基于器官系统的基础医学整合课程PBL案例编写体会——以泌尿系统为例

基于器官系统的基础医学整合课程中,PBL教学法是重要的教学形式,案例是PBL教学法的关键和核心。在案例编写过程中,应当做到将教学内容合理隐含其中,强化重点,有主题、有导向性,融入思政教育,情节引人入胜、逻辑缜密。编写者要熟悉教学目的、有一定的医学背景和文学功底,努力提高案例水平。     

NCXα1重复序列短肽主动免疫大鼠对心脏结构和功能的影响

目的:观察钠钙交换体(NCX)α1重复序列中胞外环124HNFTAGDLGPSTIVGSAAFNMF145合成肽段长期主动免疫大鼠对其心脏结构和功能的影响.方法:选用2月龄健康Wistar雄性大鼠,以NCXα1重复序列中胞外环124HNFTAGDLGPSTIVGSAAFNMF145合成肽段对其进行主动免疫,对照组给予同等剂量佐剂.连续免疫12周.用ELISA法监测抗体滴度.实验结束后经Langendorff离体心脏灌流方法检测其心脏功能(左心室主动发展压 LVSP-LVDP,收缩最大速率 +dp/dtmax,舒张最大速率-dp/dtmax).组织病理切片观察心室肌细胞的结构的变化.结果:免疫组所有大鼠均产生了较高浓度的特异性抗体;与对照组相比,免疫组大鼠心脏功能指标(LVSP-LVDP,+dp/dtmax,-dp/dtmax)均明显增强(P＜0.05).HE染色切片显示对照组心肌纤维排列整齐、致密、且纤维连续性较好.免疫组心肌纤维排列紊乱,部分可见肌原纤维断裂,细胞间有淋巴细胞浸润.结论:钠钙交换体(NCX)α1重复序列中胞外环124HNFTAGDLGPSTIVGSAAFNMF145合成肽段长期主动免疫大鼠可以同时加强心脏的收缩和舒张功能,但是长期高滴度的抗体存在可以造成心肌结构损伤.     

KB-R7943对心力衰竭家兔哇巴因诱发心律失常的抑制作用

目的 探讨钠-钙交换体抑制剂KB-R7943对哇巴因诱发心衰家兔心律失常的影响.方法 40只成年家兔随机分为5组：假手术组、心衰对照组、哇巴因组、哇巴因合并KB-R7943（1μmol/L）组和哇巴因合并KB-R7943（5μmol/L）组.心衰组、哇巴因组、哇巴因合并KB-R7943（1 μmol/L）组和哇巴因合并K.B-R7943（5 μmol/L）组使用主动脉瓣关闭不全联合腹主动脉缩窄的方法建立心衰模型.建模8周后超声检测心功能,并利用Langendorff离体心脏灌流方法检测家兔各项离体心功能指标.灌流哇巴因（5μmol/L,4ml）诱发家兔心衰心脏产生心律失常,观察KB-R7943对离体心衰家兔心律失常的影响.结果 ①超声结果显示,与假手术组相比,心衰对照组家兔左室射血分数（LVEF）、短轴缩短率（％FS）均明显降低（P＜0.05）.②离体条件下,心衰对照组家兔离体心脏左室发展压（LVDP）、心率（HR）、室内压最大上升速率（＋dp/dtmax）、室内压最大下降速率（-dp/dtmax）较假手术组均明显下降（P＜0.05）.③哇巴因组1h内总心律失常（TT）、室速（VT）、室颤（VF）持续时间较心衰对照组明显增加（P＜0.05）.④与哇巴因组比较,哇巴因联合应用KB-R7943组1h内TT、VT、VF持续时间明显减短（P＜0.05）;与1 μmol/L KB-R7943相比,5μmol/L KB-R7943可使哇巴因诱发TT和VT时间进一步缩短（P＜0.05）.结论 钠-钙交换体抑制剂KB-R7943可抑制哇巴因诱发心衰家兔心律失常的持续时间,且较高浓度（5 μmol/L）KB-R7943对哇巴因诱发心衰家兔心律失常的抑制作用更强.     

