胰岛新生相关蛋白对胰岛β细胞增殖和胰岛素分泌功能的影响

目的 观察胰岛新生相关蛋白对胰岛β细胞增殖和胰岛素分泌功能的影响.方法 INS-1细胞购自上海拜力生物科技有限公司.葡萄糖刺激实验中,INS-1细胞被分为实验组（50 mg/L胰岛新生相关蛋白与INS-1共培养）和对照组,经2.8、16.7 mmol/L含葡萄糖1640培养液刺激1 h后,采用放射免疫法检测上清液中胰岛素含量.另设立24、48 h组,分别以1、10、25、50、100、250、500 mg/L胰岛新生相关蛋白、INS-1细胞共培养,24或48 h后检测吸光度值.逆转录聚合酶链反应中,INS-1细胞被分为实验组（50 mg//L胰岛新生相关蛋白与INS-1共培养）和对照组,检测PCNA、Cyclin d1、Cdk4、P27、p38MAPK、JNK mRNA表达水平.采用t检验和单因素方差分析进行数据统计.结果 2.8 mmol/L葡萄糖刺激下,实验组胰岛素释放量高于对照组[分别为（74±16）、（39±9）mU/L,t=3.96,P＜0.05];16.7 mmol/L葡萄糖刺激下,实验组胰岛素释放量亦高于对照组[分别为（78±9）、（46±10）mU/L,t=4.72,P＜0.01].随着胰岛新生相关蛋白浓度增加,INS-1细胞增殖更为明显,具有剂量依赖性,且刺激48 h的效应强于24 h.50 mg/L胰岛新生相关蛋白干预24 h后,实验组和对照组相比,PCNA、Cyclin d1、Cdk4 mRNA表达上调（t值分别为7.64、5.98、12.87,均P＜0.01）,P27、p38MAPK、JNK mRNA表达下降（t值分别为10.61、27.64、2.95,均P＜0.05）.结论 胰岛新生相关蛋白干预后,INS-1细胞胰岛素释放水平增加,胰岛细胞数量增多,这可能与其影响细胞周期调控基因的表达有关.     

新生小鼠胰岛增殖及口袋蛋白家族、E2F转录因子表达变化

目的 观察新生小鼠胰岛细胞、细胞周期和视网膜母细胞瘤蛋白（Rb）、视网膜母细胞瘤样蛋白1（p107）、视网膜母细胞瘤样蛋白2（p130）及E2F转录因子的变化特点,探讨其与胰岛细胞增殖的关系.方法 采用免疫组化法检测出生第1、3和8周小鼠胰岛β/α细胞量、单个细胞面积和细胞数量的变化.采用胶原酶消化法分离纯化小鼠胰岛,以流式细胞术检测细胞周期,实时定量PCR及蛋白印迹技术检测Rb、p107、p130和E2F转录因子mRNA和蛋白表达.结果 （1）小鼠3周和8周胰岛β/α细胞量显著高于1周（P＜0.05）;单个β/α细胞面积在3周时无明显差异,8周时扩大1.7倍（P＜0.01）;而β/α细胞数量在3周增加约3.5/3.7倍（P＜0.01）,8周与3周无明显差异.（2）1周和3周时G0/G1期细胞比8周明显减少（81.3±1.2、82.8±3.3比92.6±1.3,F=6.5,P＜0.05）,而G2/M期显著增多（13.4±1.4、12.2±1.8比5.5±0.5,F=6.3,P＜0.05）,细胞增殖指数明显增加（P＜0.05）.（3）8周时Rb mRNA表达明显低于1周和3周（P＜0.01）;3周和8周时p107 mRNA显著低于1周（P＜0.05）,而p130 mRNA显著高于1周（P＜0.05）,E2F-1、E2F-2 mRNA均显著低于1周（均P＜0.01）;8周时E2F-3 mRNA显著低于1周（P＜0.05）;而E2F-4、E2F-5 mRNA在3周和8周时表达增加.（4）8周时Rb和p107蛋白表达均比1周明显降低,p130表达显著增高,3周和8周时E2F1表达显著降低（均P＜0.05）.结论 新生小鼠胰岛细胞量扩增明显,以细胞数量增加为主,细胞增殖显著.Rb、p107、p130及其相关E2F转录因子的表达存在动态变化,可能参与细胞增殖的调控.     

