miR-27a-3p靶向调控Yes相关蛋白1促进人牙髓干细胞成骨分化

目的 探讨miR-27a-3p靶向调控Yes相关蛋白1(YAP1)基因对人牙髓干细胞(hDPSCs)成骨分化的影响.方法 体外分离培养hDPSCs细胞,将miR-27a-3p模拟物(miR-27a-3p mimics,过表达组)、miR-27a-3p抑制剂(miR-27a-3p inhibitor,敲低组)、miR-NC(对照组)分别转染至hDP-SCs细胞中,检测miR-27a-3p表达水平的改变对YAP1表达的影响.采用TargetScan数据库检索miR-27a-3p的靶基因.应用双荧光素酶报告基因实验验证miR-27a-3p和YAP1的靶向关系.将miR-27a-3p mimics、miR-NC转染到hDPSCs特定时间后收集细胞,应用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)、Western blot等检测经典的成骨标志物骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、成骨转录因子-2(RUNX2)、骨桥蛋白(OPN)、YAP1 mRNA和蛋白表达水平.应用MTT比色法验证miR-27a-3p和YAP1对细胞增殖活性的影响.结果 过表达组hDPSCs细胞中miR-27a-3p的表达水平较对照组显著上调(P＜0.05),YAP1 mRNA和蛋白的表达水平下调(P＜0.05).而敲低组miR-27a-3p的表达水平较对照组明显下降(P＜0.05),YAP1 mRNA和蛋白的表达水平增高(P＜0.05).生物信息学分析表明,miR-27a-3p作用于YAP1的3'UTR区,双荧光素酶报告基因实验验证了YAP1是miR-27a-3p的靶基因.qRT-PCR、Western blot检测显示,与对照组相比,miR-27a-3p过表达时hDPSCs中BMP-2、RUNX2、OPN mRNA和蛋白的表达水平上调(P＜0.05).MTT检测显示,miR-27a-3p过表达可明显上调hDPSCs增殖率(P＜0.05),而YAP1过表达则会降低hDPSCs的增殖率(P＜0.05).结论 miR-27a-3p可能通过靶向调控YAP1促进hDPSCs成骨分化.     

原发性肝癌组织中PKM2、COX2及IAPs的表达及其与放疗敏感性的关系分析

目的 探究原发性肝癌患者癌组织中M2型丙酮酸激酶(PKM2)、环氧合酶2(COX2)及凋亡蛋白抑制因子(IAPs)的表达及其与放疗敏感性的关系.方法 选取接受三维适形放疗的原发性肝癌患者105例,经肝脏穿刺活检采集肝癌组织,采用免疫组化法检测肝癌组织中PKM2、COX2及IAPs家族[X关联凋亡抑制因子(XIAP)、细胞内凋亡抑制蛋白1(cIAP-1)]蛋白的表达,比较不同放疗效果和敏感性患者癌组织中PKM2、COX2、XIAP及cIAP-1蛋白表达的差异,并分析上述蛋白表达与患者预后的关系.结果 105例患者肝癌组织中PKM2、COX2、XIAP及cIAP-1蛋白表达阳性率分别为81.90％、74.28％、85.71％及82.86％;COX2、XIAP蛋白阳性表达者治疗有效率与阴性者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);放疗敏感患者临床分期、分化程度、肿瘤直径、肝癌组织中PKM2、COX2、XIAP及cIAP-1蛋白表达情况与放疗不敏感者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);高临床分期、低分化程度、COX2、XIAP阳性表达是患者放疗不敏感的独立危险因素(P＜0.05);XIAP阳性表达者复发率和转移率与阴性表达者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 原发性肝癌患者癌组织中PKM2、COX2、XI-AP及cIAP-1阳性率高,其中COX2、XIAP蛋白表达与患者放疗效果、敏感性密切相关,XIAP蛋白表达还与患者复发转移有关.     

