针刺脊髓骶段对皮层兴奋性和膀胱功能的影响

目的：探讨针刺对大脑皮层兴奋性和膀胱功能的影响及其之间的相互关系，探讨脑干背外侧被盖区（LDT）胆碱能神经元在其中的作用。方法：将SD大鼠109只，乌拉坦麻醉，采用立体定位法，在额骨和顶骨上植入皮层电极进行脑电图（EEG）记录，通过玻璃微电极记录单个神经细胞的放电活动。用导管插入膀胱并用微量注射泵向内注入生理盐水，使膀胱收缩并记录其活动。以直径为0．35mm毫针手针刺激大鼠脊髓骶部第2、3节段旁开0．5cm处1min，深度3～4mm。结果：在膀胱充盈的情况下，当EEG表现为低幅度高频率的快波时，给予脊髓骶段手针刺激，膀胱活动受到抑制，与此同时EEG转变为高幅度低频率慢波的比例为6／27（22．2％），抑制效应开始于针刺后45S至12min。在膀胱空虚的情况下，针刺引起EEG转变为高幅度低频率慢波的比例为71／82（86．6％）。针刺引起LDT内的胆碱能神经元放电频率由（2．9±1．5）Hz下降到（1．2±0．6）Hz（n=12，P〈0．05，t-test），神经元放电活动的下降提前于EEG高幅度低频率的慢波的出现。结论：针刺脊髓骶段能降低大鼠大脑皮层的兴奋状态，并抑制膀胱活动，这种变化与针刺抑制了LDT胆碱能神经元的活动密切相关。     

脊髓损伤后跨神经元变性与功能重组的研究进展

有大量证据表明脊髓损伤后损伤远、近端存在跨神经元变性与功能重组。这些变化可以是有利的,也可能是有害的,甚至产生脊髓不可逆的病理改变。笔者就其相关研究进展做一综述。     

星形神经胶质细胞对PC12神经元突起生长发育的影响

背景星形细胞对神经元有提供营养、支持及调节突触活性作用,但它对神经元发育的影响还尚不清楚.目的探讨体外培养的Sprague Dawley大鼠大脑皮质星形细胞对PC12神经元突起生长发育的作用.设计完全随机设计,对照实验研究.方法以培养的星形细胞与PC12神经元按不同细胞数目比例(501～11)共同培养,并用其制备的条件培养液培养PG12细胞.主要观察指标用快速灵敏的MTT'比色法测定PC12神经元的细胞活力,用光学相差显微镜观察PC12细胞形态学变化.结果①星形细胞条件培养液可增强PG12细胞活力(MTT测定的A值由0.255±0.012提高到0.510±0.036,P＜0.001),却不能促使PC12神经元突起的生出.②当将星形细胞与PC12细胞按301～11的比例共同培养时,既可提高PC12细胞折光性和光晕又可促使其突起的生长;但按501～401的比例共同培养时,只观察到提高PC12细胞折光性和光晕,而无促使其突起生长发育的作用.结论PC12神经元细胞活力的提高与星形细胞分泌到条件培养液中的可溶性因子有关,而PC12神经元突起生长发育可能是和与星形细胞的直接接触以及二者的细胞数目比有关.     

Electrophysiological evidence of P2X2 receptor expression in the neurons of intracardiac and paratracheal ganglia

Objective： To investigate the expression of P2X receptors on rat intracardiac and paratracheal ganglion neurons. Methods： For preparation of intracardiac neurons, hearts were excised, the atria were separated and the medial region containing intracardiac ganglia was isolated and cut into pieces. For preparation of paratracheal neurons, the tracheas were removed and the superficial membranous layer containing paratracheal ganglia was rapidly isolated. Intracardiac and paratracheal ganglion neurons were dissociated after digestion by collagenase and trypsin. Whole-cell patch clamp recording was used to identify the pharmacological properties of P2X receptors in cultured neurons. Results：Neurons from these two ganglia responded to ATP with a rapidly activating, sustained inward current, αβ-meATP failed to evoke any re- sponses in paratracheal ganglion neurons while a few of intracardiac ganglion neurons responded to αβ- meATP with a tiny sustained inward current. ADP and UTP had no effect on intracardiac neurons. Lowering pH potentiated ATP responses in neurons from these two ganglia whereas increasing pH inhibited ATP responses. Co-application of Zn^2＋ potentiated ATP responses in intracardiac and paratracheal ganglion neurons. Conclusion： The receptor subtypes involved in intracardiac and paratracheal ganglia appear to be homomeric P2X2, while heteromeric P2X2/3 could not be completely excluded from intracardiac neurons.     

