β_1肾上腺素能受体肽段免疫家兔后心脏超声心动图改变的研究

目的 :研究β1 肾上腺素能受体抗体在扩张性心肌病发病中的作用。方法 :将 14只新西兰兔随机分为两组 ,免疫组和对照组。免疫组动物每月注射一次 β1 受体肽段抗原和佐剂的混和物 ,而对照组除用等量生理盐水替代抗原溶液外 ,给药程序同免疫组。免疫前后采血测定血清中 β1 受体抗体效价 ,于 M型超声下比较免疫后两组动物心脏收缩功能改变。结果 :免疫前两组动物 β1 受体抗体效价均在 1∶ 10 0以下 ,M型超声心动图下左室后壁收缩末期厚度(L VPWS)及短轴缩短率 (FS)无明显差异。免疫后免疫组效价明显增高达 1∶ 12 80 0以上 ,而对照组无明显改变。于免疫第 3月 ,免疫组 FS及 L VPWS此两项指标均明显高于对照组。结论 :β1 受体抗体可能对心脏有β1 受体激动样作用。     

心衰大鼠微颗粒对内皮细胞迁移的抑制作用

目的 检测慢性心力衰竭（HF）大鼠循环微颗粒（MPs）数量及蛋白浓度的变化并观察其对人脐静脉内皮细胞迁移能力的影响。 方法 将SD大鼠随机分为手术组（n=15）和伪手术组（n=6）,采用腹主动脉缩窄法建立慢性HF大鼠模型,术后12周采用超声心动图检测心脏功能,HE染色检测心脏形态学改变。应用流式细胞术检测大鼠的总循环MPs及膜联蛋白（Annexin）Ⅴ阳性的MPs数量,BCA法检测总循环MPs的蛋白量。划痕实验观察各组大鼠MPs对内皮细胞的影响。 结果 ①术后12周,与伪手术组大鼠相比,手术组大鼠心功能下降,表现为左室收缩末期内径（LVIDs）与左室舒张末期内径（LVIDd）显著增大（均P<0.01）,左室射血分数（LVEF）与左室短轴缩短率（LVFS）明显减小（均P<0.01）。HE染色结果显示,手术组大鼠的心肌结构紊乱,表明慢性HF大鼠模型建立成功。②手术组大鼠总循环MPs及Annexin Ⅴ（+） MPs的数量和总循环MPs的蛋白量显著高于伪手术组（均P<0.01）。③手术组大鼠循环MPs作用内皮细胞24 h后,其迁移能力下降（P<0.05）;孵育36 h和48 h时,细胞迁移率显著下降（P<0.01）。 结论 在慢性HF大鼠模型中循环MPs的数量及蛋白量显著升高,HF大鼠的循环MPs可抑制内皮细胞的迁移功能。     

Na+/Ca2+交换体α-2(807-844)抗体的制备及其对大鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换电流的抑制作用

目的 在制备和纯化抗心肌Na+/Ca2+交换体α-2(807- 844)肽段抗体的基础上,观察抗体对大鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换电流及L型钙电流(ICa)、瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(Ik1)的影响.方法 利用人工合成的α-2(807-844)多肽免疫兔制备抗α-2(807- 844)抗体,抗血清经Protein A亲和柱纯化,利用全细胞膜片钳技术观察纯化后抗体对心肌细胞Na+/Ca2+交换电流(INa/Ca)、L型钙电流(ICa)、瞬时外向钾电流(Ito)和内向整流钾电流(Ik1)的影响.结果 经主动免疫,抗Na+/Ca2+交换体α- 2(840-877)抗血清效价达1∶243000,纯化后抗α-2(840- 877)抗体浓度为7.21 mg/mL.纯化后的抗体在SDS - PAGE时出现清晰的2条带,其分子量分别为25 kD和50 kD左右.在1 nmol/L～104 nmol/L浓度范围内,抗α-2抗体对成年大鼠心肌细胞外向和内向Na+/Ca2+变换电流均表现为剂量依赖性的抑制作用；对Ito和Ik1则均未见明显影响.此外,104 nmol/L该抗体对L型钙电流亦具有抑制作用.通过氨基酸序列比对发现,α- 2(807 - 844)肽段与L型钙通道第2结构域孔环(697～730位氨基酸)序列相似度为23.7％,可能是抗体对L型钙通道出现交叉反应的原因.结论 在1 nmol/L～103 nmol/L浓度范围内,抗心肌Na+/Ca2+变换体α-2(807- 844)抗体可特异性抑制大鼠心肌Na+/Ca2+变换活动；对L型钙通道电流、瞬时外向钾通道电流和内向整流钾通道电流均未见明显影响.     