脊髓集落刺激因子1在大鼠吗啡镇痛耐受中的作用

目的观察脊髓集落刺激因子1（CSF1）在大鼠吗啡镇痛耐受过程中的作用。方法成功鞘内置管SD大鼠随机分为0.9%氯化钠溶液组（NS组）、吗啡组（MOR组）、CSF1R抑制剂组（PLX3397组）、CSF1R抑制剂+吗啡组（PLX3397+MOR组）,各15只。MOR组和PLX3397+MOR组连续7 d鞘内注射吗啡15 μg建立吗啡耐受动物模型,PLX3397+MOR组同时灌胃给予CSF1R抑制剂PLX3397（290 mg/kg）;NS组鞘内注射及灌胃给予0.9%氯化钠溶液,PLX3397组鞘内注射0.9%氯化钠溶液,灌胃给予CSF1R抑制剂PLX3397。采用50 ℃热水甩尾潜伏期法和机械反射阈值法观察CSF1在吗啡的镇痛耐受中作用;应用免疫组织荧光染色法检测脊髓背角小胶质细胞激活标志物IBA1表达变化;Western blotting法检测吗啡对腰段脊髓CSF1表达的影响。结果连续7 d鞘内注射吗啡,MOR组大鼠最大镇痛效应百分率（percent of maximal possible potential effect,%MPE）进行性降低（P < 0.05）;而与MOR组比较,PLX3397+MOR组大鼠注射吗啡3、5、7 d时%MPE均增加（P < 0.05）;PLX3397组与NS组各时点%MPE差异均无统计学意义（P>0.05）。注射吗啡7 d后,MOR组小胶质细胞标志物IBA-1在大鼠腰段脊髓背角表达较NS组增加（P < 0.05）,MOR+PLX3397组大鼠IBA-1表达较MOR组减少（P < 0.05）;MOR组和MOR+PLX3397组大鼠腰段脊髓CSF1表达均较NS组增加（P < 0.05）,2组CSF1表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论脊髓CSF1参与吗啡耐受形成,抑制脊髓CSF1表达可能为临床治疗吗啡镇痛耐受提供一种新的作用靶点。     

免疫检查点HHLA2和PD-L1在肝癌组织中的表达及临床意义

目的考察免疫检查点人内源性逆转录病毒-H长端重复相关蛋白2（human endogenous retrovirus-H long terminal repeat-associating protein 2,HHLA2）和程序性死亡配体-1（programmed death ligand-1,PD-L1）在肝细胞癌组织中的表达,分析两者之间表达的相关性及与临床病理特征和临床预后关系。方法应用免疫组织化学染色方法检测90例肝癌组织及相对应癌旁组织中HHLA2和PD-L1的表达,分析HHLA2和PD-L1在肝癌组织中表达的相关性,并分析HHLA2和PD-L1的表达与肝癌的临床分期、血清甲胎蛋白（AFP）水平、病理分级、慢性乙型肝炎病毒感染、血管侵犯等临床病理参数和总生存时间（OS）之间的关系。结果在肝癌组织中,HHLA2阳性表达率（49/90,54.4%）高于癌旁组织（33/90,36.7%）,但差异无统计学意义（P>0.05）;PD-L1阳性表达率（52/90,57.7%）较癌旁组织（44/90,48.9%）差异无统计学意义（P>0.05）。HHLA2与PD-L1表达在肝癌组织中呈正相关关系（r=0.280,P < 0.05）。HHLA2在肝癌组织中的表达与肝癌病人年龄、性别、病理分级、血清AFP水平、血管侵犯无关,与临床分期、慢性乙型肝炎病毒感染有关（P < 0.05）。PD-L1的表达与肝癌病人年龄、性别、血清AFP水平、血管侵犯、慢性乙型肝炎病毒感染无关,与临床分期和病理分级有关（P < 0.05）。HHLA2与PD-L1阳性表达的肝癌病人中位OS同阴性表达病人比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论免疫检查点分子HHLA2与PD-L1在肝癌组织表达有升高趋势,两者之间表达呈正相关关系,HHLA2和PD-L1的表达状态与临床预后无关。HHLA2作为新型免疫检查点分子能否成为晚期肝癌未来潜在的治疗靶点仍需进一步探索研究。     

