新生期小鼠胰岛细胞凋亡及其机制的研究

目的 观察新生期小鼠胰岛细胞凋亡的变化特点并分析细胞凋亡相关基因的表达差异,初步探讨相关机制.方法 采用胶原酶消化法分离纯化第1、3和8周小鼠胰岛细胞,以磷脂结合蛋白V-绿色荧光素/碘化丙啶双染法流式细胞术检测细胞凋亡率.透射电镜观察胰岛细胞凋亡形态,原位末端脱氧核苷酸转移酶标记（Tunel）/胰岛素免疫荧光双染法检测凋亡.采用实时定量PCR技术检测凋亡相关基因mRNA的表达.采用Western blotting技术检测促凋亡基因和抗凋亡基因的表达.多组间统计数据比较采用单因素方差分析.结果 （1）新生期小鼠胰岛细胞凋亡率在3周时显著增加,明显高于1周和8周[分别为（10.53±2.61）％、（1.80±0.69）％、（3.26±0.94）％,F=32.09,P＜0.01].透射电镜结果显示新生第3周小鼠胰岛细胞核出现凋亡早期改变.3周时Tunel/胰岛素双阳性细胞数明显高于1周和8周.（2）新生期小鼠胰岛细胞凋亡相关基因的表达呈动态变化,3周时,促凋亡基因Fas和FasL的mRNA表达均明显高于1周和8周（分别为1.53±0.21、1.00±0.00、0.46±0.24,F=24.85,P＜0.01;2.63±0.56比1.00±0.00、0.52±0.14,F=32.77,P＜0.01）,抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达明显低于1周和8周（分别为0.30±0.23、1.00±0.00、1.71±0.00,F=78.06,P＜0.01）.（3）3周时,Fas、FasL和裂解的Caspase-3蛋白表达均明显高于1周和8周（分别为2.05±0.16、1.00±0.00、0.59±0.24,F=61.47,P＜0.01;3.54±0.86、1.00±0.00、0.72±0.26,F=27.04,P＜0.01;5.74±0.59比1.00±0.00、3.11±0.20,F=128.79,P＜0.01）;Bcl-2蛋白表达明显低于1周和8周（0.62±0.13比1.00±0.00、1.90±0.10,F=151.08,P＜0.01）.结论 Fas/FasL以及Bc1-2介导的细胞凋亡信号通路可能参与新生期小鼠胰岛细胞凋亡的调控.     

围妊娠期小鼠胰岛细胞增殖及Survivin表达变化的研究

目的 观察围妊娠期小鼠胰岛β/α细胞量、细胞增殖、Survivin表达变化以及大鼠胰岛细胞瘤细胞株INS-1干扰Survivin表达后催乳素刺激细胞增殖的变化,探讨Survivin与妊娠期胰岛细胞扩增的关系.方法 采用免疫组化染色法检测C57 BL/6雌性小鼠非妊娠对照组（NP）和妊娠10.5、14.5、18.5 d（P10.5、P14.5、P18.5）、产后4、8 d（AP4、AP8）（每组各25只）胰岛β/α细胞量的变化.采用胶原酶消化法分离纯化小鼠胰岛,以流式细胞术检测细胞周期,实时定量聚合酶链反应及Western blotting法检测Survivin mRNA和蛋白的表达.采用脂质体转染siRNA方法干扰INS-1细胞Survivin的表达,催乳素刺激后检测细胞周期.多组数据组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用最小差异显著性分析.结果 妊娠期胰岛β/α细胞量均显著增加,高峰在P18.5,与NP组相比,β细胞量增长2.1倍（3.84±0.38比1.81 ±0.09,t =4.75,P＜0.05）,α细胞量增长1.6倍（0.92±0.13比0.56 ±0.08,t =2.69,P＜0.05）,至AP8恢复至NP水平.妊娠期小鼠胰岛细胞增殖显著增加,高峰在P14.5,与NP组相比,增殖指数增长2.7倍（23.07±1.88比7.72±1.12,t=10.89,P＜0.05）,产后恢复正常.Survivin mRNA表达水平在妊娠期明显增高,高峰在P14.5,与NP组相比,增长6.7倍（6.69±1.61比1.00 ±0.00,t =4.57,P＜0.05）,产后恢复正常.P10.5时Survivin蛋白开始表达,高峰在P14.5,与P10.5相比增长3.6倍（3.63±0.26比1.00±0.00,t=9.98,P＜0.05）,P18.5时表达逐渐下降,P20.5时表达消失.催乳素可显著刺激INS-1细胞增殖,而siRNA干扰INS-1细胞Survivin表达后,细胞增殖受阻.结论 妊娠期小鼠胰岛细胞出现明显扩增,并伴有Survivin的动态表达.Survivin介导催乳素刺激的胰岛β细胞扩增作用.     