高糖对小鼠胰岛和胰岛b细胞株INS-1E的长期作用

目的探讨高糖对胰岛B细胞INS-1E和小鼠胰岛的慢性作用。方法雌性NMRI小风6-10周龄,苯巴比妥腹腔注射麻醉,应用胶原酶技术消化胰腺分离胰岛。传代培养的INS-1E细胞和分离的小鼠胰岛分别于含11．1,25．0mmol/L葡萄糖的RPMll640培养液中培养72h,然后于含3．3,16．7mmol／L葡萄糖的Krebs-Ringer缓冲液中培养60min,留取上清液行胰岛素测定。INS-1E细胞在含不同浓度的葡萄糖的RPMI1640培养液中培养72h,提取其总RNA,合成相应的cDNA,再行RT-PCR检测胰十二指肠同源异形盒-1（Pdxl）,胰岛素1（Insl）,胰岛素2（Ins2）和葡萄糖转运子2（Glut2）的基因表达。结果高糖培养后INS-1E细胞和小鼠胰岛的基础INS分泌增加[INS-1E细胞：（10．47±0．78）vs（7．71±0．59）ng／10000细胞,P〈0．01;小鼠胰岛：（3．85±0．26）vs（2．18±0．21）μg／L,P〈0．001],糖刺激的INS分泌减少[INS-1E细胞：（17．11±1．98）vs（30．76±2．20）ng／10000细胞,P〈0．001;小鼠胰岛：（14．78±1．03）VS（20．46±1．49）μg／L,P〈0．01];高糖处理后INS-1E细胞的Pdxl,Insl,Ins2和Glut2的mRNA水平下降。结论高糖对胰岛β细胞具有慢性毒性作用。     

肺炎衣原体感染影响胰岛β细胞增殖和功能的体外研究

目的 探讨肺炎衣原体(C.pn)感染对胰岛β细胞增殖和功能的影响.方法 将C.pn在人喉癌细胞系(HEp-2细胞)中增殖培养后,以感染复数为0.08、0.20,干预时间为6,24 h的C.pn感染体外培养的胰岛β细胞系(INS-1细胞),通过光镜下观察细胞形态变化及免疫荧光单克隆抗体染色方法确认感染模型的建立.在不同感染复数(0,0.04,0.08,0.10,0.12,0.14,0.16,0.20)、不同干预时间(2,4,6,8,16,24,36 h)的C.pn作用下,利用四甲基偶氮唑蓝法、台盼蓝活细胞计数及流式细胞仪观察C.pn感染对INS-1细胞增殖和凋亡的影响;并通过放射免疫法测定C.pn感染后经高糖(25 mmol/L)和低糖(5.6 mmol/L)刺激的INS-1细胞胰岛素分泌量.结果 与正常对照组相比,小剂量(0.08)加短时间(6 h)C.pn感染组INS-1细胞密度增加,细胞间隙变窄,大剂量(0.20)加长时间(24 h)C.pn感染组INS-1细胞骤缩、变圆、仍聚团生长.免疫荧光单克隆抗体染色显示特异性亮绿色荧光,证实C.pn感染INS-1细胞的体外模型成功建立.与正常对照组相比,小剂量(＜0.20)加短时间(＜24 h)的C.pn感染促进INS-1细胞增殖(t=-8.907,P ＜0.05)及INS-1细胞分泌胰岛素(t=-9.186,P＜0.05),而大剂量(＞0.20)加长时间(＞24 h)的C.pn感染则促进INS-1细胞凋亡(t=-37.306,P＜0.05)且抑制INS-1细胞分泌胰岛素(t=9.592,P＜0.05).结论 C.pn感染对胰岛β细胞增殖和功能具有双向作用,可为2型糖尿病早期防治提供新思路.     

