MTT法检测NK和LAK活性的方法学探讨

获取不同来源的脾单个核细胞（人，鼠），用ＭＴＴ法检测了脾细胞的ＮＫ，ＬＡＫ活性，并对实验条件进行了探讨，寻找出了ＭＴＴ法检测ＮＫ，ＬＡＫ活性的最适效靶比（＜５０：１），最佳杀伤时间（ＮＫ２４小时，ＬＡＫ４８小时），探讨了实验的各操作步骤，检测数据的分析，处理，并与同位素法进行了比较，ＭＴＴ法的检测结果与同位素法有良好的一致性，但本方法操作简单，重复性好，且避免了同位素污染，经济，方便，不失为ＮＫ，     

肠胃舒胶囊治疗肿瘤相关腹泻与便秘疗效及调节机制研究

目的观察肠胃舒胶囊治疗肿瘤相关腹泻与便秘的疗效及调节机制。方法采用拆随机信封法、多中心竞争入组的临床试验方法,将2018年7月—2019年10月北京中医药大学东直门医院、河南省肿瘤医院、江西省肿瘤医院、广西中医药大学瑞康医院、广西中医药大学第一附属医院、安徽医科大学第一附属医院、中国中医科学院望京医院7家医院诊治的肿瘤化疗相关腹泻与肿瘤相关便秘患者随机分为治疗组与对照组。①肿瘤化疗相关腹泻:治疗组63例服用肠胃舒胶囊(4粒/次,每日3次),对照组30例服用香连片(5片/次,每日3次)。②肿瘤相关便秘:治疗组33例服用肠胃舒胶囊(4粒/次,每日3次),对照组28例服用麻仁润肠软胶囊(8粒/次,每日2次)。治疗时间均为2周。记录2组治疗前后便秘、腹泻症状积分,统计2组临床疗效,检测2组治疗前后血清胃蛋白酶原(PG)、血管活性肠肽(VIP)、胆囊收缩素(CCK)水平。结果治疗后2组患者便秘、腹泻症状积分均明显降低(P均<0.05),且治疗组患者腹泻症状积分明显低于对照组(P均<0.05)。腹泻和便秘患者治疗组总有效率分别为90.5%(57/63)和87.9%(29/33),对照组分别为76.7%(23/30)和67.8%(19/28),2组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。治疗后2组便秘患者血清PG水平有升高趋势(P均>0.05),对照组腹泻患者血清PG水平明显升高(P<0.05);治疗后治疗组便秘患者血清VIP水平有升高趋势(P>0.05),腹泻患者无明显变化(P>0.05);治疗后对照组便秘患者血清CCK水平明显升高(P<0.05)。结论肠胃舒胶囊对肿瘤相关腹泻、便秘有双向调节效果,其在降低腹泻症状积分方面具有明显优势,调节PG、VIP、CCK水平可能是肠胃舒胶囊治疗便秘、腹泻潜在的效应机制之一。     

迷迭香酸干预PI3K/Akt信号通路保护缺氧/复氧损伤血脑屏障功能的影响

[目的] 考察迷迭香酸对缺氧/复氧损伤血脑屏障功能的影响并探讨作用机制。[方法] 通过单层血脑屏障体外模型,考察药物对细胞活力、乳酸脱氢酶漏出率、跨细胞间电阻值、异硫氰酸荧光素-葡聚糖透过率的变化,同时分析相应关键信号分子的变化。[结果] 与正常对照组比较,缺氧/复氧损伤可导致细胞活力降低,乳酸脱氢酶漏出增加,跨细胞间电阻值降低,异硫氰酸荧光素-葡聚糖透过率增加,罗丹明123（Rh123）蓄积增多,提示缺氧/复氧损伤条件下内皮屏障功能受损。给予迷迭香酸后血脑屏障功能明显改善,分子信号显著上调。[结论] 迷迭香酸可通过激活PI3K/Akt信号通路发挥保护缺氧/复氧损伤的血脑屏障功能的作用。     