抗钠-钙交换体α-1抗体对Langendorff灌流大鼠心脏功能的影响

目的 研究抗钠-钙交换体（NCX）α-1（117-137）肽段抗体对离体灌流大鼠心脏活动的影响,初步探讨其作用机制.方法 用合成的NCXα-1（117-137）重复序列肽段主动免疫大鼠获取抗体,经纯化后通过Langendorff离体灌流装置观察其对心功能的效应;利用膜片钳系统观察抗体对单个心肌细胞钠-钙交换电流的影响.结果 免疫后大鼠体内抗α-1（117-137）抗血清滴度明显增加,纯化后抗体浓度为1.0 mg/mL,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结果只显示一条带,分子量与IgG标准品一致.在浓度为10 nmol/L、20 nmol/L和40 nmol/L 时,该抗体可剂量依赖性地降低离体灌流心脏左室发展压（LVDP）、左室压最大上升/下降速率（±dP/dtmax）.进一步研究发现,在10 nmol/L～40 nmol/L浓度范围内,抗NCX α-1抗体可剂量依赖性地抑制外向和内向钠-钙交换电流.结论 抗NCXα-1（117-137）抗体对心肌收缩和舒张均表现出抑制效应,这一作用与其抑制钠-钙交换活动有关.     

双波长比例法测定单细胞活性氧探析

目的建立双波长比例法测定单细胞活性氧的方法。方法①酶法急性分离成年大鼠心室肌细胞,用离子影像系统测定荧光信号,确定荧光强度值变化相反的两个激发光波长。②BPS-4装置灌流心肌细胞,模拟心肌缺血/再灌注模型及再灌注时应用还原型谷胱甘肽,用双波长比例法测定细胞内活性氧含量变化,验证此法。结果①荧光强度值最大和最小的激发光波长分别是:480 nm和420nm,以F480/F420的比值表示活性氧的含量。②心室肌细胞在模拟缺血期和恢复再灌注期的相对F480/F420分别为缺血前的(115.27±4.52)%和(116.99±3.99)%,在再灌注期给予GSH,则活性氧含量降为缺血前的(101.14±3.20)%。结论双波长比例法可用于测定细胞内活性氧。     

高血压患者血清抗α_1肾上腺素受体自身抗体的分布特征及其缩血管作用

目的探讨高血压患者血清中抗α1肾上腺素受体自身抗体(α1-AA)的分布特征及其病理意义。方法采用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术,检测86例高血压患者与100名健康对照者血清中α1-AA的滴度和阳性率;利用亲和层析法纯化α1-AA阳性和阴性患者血清中的IgGs,观察该抗体IgGs对大鼠离体胸主动脉血管环张力的影响。结果高血压患者血清中α1-AA的阳性率和平均抗体滴度分别为49%和1∶(93.5±2.4),明显高于健康对照组的9%和1∶(16.6±3.8),差异有统计学意义(P<0.01)。纯化的抗体阳性IgGs(10-9～10-5mol/L)能够浓度依赖性增加大鼠离体胸主动脉血管环的张力[收缩幅度从(19.3±2.2)%增加到(137.5±4.6)%,P<0.01],这种作用与α1-肾上腺素受体(AR)激动剂去氧肾上腺素的缩血管效应相类似,并且呈现非血管内皮依赖性,同时可被α1-AR拮抗剂哌唑嗪所阻断,以及被α1抗原肽段中和。结论高血压患者血清中α1-AA的分布呈高阳性率与高滴度的特征,该抗体具有激动剂样增加离体胸主动脉血管环张力的作用,并且为非内皮依赖性,可能是通过与血管平滑肌细胞的α1-AR结合所实现。     