长春新碱对INS-1细胞hTERT、Sp1、c-myc基因表达影响的研究

目的观察抗肿瘤药物长春新碱（Vincristine,VCR）对大鼠胰岛B细胞瘤株INS-1细胞增殖和侵袭的抑制作用和hTERT、Sp1、c-myc表达的影响及其意义,探讨胰岛B细胞瘤的发病机制。方法 INS-1分为对照组（不加VCR）和实验组（加入浓度分别为0.008 mg/mL、0.04 mg/mL、0.2 mg/mL、1 mg/mL的VCR）。两组培养24 h后,用MTT比色法检测INS-1细胞的增殖抑制率;用Transwell侵袭试验检测INS-1细胞的侵袭力;RT-PCR检测各组细胞中hTERT、Sp1、c-myc基因的表达。结果实验组抑制率明显高于对照组（P〈0.05）;且随着VCR浓度的增加,INS-1细胞生长抑制率逐渐增加（P〈0.05）;Transwell小室培养细胞24 h后,实验组侵袭到下层膜的细胞数为（63.26±5.12）个,对照组为（150.65±4.02）个（P〈0.01）;与对照组比较,随着时间的延长,实验组的hTERT、Sp1、c-myc mRNA基因在INS-1细胞的表达也逐渐减弱（P均〈0.05）。结论 VCR能抑制INS-1细胞增殖和侵袭,可能通过抑制Sp1、c-myc和hTERT表达,从而抑制INS-1的端粒酶活性,进而抑制细胞增殖和降低侵袭能力。     

妊娠期大鼠胰岛β细胞适应性变化的研究

目的 探讨大鼠妊娠期胰岛β细胞的变化节律.方法 采用口服糖耐量试验、胰岛素释放试验以及大鼠胰岛对葡萄糖刺激下的胰岛素分泌试验研究大鼠妊娠期胰岛β细胞的功能改变特点.并用5-溴尿脱氧嘧啶核苷(BrdU)标记和抗胰岛素抗体免疫组化双染法研究大鼠妊娠期胰岛β细胞增殖的变化.结果 与正常对照组相比,大鼠妊娠期表现出空腹血糖减低的趋势,但未出现糖耐量的异常.与此同时,糖负荷后胰岛素的分泌从孕14.5 d开始增强并持续至孕20.5 d.体外胰岛β细胞的分泌能力则从孕12.5 d开始显著增强直至孕20.5 d.此外,大鼠妊娠期胰岛β细胞的增殖指数(PI)从孕12.5 d开始显著升高,孕14.5 d达到高峰.大鼠妊娠期胰岛β细胞的面积亦明显高于正常水平.结论 大鼠妊娠期胰岛β细胞的功能和增殖均发生了改变,从孕12.5 d开始增强,孕中晚期变化最为显著,并持续至孕20.5 d.     

Zeste同源2与年龄相关性胰岛细胞功能关系的研究

目的 探讨增强Zeste同源2（EZH2）与年龄相关性胰岛细胞功能的关系. 方法 健康SD大鼠分为1、6、12及24月龄组,每组各6只.取大鼠胰腺,行免疫组化染色.Western blot检测胰岛内EZH2及胰岛素水平.行Ki67染色及TUNEL染色分别检测胰岛细胞增殖及凋亡. 结果 随年龄增加,胰岛内EZH2表达逐渐减少：1月龄组（0.22516±0.03091）;6月龄组（0.18427±0.02315）;12月龄组（0.03165±0.01675）;24月龄组0（P＜0.01）.胰岛细胞增殖逐渐减少：6月龄组（0.36±0.03）％;12月龄组（0.61±0.02）％;24月龄组（0.12±0.02）％（P＜0.01）.胰岛细胞凋亡逐渐增加：12月龄组（0.02±0.03）％;24月龄组（0.09±0.04）％（P＜0.01）.胰岛内胰岛素水平：1月龄组（206.5±27.8） mmol/L;6月龄组（267.4±25.3）mmol/L; 12月龄组（376.2±31.9）mmol/L; 24月龄组（187.8±25.1）mmol/L （P＜0.01）. 结论 随年龄增加,胰岛细胞逐渐衰老,胰岛细胞内EZH2表达逐渐减少,伴随着胰岛细胞增殖能力下降,凋亡增加,胰岛素水平逐渐减低.     