生理学教学中的两点体会

生理学是研究机体正常生命活动规律的科学，也是医学专业的重要基础课之一。结合生理学教学实践，主要介绍了生理教学中的两点体会：即恰当运用多媒体教学和密切联系实际。关于生理教学方式和方法是一门博大精深的学问，仍需广大教师尤其是年青教师深入探讨，以期进一步提高教学质量和教育水平。     

抗钠-钙交换体α-1和α-2重复序列抗体的制备和纯化

目的用人工合成的钠-钙交换体α-1和α-2重复序列作为抗原,制备并纯化抗α-1和α-2重复序列抗体.方法通过主动免疫大鼠,获得抗血清.采用酶联免疫吸附测定法(SA-ELISA) 测定抗体滴度,并将高滴度抗血清(≥1∶640)上样至HiTrap Protein G HP 进行亲和层析对抗体进行纯化.纯化效果用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,并采用Bradford蛋白质定量法对纯化后抗体进行定量.结果大鼠经主动免疫后,抗α-1抗血清滴度从免疫前的1∶(25.5±1.5)升高到1∶(905.1±2.2)(P＜0.01);抗α-2抗血清滴度从免疫前的1∶(26.4±1.5)升高到1∶(1 076.3±2.0)(P＜0.01).纯化后的抗α-1和抗α-2重复序列抗体电泳时都仅有一条带出现,分子量160 kDa左右,与IgG标准品相一致.用Bradford蛋白质定量法测得抗α-1和α-2抗体浓度分别为1.0 mg/ml和1.2 mg/ml. 结论本研究获得了高纯度、高滴度的抗α-1抗体,为下一步对其进行功能研究奠定了基础.     

抗钠-钙交换体α-1_((106-145))抗体对大鼠离体心功能的影响及其机制

目的观察1～103nmol·L-1抗钠-钙交换体(NCX)α-1(106-145)肽段抗体对离体大鼠心功能的影响并分析其作用机制。方法用化学合成的NCXα-1(106-145)肽段主动免疫新西兰大耳白兔制备并纯化抗体,利用Langendorff离体灌流系统观察其对大鼠离体心功能的影响;利用全细胞膜片钳技术观察其对心肌细胞钠-钙交换电流、L-型钙电流、瞬时外向钾电流和内向整流钾电流的影响。结果经主动免疫后兔体内抗α-1(106-145)抗血清滴度明显升高,Protein A纯化后抗体浓度为13.1 g.L-1。与对照组相比,1～10 nmol·L-1α-1抗体可使大鼠离体心脏左室发展压(LVDP)和左室压最大上升速率(+dp/dtmax)明显增加(P<0.01),并使左室压最大下降速率(-dp/dtmax)减小(P<0.01),且KB-R7943(2μmol·L-1)可使α-1抗体(1 nmol·L-1)的上述效应进一步增强。然而,102～103nmol·L-1α-1抗体则可使大鼠离体心脏LVDP、±dp/dtmax呈不同程度地下降(P<0.01)。全细胞膜片钳实验结果表明,在1～103nmol·L-1浓度范围内,抗α-1抗体对大鼠心肌细胞外向和内向Na+/Ca2+交换电流均表现出剂量依赖性的抑制效应,对瞬时外向钾电流和内向整流钾电流均无明显影响。此外,102～103nmol·L-1α-1抗体对L-型钙电流也具有抑制作用。结论低浓度α-1抗体(1～10 nmol·L-1)可明显增强心肌收缩,这一效应与其在低浓度时专一性抑制Na+/Ca2+交换电流有关;高浓度α-1抗体(102～103nmol·L-1)则可同时抑制心肌收缩和舒张,该作用与其同时抑制Na+/Ca2+交换电流和L-型钙电流有关。     

扎考必利对哇巴因诱发的成年大鼠心律失常的抑制作用

目的:观察内向整流钾通道激动剂扎考必利(zacopride)对哇巴因(ouabain)诱发的成年大鼠心律失常的影响,并探讨其电生理机制。方法:利用ouabain建立成年大鼠离体和在体心律失常模型,观察zacopride对各类心律失常的作用。应用全细胞膜片钳技术,观察zacopride对大鼠单个心室肌细胞内向整流钾电流(I_(K1))、静息膜电位(RMP)及延迟后除极(DADs)的影响。结果:浓度为1μmol/L的zacopride使ouabain诱发的离体心脏期前收缩个数、室速和室颤持续时间及发生率均显著降低(P0.05)。在麻醉大鼠,15μg/kg的zacopride使ouabain诱发的期前收缩个数、室速和室颤持续时间及发生率均显著降低(P0.05)。Ouabain使I_(K1)明显减小(P0.05),而0.1~10μmol/L zacopride可部分恢复甚至完全逆转ouabain对I_(K1)的抑制作用,其中1μmol/L为最大效应浓度。Ouabain使RMP减小(P0.05),应用zacopride(0.1~10μmol/L)后,RMP呈不同程度地增大,zacopride在1μmol/L时达最大效应浓度,使RMP增大至接近正常水平。1μmol/L的zacopride可有效抑制ouabain诱发的成年大鼠心室肌细胞DADs,使其发生率由91.67%下降至12.50%(P0.05);在灌流液中加入1μmol/L BaCl_2后,DADs再次出现。结论:内向整流钾通道激动剂zacopride对ouabain诱发的成年大鼠室性心律失常具有明显抑制作用,其机制与zacopride适度增强I_(K1)、使RMP负值增大并抑制DADs有关。     