RS67506对肠道运动的影响

目的研究5-羟色胺(5-HT)4受体激动剂RS67506对小鼠肠推进运动和对大鼠离体小肠肌条运动的影响。方法应用炭末法和张力换能器分别观察RS67506对小鼠肠推进运动和对大鼠离体小肠肌条的平均收缩幅度、收缩频率和静息张力的影响,并与Cisapride的作用相比较。结果 RS67506在小剂量时对小鼠肠推进运动无明显作用,中剂量和大剂量时作用明显,并且RS67506剂量依赖性增强肌条的收缩幅度,但对肌条收缩频率和静息张力无明显作用。结论 RS67506在剂量稍大的条件下,具有与Cisapride相当的对小鼠肠推进运动的作用。它对大鼠离体小肠肌条的收缩幅度与Cisapride相似,具有剂量依赖性增强作用,如果事先加入5-HT4受体拮抗剂RS23597-190,RS67506无明显作用,这表明RS67506对平滑肌肌条的作用是通过5-HT4受体完成的。     

二-(4-氯苯甲酰异羟肟酸)二正丁基合锡(DBDCT)对大鼠离体胸主动脉环的舒张作用及机制

目的观察抗肿瘤化合物二-(4-氯苯甲酰异羟肟酸)二正丁基合锡(DBDCT)对去甲肾上腺素和氯化钾预收缩健康成年大鼠胸主动脉环的舒张作用,并探讨其作用机制。方法应用离体血管环技术观察DBDCT对大鼠胸主动脉环张力的作用,然后使用一氧化氮合酶(eNOS)抑制剂L-NAME、环氧合酶抑制剂吲哚美辛(Indo)和不同的钾通道阻滞剂预孵后观察DBDCT对血管环张力改变的影响,并观察DBDCT对NE诱发的内钙释放和CaCl2引起的外钙内流的影响。结果 DBDCT对去甲肾上腺素(NE,10-6mol·L-1)或氯化钾(KCl,60 mmol·L-1)预收缩的内皮完整和去内皮大鼠离体胸主动脉环均产生明显的舒张作用,与溶剂组相比差异有统计学意义(P<0.01);但DBDCT对内皮完整与去内皮胸主动脉环作用差异无统计学意义。预先用L-NAME、Indo、KV通道阻断剂四氨基吡啶(4-AP)、KATP通道阻断剂格列苯脲(Gli)孵浴后,DBDCT对NE和KCl预收缩的血管张力的改变与无阻断药时比较,均差异无统计学意义(P>0.05);预先用KCa通道阻断剂四乙胺(TEA)、Kir通道阻断剂氯化钡(BaCl2)孵浴后,DBDCT的舒张血管作用减弱,与无阻断药比较差异有统计学意义(P<0.05);且DBDCT对NE诱发的内钙释放和外钙内流引起的收缩均有明显的抑制作用。结论 DBDCT可明显降低由NE和KCl诱发的血管环张力的升高,且其作用与内皮生成的NO和PGI2均无关,而可能是直接作用于血管平滑肌,激活KCa和Kir通道,抑制钙内流和肌浆网钙释放。     

离体大鼠心肌局部缺血/再灌注模型制备方法的改良

目的改进离体大鼠心肌局部缺血/再灌注损伤模型的制备方法。方法在传统造模的基础上进行改良,采用在结扎线下加一硬塑管打双结的方法,阻断冠状动脉左前降支,局部缺血30min,再灌注180min。分别测定改良组和传统组的心肌梗死面积、漏出液肌酸激酶(CK)活力。结果改良组梗死区/缺血危险区为(45±7)%、变异系数(CV)为15%,CK活力为(382±18)U/ml、CV为5%;传统组梗死区/缺血危险区为(43±11)%、CV为25%,CK活力为(364±30)U/ml、CV为8%。结论改进后的模型制作方法其心肌缺血稳定、可靠,技术难度低,提高了造模的成功率,较传统法具有显著的优越性。