利拉鲁肽在体内外调节microRNA促进胰岛β细胞增殖

目的探讨利拉鲁肽对db／db小鼠胰腺及大鼠胰岛细胞瘤细胞系INS-1中microRNA表达的影响。方法将20只4周龄雄性db／db小鼠按随机数字表法分为对照组和利拉鲁肽组（每组10只）。分别给予0．1ml生理盐水或300ng／g利拉鲁肽皮下注射,每E12次。8周后测定糖化血红蛋白,行腹腔注射葡萄糖耐量试验（TPGTT）。8周末处死小鼠,免疫组化法分析小鼠胰腺B细胞增殖水平;实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）测定小鼠胰腺microRNA（miR．375和miR-34a）的表达。INS-1细胞分别给予0．5mmol/L棕榈酸培养0、48、72h或100nmol／L利拉鲁肽预处理12h后,给予0．5mmol／L棕榈酸培养72h,RT—PCR测定miR-375和miR-34a表达水平。采用t检验及方差分析进行组间数据比较分析。结果与对照组相比,利拉鲁肽组小鼠糖化血红蛋白水平降低（分别为7．3％±0．3％和4．7％±0．6％,t=16．47,P〈0．01）;IPGTT血糖曲线下面积降低[分别为（4568-4-197）和（1927±127）mmol·L-1·min-1,t=26．53,P〈0．05];胰岛素曲线下面积增加[分别为（1080±247）和（2818±378）μg·L-1·min-1,t=7．73,P〈0．05]。免疫组化法显示,与对照组相比,利拉鲁肽组小鼠胰岛素阳性面积增加（分别为1．40±0．30和0．37±0．09,t=19．14,P〈0．01）,Brdu染色阳性细胞比例增加（分别为2．40％±0．22％和0．73％±0．10％,t=4．97,P〈0．01）。利拉鲁肽组小鼠胰腺miR-375与miR-34a表达较对照组分别降低50％（分别为1．1±0．3和2．2±0．5,t=3．08,P〈0．05）和71％（分别为1．1±0．3和3．8±1．2,t=2．80,P〈0．05）。棕榈酸培养使INS-1细胞miR-375表达呈剂量、时间依赖性增加,利拉鲁肽可抑制棕榈酸诱导的miR-375表达（F=7．20,P〈0．01）。结论microRNA可能是利拉鲁肽调节β细胞增殖的靶点之-。     

新生期小鼠胰岛细胞凋亡及其机制的研究

目的 观察新生期小鼠胰岛细胞凋亡的变化特点并分析细胞凋亡相关基因的表达差异,初步探讨相关机制.方法 采用胶原酶消化法分离纯化第1、3和8周小鼠胰岛细胞,以磷脂结合蛋白V-绿色荧光素/碘化丙啶双染法流式细胞术检测细胞凋亡率.透射电镜观察胰岛细胞凋亡形态,原位末端脱氧核苷酸转移酶标记（Tunel）/胰岛素免疫荧光双染法检测凋亡.采用实时定量PCR技术检测凋亡相关基因mRNA的表达.采用Western blotting技术检测促凋亡基因和抗凋亡基因的表达.多组间统计数据比较采用单因素方差分析.结果 （1）新生期小鼠胰岛细胞凋亡率在3周时显著增加,明显高于1周和8周[分别为（10.53±2.61）％、（1.80±0.69）％、（3.26±0.94）％,F=32.09,P＜0.01].透射电镜结果显示新生第3周小鼠胰岛细胞核出现凋亡早期改变.3周时Tunel/胰岛素双阳性细胞数明显高于1周和8周.（2）新生期小鼠胰岛细胞凋亡相关基因的表达呈动态变化,3周时,促凋亡基因Fas和FasL的mRNA表达均明显高于1周和8周（分别为1.53±0.21、1.00±0.00、0.46±0.24,F=24.85,P＜0.01;2.63±0.56比1.00±0.00、0.52±0.14,F=32.77,P＜0.01）,抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达明显低于1周和8周（分别为0.30±0.23、1.00±0.00、1.71±0.00,F=78.06,P＜0.01）.（3）3周时,Fas、FasL和裂解的Caspase-3蛋白表达均明显高于1周和8周（分别为2.05±0.16、1.00±0.00、0.59±0.24,F=61.47,P＜0.01;3.54±0.86、1.00±0.00、0.72±0.26,F=27.04,P＜0.01;5.74±0.59比1.00±0.00、3.11±0.20,F=128.79,P＜0.01）;Bcl-2蛋白表达明显低于1周和8周（0.62±0.13比1.00±0.00、1.90±0.10,F=151.08,P＜0.01）.结论 Fas/FasL以及Bc1-2介导的细胞凋亡信号通路可能参与新生期小鼠胰岛细胞凋亡的调控.     