调节性B细胞与自身免疫性糖尿病

调节性B细胞在自身免疫性糖尿病的发生、发展、转归过程中起重要调节作用.通过产生白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β1(TGF-β1)等抑制性细胞因子介导免疫耐受.体外诱导分泌TGF-β1的调节性B细胞可以为自身免疫性糖尿病的治疗提供新的方法.抗CD20单克隆抗体治疗自身免疫性糖尿病可使调节性B细胞数量增加.     

人类白细胞抗原A和DRB1基因与1型糖尿病的相关性研究

目的研究江苏地区人类白细胞抗原（HL4）-A和月出-DRBl基因频率及单倍型与1型糖尿病的相关性。方法于2008至2009年在江苏省江阴市和南京市选择自发酮症急性起病、依赖胰岛素治疗的1型糖尿病门诊或住院患者51例（1型糖尿病组）,其中男27例,女24例,平均发病年龄（14±9）岁。另以2002至2006年登记加入中华骨髓库江苏分库的汉族无关骨髓捐献志愿者HLA分型资料20248份为对照。从受试者外周血中提取细胞基因组DNA,利用聚合酶链反应-寡核苷酸探针序列特异性引物技术进行HLA—A和月似-DRBl基因分型,应用Arlequin软件分析计算单倍型频率及连锁不平衡情况,通过卡方检验等比较组间基因频率、单倍型频率及疾病相关性分析。结果HLA-A点频率最高的为A＊02和A＊24,HLA-DRBl位点频率最高的为DRBl＊09。与对照组相比,1型糖尿病组HLA—A＊3[6．86％（7／102）比2．43％（984／40496）,X^2=8．40,P〈0．01,比值比（OR）=3．00]、A＊24[27．45％（28／102）比16．79％（6799／40496）,X^2=8．27,P〈0．01,OR=1．87]和DRBl＊09[32．35％（33／102）比16．15％（6540／40496）,X^2=19．69,P〈0．01,OR=2．47]、DRBl＊03[15．69％（16／102）比4．76％（1927／40496）,X^2=26．66,P〈0．01,OR=3．69]频率显著升高。A＊01-DRBl＊03在连锁不平衡分析中为1型糖尿病组所特有。结论检测出位点A＊03、A＊24及DR03、DR09对1型糖尿病的易患性,发现3个有易患作用的A—DR单倍型,观察到与1型糖尿病关联的祖先单倍型A01DR03。     

跨学科团队精细血糖管理在非内分泌科胰岛素泵治疗患者中的应用与效果

目的 :构建非内分泌科胰岛素泵治疗患者的跨学科团队精细血糖管理模式,并评价其应用效果。方法 :将非内分泌科接受胰岛素泵治疗的患者327例按新模式实施时间分组,2017年4-9月的174例患者为对照组,采用多学科协作管理模式;2017年10月至2018年3月的153例患者作为观察组。根据临床需求在循证基础上成立跨学科专家团队,全程设计精细化血糖调整方案,实施以胰岛素泵师护理补充处方形式运行的跨学科团队精细血糖管理模式。比较精细血糖管理前后的血糖管理质量。结果:精细血糖管理后目标范围血糖占比由41.2%升高至49.4%(P0.001),严重高血糖占比由9.8%降低至7.9%(P0.001);严重低血糖及低血糖占比均有升高(0.0%VS 0.1%,0.4%VS 0.5%),但差异无统计学意义(P0.05)。结论 :跨学科团队精细血糖管理有利于改善非内分泌科胰岛素泵治疗患者的血糖管理质量。     

儿童青少年代谢综合征诊治进展

代谢综合征(MS),包括胰岛素抵抗、肥胖、高血压、高脂血症等,是成人动脉粥样硬化性心脏病及2型糖尿病的一系列潜在危险因素。新近研究发现儿童及青少年时期已出现一系列MS的表现,且相关危险因素的存在与其成年后MS的发生密切相关,在儿童及青少年期即开始重视防治MS是控制MS及相关心血管并发症的重要手段,必须引起高度重视。     

胰高血糖素瘤一例报告

胰高血糖素瘤临床上极为罕见 ,年发病率约为 0 .0 1 /百万～0 .1 /百万。因此 ,临床医师对此症的认识甚少 ,极易发生误诊。现报告一例因误诊半年最后剖腹探查而确诊为胰高血糖素瘤的病例。女性患者 ,61岁 ,因“多尿、多饮、多食、消瘦伴反复出现皮肤红斑疹及口腔疼痛半年”于 2 0 0 1年住院。患者半年前无明显诱因出现口干、多饮、多尿、多食 ,体重下降近 1 0ｋｇ,同时皮肤反复出现游走性红斑 ,瘙痒 ,发生的部位主要在双下肢 ,臀部及背部 ,开始为不规则的红斑 ,继之隆起形成大疱 ,然后破溃、结痂 ,愈合后有色素沉着。还表现出口角、口腔的疼…     

葡萄糖、胰岛素对内皮细胞一氧化氮和内皮素1分泌影响的对比研究

牛主动脉内皮细胞体外培养时 ,高浓度葡萄糖和胰岛素促使内皮素 1水平升高而降低一氧化氮水平 ,提示这些变化能促进糖尿病性高血压的发生发展。