电针对胰岛素抵抗肥胖大鼠能量调控信号瘦素的影响

目的:观察"标本配穴"电针对胰岛素抵抗肥胖大鼠能量调控信号瘦素(Leptin)及瘦素受体(OB-Rb)的影响,探究电针治疗肥胖可能存在的机制。方法:24只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、电针组,每组8只。以高脂饮食建立胰岛素抵抗肥胖大鼠模型。电针组于"中脘""关元""足三里""丰隆"给予电针治疗,每次30 min,隔日1次,持续8周。比较各组大鼠体质量、进食量、腹腔糖耐量(IPGTT)、腹腔胰岛素耐量(IPITT)、血清胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量的变化,用Western blot法检测小肠和下丘脑中Leptin及OB-Rb蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠体质量、进食量、IPGTT、IPITT AUC及血清TC、TG含量均明显升高(P<0.01,P<0.05),小肠和下丘脑Leptin蛋白含量明显升高(P<0.05),小肠和下丘脑OB-Rb蛋白含量明显下降(P<0.05);与模型组比较,电针组大鼠体质量、进食量、IPGTT、IPITT及血清TC、TG含量均明显降低(P<0.05,P<0.01),小肠和下丘脑Leptin蛋白含量明显降低(P<0.05),小肠和下丘脑OB-Rb蛋白含量明显升高(P<0.01,P<0.05)。结论:电针可以通过上调OB-Rb的蛋白表达和增强Leptin与OB-Rb的结合力而改善Leptin抵抗,达到控制食欲、减轻体质量、降低血脂、改善胰岛素抵抗和维持能量平衡的目的。     

白细胞介素6基因启动子区两个突变位点多态性检测方法的建立

目的建立一种快速检测IL-6基因启动子区-597G／A、-572G／C多态性的双重实时荧光PCR方法。方法采用1对引物，2对荧光标记探针，结合荧光共振能量转移原理和熔点曲线分析技术，检测IL-6基因启动子区-572G／C，-597G／A2个位点多态性。结果用建立的双重实时荧光PCR方法对123名健康查体者进行检测，发现中国汉族人IL-6基因启动子区-572位点有3种基因型，分别为GG，GC，CC型；-597位点仅发现4名为GA型，其余均为GG型，尚未发现从型。结论双重实时荧光PCR法简便快速，与其他方法比较具有准确、经济的特点，适合临床基因快速分型。     

针刺苍白球内侧部对帕金森病模型大鼠脑内抗氧化酶的调节

目的；观察针刺苍白球内侧部对帕金森病模型大鼠行为学及纹状体抗氧化酶的影响。方法：①实验于2001—07／12在黑龙江中医药大学针灸生理实验室完成。选用健康Wistar大鼠45只。②选取35只大鼠，应用偏侧纹状体立体定位注射6-羟基多巴胺的方法制备帕金森病模型大鼠，将造模成功的帕金森病模型大鼠18只随机分为2组：模型组9只，治疗组9只．治疗组：借助脑赢体定位技术将改制的针灸针垂直刺入帕金森病模型大鼠患侧苍白球内侧部进行针刺治疗，1次／d，连续治疗1周；然后再应用G．6805Ⅱ型电针治疗仪进行电针治疗[强度1mA左右（以大鼠能耐受且不激怒、嘶叫为标准），频率为100Hz，连续波1，持续15min，1次／d，连续治疗2周。另取10只大鼠为空白对照组，在大鼠左侧纹状体区注射含0．2％的抗坏血酸的生理盐水5μL。模型组及空白对照组：不再做任何处理，正常饲养3周。③分别于钊刺治疗前、针刺后1周、电针后1周、电针后2周后于3组大鼠背部皮下注射阿朴吗啡0．5mg/kg诱发旋转，记录给药后10-40min内各组大鼠的旋转次数。④行为学检测完毕后，按照南京建成生物工程研究所试剂盒说明步骤，取组织匀浆上清液，通过722分光光度仪用化学比色法测定各组大鼠纹状体谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、丙二醛的含量。⑤计量资料差异比较采用t检验。结果：因造模失败脱失17只，进入结果分析28只。①治疗组从治疗后1周开始，旋转次数逐渐减少，针刺治疗后1周，电针治疗后1和2周分别比治疗前减少14．55％，49．50％，67，07％，即随着治疗时间的延长，帕金森病大鼠的行为学改变明显好转。针刺治疗后1周，其旋转次数与治疗前比较，差异不明显（P〉0．05）；电针治疗后1和2周，旋转次数明显少于治疗前（P〈0．01）。②模型组大鼠纹状体丙二醛含量明显高于空白对照组（P〈0．01）。治疗组大鼠纹状体丙二醛含量明显低于模型组（P〈0．01）。模型组超氧化物歧化酶含量与空白对照组比较，整异不明显（P〉0．05）。模型组大鼠谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶含量明显低于空白对照组和治疗组（P〈0．05-0．01）。3组大鼠纹状体超氧化物歧化酶含量差异不显著（P〉0．05）。结论：针刺苍白球内侧部可明显改善帕金森病模型大鼠的行为学，同时针刺苍白球内侧部可以减轻多巴胺能神经元的脂质过氧化反应，对氧化应激所引起的神经损伤且有保护作用。     