近交系胎鼠中脑多巴胺能神经元体外定向分化的初步研究

目的体外培养近交系大鼠胚胎腹侧中脑前体细胞(VMP)并诱导其分化为多巴胺能神经元(DN),为研究DN定向分化的分子机制提供细胞模型。方法取材胎龄11d的近交系大鼠胚胎VMP,体外用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)增殖培养7d后换用L-抗坏血酸-2-磷酸酯倍半镁盐(AA-2P)诱导分化为DN,随后进行免疫荧光染色鉴定。结果细胞总数扩增49.76倍,免疫荧光染色显示β-TubulinⅢ阳性的神经元中(71.33±20.42)%为TH阳性的DN,后者占细胞总数的(24.85±12.85)%。结论近交系大鼠VMP经体外原代培养能够得到较高比例的DN,可作为深入研究DN定向分化分子机制的细胞模型。     

神经保护剂鸡尾酒疗法对海马神经元氧糖剥离（OGD）后神经元凋亡及抗凋亡蛋白Bcl一2表达的影响

目的：探讨不同类型神经保护剂联合应用即鸡尾酒（cocktail）疗法是否较单一神经保护剂对海马神经元培养氧糖剥离（OGD）后有更好的保护作用。方法：采用海马神经元培养氧糖剥离（OGD）模型，分为1，6-二磷酸果糖（FDP）组、MK-801组、N-乙酰半胱氨酸（NAC）组、cocktail组和对照组，观察神经元凋亡及抗凋亡蛋白Bcl-2表达情况。结果：cocktail组神经元凋亡减少，Bcl-2表达增多，与单-用药各组相比有显著性差异（P＜0．05）。结论：神经保护剂cocktail疗法对神经元缺血保护作用较单一用药明显增强。     

急性缺氧对大鼠海马神经元钙激活钾通道的作用

目的:本实验采用膜片钳单通道技术研究缺氧条件下对培养新生大鼠海马神经元钙激活钾通道的作用;方法:取1 ～3天的SD大鼠海马神经元组织,制成细胞悬液,加入含80 %DMEM(dulbecco' s modified eagle' s medium)、20 %小牛血清培养基进行培养,将培养3 ～5天的形态典型的神经元置于对称性高钾溶液中,用膜钳技术记录单通道电流,其通道电流通过膜片钳放大器(CEZ -2200)放大,滤波(3KHz)后,经A/D、D/A转换器输入计算机,采用pClamp6 .0 .6软件采样分析;结果:在细胞贴附式下,应用氰化钠(20μmol/L)造成细胞急性缺氧,在缺氧早期(5 ～20 min)通道开放概率增加(P<0 .01或P<0 .05 ,n=5) ,而缺氧后期(20 ～30 min) ,通道开放概率明显降低,表明缺氧时间对通道的开放概率有明显影响。结论:缺氧早期神经元钙激活钾通道有自身激活作用,当钙激活钾通道激活时,钾离子外流增加,产生膜的复极化,使去极化不易产生,从而稳定细胞膜及降低细胞的兴奋性,这可能是缺氧早期神经元自身的一种代偿机制。     

损伤神经元阈下膜电位振荡的非线性特征分析

目的：对损伤后大鼠背根节的初级神经元产生的阈下膜电位振荡进行分析，确定阈下膜电位振荡是否具有非线性动力学特征。方法：采用相空间重构的方法进行非线性分析，利用平均互信息的第一个最小值确定相空间重构的延时时间，伪邻近点确定嵌入维数，Lvapunov指数确定非线性特征的存在。结果：平均互信息的第一个最小值为1；在分别取r=1，2，3时，相空间重构图没有明显的差异，均表现出很好的吸引子；在m&;gt;2时，伪邻近点接近0，达到了一个最小值；Lyapunov index=&;#177;0．43&;#177;0．01。结论：阈下膜电位振荡存在确定性的动力学特征，是一种低维(m&;lt;4)的混沌信号。     