大黄酚通过激活NLRP3炎症小体诱导胃癌细胞焦亡的机制研究

目的探索大黄酚诱导人胃癌细胞焦亡的作用及其可能的作用机制。方法不同浓度大黄酚（0、5、10 μmol/L）和NLRP3抑制剂、caspase-1抑制剂先后处理人胃癌MKN28细胞,CCK-8法、克隆形成实验、流式细胞术检测细胞焦亡;实时荧光定量PCR检测焦亡、NLRP3炎症小体相关蛋白的mRNA水平;Western blotting检测焦亡、NLRP3炎症小体的蛋白表达水平。结果不同浓度的大黄酚（0、5、10 μmol/L）作用于MKN28细胞后,均降低了细胞存活率（P < 0.01）,并促进了细胞焦亡的发生（P < 0.01）。大黄酚呈剂量依赖性地上调胃癌MKN28细胞中NLRP3、caspase-1和白细胞介素-1β的mRNA以及蛋白表达水平（P < 0.01）。采用caspase-1抑制剂VX-765、NLPR3抑制剂MCC950抑制NLPR3炎症小体表达,可削弱大黄酚对细胞焦亡的诱导作用（P < 0.01）。结论大黄酚抑制人胃癌MKN28细胞增殖、促进LDH释放和caspase-1活性升高,诱导胃癌细胞焦亡,其作用机制与NLRP3/caspase-1通路密切相关。     

慢性阻塞性肺疾病212例支气管舒张试验

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)病人支气管舒张试验后的肺功能指标变化及意义。方法回顾性分析212例COPD病人临床资料,采用肺功能仪进行肺功能检查,支气管舒张试验对病人肺通气功能进行检查,并以改良英国医学研究学会呼吸困难指数(mMRC)评估呼吸困难严重程度。结果随COPD程度加重,病人mMRC值明显增加(P < 0.01);重度组和极重度组病人年龄均明显大于轻度和中度组(P < 0.01)。支气管舒张试验后COPD病人第1秒用力呼气容积(FEV1)和用力肺活量(FVC)均有不同程度增加,其中重度组和极重度组病人FVC改变值则均明显大于轻度和中度组(P < 0.01),病人FEV1和FVC改变率均随COPD程度加重而增加(P < 0.05~P < 0.01),而不同程度COPD病人FEV1改变值间差异无统计学意义(P>0.05)。COPD病人mMRC与年龄、FVC改变值及FVC改变率均呈明显正相关关系(r=0.267、0.825、0.330,P < 0.01),与FEV1呈明显负相关关系(r=-0.804,P < 0.01)。结论FEV1是评价COPD病人气流受限程度的指标,而支气管舒张试验前后FVC的变化可用于评估气体陷闭状态,气体陷闭与病人呼吸困难症状相关。     

miR-503-5p对IL-1β诱导的血管内皮细胞增殖、迁移、凋亡和黏附的影响

目的探讨miR-503-5p对白细胞介素1β（IL-1β）诱导的血管内皮细胞增殖、迁移、凋亡和黏附的影响和分子机制。方法将人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）分为NC组、IL-1β组、IL-1β+anti-miR-con组及IL-1β+anti-miR-503-5p组。分别采用噻唑蓝（MTT）法、黏附实验、流式细胞术、Transwell实验检测HUVECs增殖、黏附、凋亡和迁移能力。Western blotting检测细胞间黏附分子1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子1（VCAM-1）表达水平。结果与NC组比较,IL-1β组HUVECs细胞活力、迁移细胞数显著降低,细胞黏附数、凋亡率、ICAM-1和VCAM-1蛋白表达显著升高（P < 0.01）。与IL-1β+anti-miR-con组比较,IL-1β+anti-miR-503-5p组HUVECs细胞活力、迁移细胞数显著升高,细胞黏附数、凋亡率、ICAM-1和VCAM-1蛋白表达显著降低（P < 0.01）。结论抑制miR-503-5p表达可促进血管内皮细胞增殖和迁移,抑制细胞黏附和凋亡,其机制可能与抑制ICAM-1和VCAM-1表达有关。