腺病毒介导的过氧化物酶增殖激活受体-δ小发夹状RNA对胰岛细胞瘤细胞脂代谢的影响

目的 构建小发夹状RNA（shRNA）腺病毒沉默过氧化物酶增殖激活受体-δ（PPAR-δ）表达,探讨PPAR-δ在大鼠胰岛细胞瘤细胞（INS-1）脂代谢中的作用和地位.方法 用限制性内切酶Sal Ⅰ和HindⅢ将shRNA质粒pGenesil-1载体中的PPAR-δ-shRNA片段连同U6启动子一起切下,连接至线性化的穿梭质粒pAdtrack-CMV上,将pAdtrack-CMV与骨架质粒pAdeasy在腺病毒载体电转感受态细菌（BJ5183）中重组得到PPAR-δ-shRNA腺病毒重组质粒.限制性内切酶Pac Ⅰ线性化重组质粒后用脂质体转染试剂Lipofectamine 2000转染人胚肾细胞（HEK293）,包装得到含PPAR-δ-shRNA的病毒重组子,病毒重组子在HEK293细胞中扩增后,将收集的病毒液感染INS-1细胞、RT-PCR和Western blot检测PPAR-δ蛋白的表达.RT-PCR检测该病毒对INS-1细胞脂代谢相关基因酰基辅酶A氧化酶（ACO）、肉毒碱棕榈酸转移酶1（CPT1）、脂肪酸转运蛋白1（FATP1）、长链酰基辅酶A脱氢酶（LCAD）表达的影响,并检测INS-1细胞内甘油三酯含量的变化.采用SPSS 12.0软件进行统计学分析,组间差异采用方差分析.结果 成功构建了含有大鼠PPAR-δ-shRNA基因的重组腺病毒载体,病毒滴度为1×1010PFU/ml.重组腺病毒感染后INS-1细胞PPAR-δ mRNA和蛋白表达明显下降.与空病毒组相比,PPAR-δ-shRNA腺病毒使ACO的表达下降40%（分别为0.72±0.05,0.44±0.07,P＜0.05）,CPT1表达下降27%（分别为0.66±0.08,0.48±0.02,P＜0.05）,使FATP1的表达下降55%（分别为0.65±0.07,0.30±0.02,P＜0.05）,使LCAD的表达下降32%（分别为0.66±0.12,0.45±0.10,P＜0.05）.与空病毒组相比,PPAR-δ-shRNA腺病毒使INS-1细胞内甘油三酯含量上升65%（分别为5.27±0.19,8.68±0.34,P＜0.05）.结论 成功构建了PPAR-δ-shRNA腺病毒,该腺病毒能够抑制INS-1细胞的脂肪酸氧化,促进细胞内脂质沉积.     

沉默调节蛋白1抗胰岛INS-1细胞凋亡作用的研究

目的通过观察游离脂肪酸（FFA）对INS-1细胞沉默调节蛋白1（SIRT1）、活性氧（ROS）水平和凋亡的影响,探讨FFA损害胰岛B细胞功能及SIRT1保护细胞的机制。方法将INS-1细胞分为牛血清白蛋白（BSA）对照组和FFA组,作用36h后分别检测SIRT1mRNA水平、ROS水平和凋亡变化。构建SIRT1过表达质粒,转染INS-1细胞,再在上述两组条件下作用36h后分别检测ROS水平和凋亡变化。结果与BSA组比较,FFA组SIRT1mRNA相对表达量下降（0．50±0．127251．02±0．08,P〈0．01）、ROS水平明显增加（458．15±134．94725132．86士51．80,P〈0．01）、凋亡增加（36．55±8．16vs5．85±1．65,P〈0．01）。在FFA作用下,SIRTl过表达质粒转染INS-1细胞后较转染前ROS水平下降（284．80±87．97vs458．15±134．94,P〈0．01）,凋亡减少（18．72±7．13vs36．55±8．16,P〈0．01）。结论FFA对INS-1细胞功能的损害与氧化应激有关,而SIRT1过表达可减少ROS产生,减少凋亡,从而保护INS-1细胞功能。     