基于网络药理学研究脑血疏口服液治疗脑出血的作用机制

目的基于网络药理学研究脑血疏口服液治疗脑出血的作用机制。方法利用TCMSP数据库,筛选出脑血疏口服液的活性成分。通过DisGeNET、Genecards数据库,筛选出脑出血疾病相关的靶点,两者取交集得到相同的靶点。将交集基因用David软件进行GO注释分析和KEGG通路分析。采用Cytoscape3.7.1软件,建立单味药-成分-靶点网络模型、交集基因蛋白质相互作用网络模型、活性成分-靶点-通路网络模型;利用Ledock分子对接软件,验证预测结果。结果脑血疏口服液治疗脑出血的活性成分共56种,其中黄芪紫檀烷苷、槲皮素、汉黄芩素、川芎嗪、桉脂素等可能是重要物质基础。脑血疏口服液治疗脑出血的机制涉及靶标40个、相关信号通路20条,可能与PI3K-Akt、肿瘤坏死因子、细胞凋亡等信号通路有关,而且ESR1、AKT1、PIK3CA、AKT3、EGFR、PTGS2、MMP2、MMP3等靶点可能在治疗脑出血过程中起着关键性的作用。结论本研究基于整体观角度,通过网络药理学构建了脑血疏口服液治疗脑血出血的成分-靶点-信号通路的相互关联网络,系统揭示了该制剂治疗脑出血的主要药效物质以及作用机制,可为临床科学使用提供依据。     

谈乡镇卫生院临床实验质量管理的重要意义

随着高新技术在乡镇卫生院临床实验工作中的普及和应用，乡镇卫生院检验工作步入了科技新领域。因此，质量管理是检验学科建设的核心，没有检验报告的高质量，就谈不上学术的高水平，以人为本，一切为了病人的服务宗旨也就成为空话。随着我国法制建设的推进，病人的自我保护意识逐渐增强，对医疗质量的要求更高。2002年4月1日起开始施行的《最高人民法院关于民事诉讼证据的若干规定》中，     

循环酶法测定血清同型半胱氨酸的临床应用研究

目的探讨循环酶法(Enzymaticcyclingassay)测定血清同型半胱氨酸水平的临床应用价值。方法将循环酶方法与荧光偏振免疫法测定结果进行比较;首先利用高低值质控血清评价循环酶方法测定同型半胱氨酸的稳定性,并收集在我院住院且明确诊断的各20例糖尿病患者、高血压患者、冠心病患者、心梗脑梗患者、慢性肾功能不全患者及20名健康查体者的血清标本;另收集53例不同疾病患者血清标本,利用循环酶法与荧光偏振免疫法(FPIA)同时平行测定血清同型半胱氨酸水平。结果本方法的批内变异系数为3.07%(低值),3.99%(中值),4.21%(高值);批间变异系数分别为4.00%(低值),4.79%(中值)与4.58%(高值)。本法与荧光偏振免疫法相关性良好(r=0.994,n=53)。循环酶法测定不同疾病患者血清同型半胱氨酸水平分别为健康人(8.15±1.89)μmol/L,糖尿病组(8.88±1.36)μmol/L,高血压组(10.66±1.60)μmol/L,冠心病组(14.02±3.42)μmol/L,心梗或脑梗组(14.45±3.83)μmol/L,慢性肾功能不全组(15.21±3.50)μmol/L,结果与FPIA法测定值差异无统计学意义。结论循环酶法测定不同疾病患者血清同型半胱氨酸结果与临床上常规应用的FPIA法结果一致,但循环酶法可利用全自动生化分析仪快速、简便测定血清同型半胱氨酸。