhIL-6）孵育细胞,设空白对照组。茜素红S钙沉积染色及甲氧-酚酞络合酮法检测细胞层钙盐含量。实时定量PCR、荧光定量法以及Western印迹法分别检测骨特异性碱性磷酸酶（BAP）、骨桥蛋白（OPN）、骨形成蛋白2（BMP２）和骨保护素（OPG）基因以及蛋白表达。凝胶迁移滞后实验（EMSA）检测核心结合因子α1亚基（Cbfα1）的结合活力,以及分别应用p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）抑制剂SB203580和蛋白激酶C二氢神经鞘氨醇（DHC）后Cbfα1的结合活力。 结果 rhIL-6 50 μg/L诱导12 d,细胞基质层茜素红S染色阳性。与对照组相比,细胞层钙盐含量在rhIL-6 10 μg/L组刺激9 d[（0.76±0.02） mmol/g蛋白]和12 d[（1.54±0.11） mmol/g蛋白]升高,50 μg/L组刺激6 d[（1.81±0.03） mmol/g蛋白]、9 d[（2.08±0.10） mmol/g蛋白]和12 d[（3.22±0.18） mmol/g蛋白]升高,并呈时间、剂量依赖地增加。rhIL-6 10 μg/L刺激12 h,BMP2 mRNA（3.04±0.07）和蛋白（8.14±0.41）及BAP mRNA（2.51±0.11）和蛋白（3.96±0.54）表达上调;刺激72 h,OPN mRNA（3.14±0.32）和蛋白（2.57±0.43）水平及OPG mRNA（4.06±0.24）和蛋白（3.46±0.34）水平上调。rhIL-6刺激6 h,Cbfα1结合活力增加;DHC能够部分抑制rhIL-6诱导的Cbfα1结合活力增加,SB203580没有明显作用。 结论 IL-6体外能够诱导HUASMC发生钙化和成骨样转分化,这可能是临床观察到IL-6与血管钙化相关的机制之一。IL-6的这一作用可能与细胞内蛋白激酶C通路的活化有关。