磺脲类药物对胰岛β细胞凋亡的影响

目的观察第二代和第三代磺脲类药物对胰岛β细胞INS-1凋亡的影响。方法采用大鼠胰岛素瘤细胞INS-1作为胰岛β细胞模型,药物干预后观察细胞形态学变化,用MTT和TUNEL法检测细胞增殖、凋亡情况,并测定基础和高糖刺激后胰岛素（Ins）分泌量。结果与阴性对照组相比,药物干预细胞4h,低浓度格列美脲对细胞凋亡无影响（P〉0．05）,其他药物组细胞凋亡率明显增加（P〈0．05）;药物干预1d及4d,各药物组细胞凋亡率明显增加（P〈0．05）。结论磺脲类药物可以促进胰岛β细胞的凋亡,且呈时间一剂量依赖性增加,提示对2型糖尿病（T2DM）患者临床治疗时要合理用药。     

喹那普利对缺血性心肌病患者血清胶原含量的影响

目的:观察喹那普利对缺血性心肌病(ICM)胶原合成的影响,探讨阻止ICM心肌纤维化方法。方法:采用放免方法测定12例正常者及46例ICM患者应用喹那普利治疗6周前后心肌纤维化指标:血清Ⅰ型胶原的前胶原氨基末端肽(PⅠNP)和Ⅲ型胶原的前胶原氨基末端肽(PⅢNP)含量,超声心动图测舒张末期左室内径(LVEDd),室间隔厚度(IVST),左室后壁厚度(LVPWT),计算左室重量(LVMW)及左室重量指数(LVMI)。结果:①ICM患者血清PⅠNP、PⅢNP含量较正常组显著增高,并随心功能等级增加而升高(P均0.01);②喹那普利治疗后PⅠNP[(41.28±5.33)μg/L:(74.22±12.08)μg/L]、PⅢNP[(3.96±0.99)μg/L:(10±1.13)μg/L]含量较治疗前显著下降,Ⅰ/Ⅲ较治疗前显著降低[(10.98±2.51):(12.44±1.90),P均0.01];③治疗后LVEF[(0.59±0.06)%:(0.37±0.06)%]、二尖瓣血流舒张早期流速(VE)和心房收缩期流速(VA)比值VE/VA较治疗前明显升高[(1.05±1.101):(0.78±0.102),P均0.01],LVMI较治疗前明显降低[(97.27±14.41)g/m2:(113.07±10.21)g/m2,P0.01],PⅠNP、PⅢNP与LVMI呈正相关(r=0.561,P0.01;r=0.316,P0.05),与VE/VA呈负相关(r=-0.497,P0.01),与LVEF无明显相关性。结论:喹那普利可以抑制PⅠNP、PⅢNP合成,阻止ICM心肌纤维化,从而减轻左室重量,改善心室舒张功能。     

动力相关蛋白-1参与糖皮质激素诱导的胰岛β细胞凋亡

目的探讨动力相关蛋白-1（DRP-1）对糖皮质激素诱导的胰岛13细胞凋亡的影响。方法采用地塞米松（Dex）处理大鼠胰岛13细胞系INS-1细胞，通过亚G1（Sub-G1）法检测细胞凋亡，Westernblotting检测DRP-1的表达。利用四环素诱导表达系统在INS-1细胞构建可诱导表达野生型DRP-1（DRP-1wt）基因和突变型DRP-1（DRP-1 k38A）基因的稳转细胞系，并用细胞免疫荧光和Westernblotting验证强力霉素（Dox）对转染基因的可诱导性。采用TUNEL法分析在Dex处理情况下，DRP-1wt基因或DRP．1k38A基因表达对Dex诱导的胰岛B细胞凋亡的影响，并同时测定相应细胞凋亡蛋白酶Caspase-3活性及细胞内活性氧（ROS）的变化情况。多组间均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用t检验。结果不同浓度Dex处理组细胞凋亡率[（15．7±4．2）％、（30．4±3．3）％、（61．6±5．4）％]明显高于未处理组[（3．3±1．3）％，t=6．44、14．07、30．26，均P〈0．05]；200nmol／LDex处理24、48及96h后细胞凋亡率[（10．6±1．2）％、（15．1±4．6）％、（42．6±9．8）％]明显高于处理0h组[（2．4±1．3）％，t=2．99、4．63、14．66，均P〈0．05]。Westernblotting显示Dex可诱导胰岛β细胞DRP-1基因的表达。DRP-1wt基因表达能够显著促进Dex诱导的β细胞凋亡[（53．8±7．2）％比（16．2±3．2）％，t=10．02，P〈0．05]，而DRP-1k38A基因表达反而抑制Dex诱导的B细胞凋亡[（6．2±1．1）％比（14．5±1．8）％，t=10．63，P〈0．05]。DRP-1wt基因表达能够促进Dex诱导的caspase-3活化[（1979±132）比（921±182），t=11．13，P〈0．05]及ROS产生[（772±62）比（290±56），t=13．66，P〈0．05]，而DRP-1k38A基因表达反而抑制了Dex诱导的caspase-3活化[（506±47）比（681±44），t=5．25，P〈0．05]及ROS产生[（235±14）比（309±44），t=3．86，P〈0．05]。结论DRP-1参与了糖皮质激素诱导的胰岛β细胞凋亡。     