细胞内游离Ca2+在发育中大鼠皮层神经元无镁诱导惊厥性损伤中的作用

目的: 观察细胞内游离Ca2+([Ca2+]i)在培养的不同发育阶段皮层神经元无镁诱导惊厥性损伤中的作用,探讨惊厥性脑损伤年龄依赖性的可能机制.方法:体外培养6 d、17 d的胚胎大鼠皮层神经元用无镁细胞外液处理3 h,或于无镁处理前用NMDA(N-甲基-D-门冬氨酸)受体拮抗剂或Ca2+通道阻滞剂预处理,用MTT代谢率测定的方法检测神经元损伤,以Fluo-3作标记用激光共聚焦显微镜扫描的方法检测[Ca2+]i.结果:体外培养6 d、17 d的神经元单纯无镁组MTT代谢率较同期对照组降低.应用MK-801 10 μmol*L-1、AP-5 50 μmol*L-1、尼莫地平10 μmol*L-1预处理后再给无镁处理,培养6 d、17 d的神经元MTT代谢率均不同程度高于同期单纯无镁组.培养6 d、17 d的神经元相对荧光强度之间差异有显著性,两者与基线荧光强度比较差异亦有显著性.应用上述各种拮抗剂后,[Ca2+]i改变的峰值均明显低于同期单纯无镁组.结论: 在体外不同发育阶段的神经元,短暂无镁处理诱导惊厥样放电所引起的神经元线粒体功能损伤以及[Ca2+]i改变程度不同.这种[Ca2+]i改变的年龄依赖性可能是惊厥导致神经元损伤的年龄依赖性的机制之一.NMDA受体-Ca2+通道激活是导致这种[Ca2+]i改变及神经元损伤的关键环节.     

匹罗卡品致(癎)大鼠海马中表达生长抑素的中间神经元数目变化及其轴突出芽

Objective To investigate the roles of somatostatin(SS)positive intemeurons in the development and compensation of temporal lobe epilepsy.Methods Piloearpine-induced epilepsy rat model was established.Immunohistochemistry method was used to detect number changes and axonal sprouting of SS positive intemeurons in different domains of the hippocampus at difierent time points.Degeneration of SS positive interneurons and their neurophils were detected by the double immunofluorescence staining with SS and Fluoro-Jade B(FJB)at 7 and 60 days after status epilepticus (SE).Results In the exoerimental rat group,the number of SS positive neurons decreased in each hippocampal domain,and it reached the lowest at 7 days post-SE(There were 11.1±3.3 in hilus,2.8±0.9 in CA1region and 1.8±0.7 in CA1region,t=13.519,9.644 and 8.808,all P<0.01).In chronic phase,the number of SS neurons gradually recovered,and exceeded the control group in CA1 area at 60 days post-SE(12.8±1.5 vs 8.8±1.3,t=-4.506,P<0.01),however,the number of SS neurons in the hilus(25.5±4.6)and CA1 area(4.8±0.8)remained significantly less than normal levels(t value were 4.691 and 3.953.both P<0.01).Increased SS positive fibers were found in the lacunosum-molecular (1m)layer and outer molecular layer of dentate gyrus after 30 days post-SE,and numerous SS positive fibers were seen threnghout the layers of area CA1 at 60 days post-SE.Double immunofluuorescence revealed that a few SS positive interneurons and fibers were also labeled by FJB in area CA1 at 7 days post-SE and in CA domain/hilus at 60 days post-SE.Conclusions SS intemeurons loss plays an important role in the development of temporal lobe epilepsy.The loss is partially caIlsed by the degeneration and death of neurons;SS positive neurophils increase within area CA1 in chronic phase may play a significant role in the generation and compensation of temporal lobe epilepsy.