医学生理学虚拟仿真项目的设计与实现

生理学是一门重要的医学基础课程。在生理学教学中引入虚拟仿真技术,将部分授课内容情境化、可视化,并实现人机交融和互动,对传统教学模式将是重要的补充和提升。在生理学虚拟仿真项目的设计和开发中,要以教学目标为导向,贴合教学内容,注重思维培养,合理运用先进的多媒体技术,虚实结合,使虚拟仿真项目更好地为教学服务。     

Na~＋/Ca~（2＋）交换体α-2（807-844）抗体的制备及其对大鼠心肌细胞Na~＋/Ca~（2＋）交换电流的抑制作用

目的在制备和纯化抗心肌Na＋/Ca2＋交换体α-2（807-844）肽段抗体的基础上,观察抗体对大鼠心肌细胞Na＋/Ca2＋交换电流及L型钙电流（ICa）、瞬时外向钾电流（Ito）和内向整流钾电流（Ik1）的影响。方法利用人工合成的α-2（807-844）多肽免疫兔制备抗α-2（807-844）抗体,抗血清经Protein A亲和柱纯化,利用全细胞膜片钳技术观察纯化后抗体对心肌细胞Na＋/Ca2＋交换电流（INa/Ca）、L型钙电流（ICa）、瞬时外向钾电流（Ito）和内向整流钾电流（Ik1）的影响。结果经主动免疫,抗Na＋/Ca2＋交换体α-2（840-877）抗血清效价达1∶243 000,纯化后抗α-2（840-877）抗体浓度为7.21mg/mL。纯化后的抗体在SDS-PAGE时出现清晰的2条带,其分子量分别为25kD和50kD左右。在1nmol/L～104nmol/L浓度范围内,抗α-2抗体对成年大鼠心肌细胞外向和内向Na＋/Ca2＋交换电流均表现为剂量依赖性的抑制作用;对Ito和Ik1则均未见明显影响。此外,104nmol/L该抗体对L型钙电流亦具有抑制作用。通过氨基酸序列比对发现,α-2（807-844）肽段与L型钙通道第2结构域孔环（697～730位氨基酸）序列相似度为23.7%,可能是抗体对L型钙通道出现交叉反应的原因。结论在1nmol/L～103nmol/L浓度范围内,抗心肌Na＋/Ca2＋交换体α-2（807-844）抗体可特异性抑制大鼠心肌Na＋/Ca2＋交换活动;对L型钙通道电流、瞬时外向钾通道电流和内向整流钾通道电流均未见明显影响。     

抗心肌Na~+/Ca~(2+)交换体α-1_(138-177)抗体对心力衰竭大鼠心肌Na~+/Ca~(2+)交换电流的抑制作用

目的观察抗心肌Na+/Ca2+交换体α-1(138-177)抗体对心力衰竭大鼠心肌Na+/Ca2+交换电流的影响。方法通过腹主动脉结扎建立心力衰竭模型,利用人工合成的多肽免疫兔制备抗α-1抗体,应用酶解法分离心肌细胞,利用全细胞膜片钳技术观察抗α-1抗体对心力衰竭大鼠心肌Na+/Ca2+交换电流的作用。结果 10μmol/L的抗α-1抗体使内向和外向的Na+/Ca2+交换电流分别从给药前的(9.0±2.7)、(13.7±3.6)pA/pF降至(4.5±1.7)、(6.5±2.3)pA/pF(P<0.05)。结论抗α-1(138-177)抗体对心力衰竭大鼠心肌细胞Na+/Ca2+交换电流具有抑制效应。