解偶联蛋白2基因表达对游离脂肪酸升高所致β细胞功能障碍的影响

目的观察血浆游离脂肪酸（FFA）水平短期升高对β细胞胰岛素分泌功能的影响,探讨线粒体氧化应激在其中的作用及机制。方法将24只8周龄体重160-170g雄性SD大鼠采用随机数字表法分为脂肪乳输注组（FFA组,12只）和生理盐水输注组（NS组,12只）。分别输注48h,检测以下指标：（1）采静脉血检测胰岛素和FFA水平;（2）静脉葡萄糖耐量实验,评价活体胰岛β细胞分泌功能;（3）胰岛细胞表面灌注实验,评价离体胰岛β细胞动态分泌功能;（4）实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法检测胰岛细胞胰岛素受体底物1和2（IRS-1、IRS-2）和解偶联蛋白-2（UCP-2）mRNA表达的变化。两组间差异比较采用独立样本t检验。结果FFA组血胰岛素水平较NS组增高[（25．2±2．3）比（18．6±1．7）mU／L,t=7．9,P〈0．05],FFA水平也显著高于Ns组[（1．39±0．18）比（0．64±0．10）mmol／L,t=12．8,P〈0．05]。FFA刺激后,FFA组活体和离体的胰岛β细胞分泌功能均较NS组增强[活体分别为（137±24）、（80±16）mU／L,t=6．8,P〈0．05;离体分别为（272±4）、（227±4）mU／L,t=28．6,P〈0．05]。与NS组相比,FFA组胰岛细胞IRS-1mRNA表达增加了29．3％4-2．6％（t=2．2,P〈0．05）,IRS-2mRNA及UCP-2mRNA表达分别增加了345．1％±4．7％、228．4％±4．2％（t=3．4、3．0,均P〈0．05）。结论血浆FFA水平短期升高对β细胞胰岛素分泌有刺激作用,但同时激活线粒体氧化应激,使UCP-2表达相应增加。     

mTOR／S6K1信号通路在高脂饮食诱导小鼠胰岛素抵抗发生中的作用

目的探讨mTOR及其下游效应因子S6K1在胰岛素抵抗（IR）发生中的作用。方法C57BL／6雄性小鼠20只随机平均分为正常饮食组（NC组）和高脂饮食组（HF组）。后者喂养14周后建立IR模型。检测两组血清胰岛素水平和葡萄糖耐量,显微镜下观察胰岛形态学变化;检测骨骼肌中mTOR和S6K1mRNA的表达,以及mTOR、S6K1和其磷酸化水平蛋白的表达。结果与NC组相比,HF组小鼠表现出明显的IR症状,其体重和空腹胰岛素分别升高了21．99％（P〈0．05）和181．82％（P〈0．01）;胰岛8细胞团面积也显著增加,糖耐量明显受损,骨骼肌细胞中mTOR mRNA和蛋白分别升高了25．61％（P〈0．05）和37．41％（P〈0．01）,S6K1 mRNA和蛋白分别升高了54．98％（P〈0．01）和37．36％（P〈0．01）,S6K1磷酸化水平蛋白表达在高脂饮食后升高了680．15％（P〈0．01）。结论mTOR／S6K1信号通路与高脂饮食诱导IR的发生密切相关。